【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在植物中表达重组蛋白时利用gb1结构域融合的表达增强效果，更详细地，涉及如下的方法：将源自链球菌(streptococcus)的蛋白g(protein g)的gb1结构域(domain)与所要增强表达的靶蛋白融合来制作gb1结构域融合结构体，并利用其增强重组蛋白表达。
技术介绍
1、通常，植物为容易转化，且作为蛋白质材料经济实惠，因此，在可用作生物药剂的蛋白质(biopharmceutical protein)及肽(peptide)的生产方面具有很大潜力。但是，到目前为止，大部分的生物医药通过将典型培养的哺乳动物细胞、细菌、霉菌等转化来生产的。但是，相比于这种哺乳动物细胞、细菌、霉菌，从植物生产治疗蛋白可减少病原菌污染引起的风险且获得高收率，并且，在如种子或其他储藏机构生产等经济方面和质量方面，具有各种优点。并且，植物可潜在地以低廉的价格生产重组蛋白，转化的谷类的耕种、收获、储藏、处理也可使用目前的基础结构，且仅需较少的资本投资，因此，在重组蛋白的商业生产方面，可成为非常有竞争力的生产方法。
2、因此，通过转化植物细胞来生产所要的有用蛋白的植物表达系统的开发备受关注。但是，当利用植物开发用于生产重组蛋白的平台时，最重要的目的之一是开发用于大量生产有用蛋白质的系统。作为提高植物中重组蛋白表达水平的方法，曾提出了插入具有多个n-糖基化部位的小结构域来诱导糖化，从而提高重组蛋白表达的方法，以及利用高效的5'-未翻译序列的方法(kang et al.2018,sci.rep.8:4612；kim et al.2
3、此外，重组蛋白的生产收率差异可能源于靶蛋白的固有特性，可根据靶基因具有不同的原因，但在优化对于表达宿主的异种基因的密码子的情况下，可提高靶蛋白的表达水平。并且，据报告，可通过将水溶性结构域融合到重组蛋白来促进重组蛋白的生产，实际上在大肠杆菌中可以融合gst、mbp及sumo结构域来增加靶蛋白溶解度，从而提高重组蛋白的生产量。
4、本专利技术人在探索从植物生产重组蛋白时能够提高表达水平的有效方法的过程中，发现在靶蛋白中将源自链球菌蛋白g(streptococcus protein g)的gb1结构域融合到靶蛋白n-末端的情况下，显著提高植物中重组蛋白生产率，从而完成了本专利技术。
技术实现思路
1、技术问题
2、本专利技术的目的在于，提供用于提高植物中重组蛋白表达量的新型表达系统。
3、解决问题的方案
4、为了实现上述目的，本专利技术提供一种融合蛋白，其中，靶蛋白；以及在上述靶蛋白的n-末端结合gb1结构域。
5、本专利技术的特征在于，上述gb1结构域由seq id no:1的氨基酸序列表示。
6、本专利技术的特征在于，在上述靶蛋白与上述gb1结构域之间还包括切割位点(clevagesite)。
7、本专利技术的特征在于，上述融合蛋白还包括细胞内细胞器靶向序列。
8、本专利技术还提供一种dna构建物(construct)，其中，包括编码上述融合蛋白的核苷酸序列。
9、本专利技术的特征在于，上述dna构建物在编码上述融合蛋白的核苷酸序列的5'-末端部位还包括5'utr序列。
10、本专利技术的特征在于，上述gb1结构域与靶蛋白的n-末端融合，来增加植物中靶蛋白的表达量。
11、本专利技术还提供一种植物细胞，其中，引入上述dna构建物或含上述dna构建物的重组载体。
12、本专利技术的特征在于，上述植物细胞来源于选自由拟南芥、大豆、烟草、茄子、辣椒、土豆、西红柿、白菜、萝卜、卷心菜、生菜、桃子、梨、草莓、西瓜、香瓜、黄瓜、胡萝卜、芹菜、水稻、大麦、小麦、黑麦、玉米、甘蔗、燕麦及洋葱组成的组中。
13、本专利技术还提供一种从植物细胞生产靶蛋白的方法，其中，包括如下的步骤：
14、步骤(a)，培养上述植物细胞；以及
15、步骤(b)，通过破碎培养的上述植物细胞来回收靶蛋白。
16、本专利技术的特征在于，当上述dna构建物在靶蛋白与gb1结构域之间还包括切割位点时，通过切割上述靶蛋白和gb1结构域来回收去除gb1结构域的靶蛋白。
17、本专利技术还提供一种转化植物，其中，引入上述dna构建物或含上述dna构建物的重组载体。
18、本专利技术的特征在于，上述转化植物选自由拟南芥、大豆、烟草、茄子、辣椒、土豆、西红柿、白菜、萝卜、卷心菜、生菜、桃子、梨、草莓、西瓜、香瓜、黄瓜、胡萝卜、芹菜、水稻、大麦、小麦、黑麦、玉米、甘蔗、燕麦及洋葱组成的组中。
19、本专利技术还提供一种从转化植物生产靶蛋白的方法，其中，包括如下的步骤：
20、步骤(a)，使上述转化植物生长；以及
21、步骤(b)，通过破碎从上述植物分离的组织来回收靶蛋白。
22、本专利技术的特征在于，当上述dna构建物在靶蛋白与gb1结构域之间还包括切割位点时，通过切割上述靶蛋白和gb1结构域来回收去除gb1结构域的靶蛋白。
23、专利技术的效果
24、本专利技术中，相比于为了生产重组蛋白而利用以往确立的动物细胞或微生物的情况，可减少病原菌污染引起的风险且获得高收率，相比于以往利用植物的情况，显著改善重组蛋白的生产量，在质量和经济方面具有多种优势，从而可成为在重组蛋白的商业生产中非常有竞争力的生产方法。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种融合蛋白，靶蛋白；以及在上述靶蛋白的N-末端结合GB1结构域。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，
3.据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，
5.一种DNA构建物，包括编码权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白的核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的DNA构建物，其特征在于，
7.根据权利要求5所述的DNA构建物，其特征在于，
8.一种植物细胞，引入权利要求5所述的DNA构建物或含权利要求5所述的DNA构建物的重组载体。
9.根据权利要求8所述的植物细胞，其特征在于，
10.一种从植物细胞生产靶蛋白的方法，包括如下的步骤：
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，
12.一种转化植物，引入权利要求5所述的DNA构建物或含权利要求5所述的DNA构建物的重组载体。
13.根据权利要求12所述的转化植物，其特征在于，
14.一种从转化植物生产靶蛋白的方法，包
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种融合蛋白，靶蛋白；以及在上述靶蛋白的n-末端结合gb1结构域。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，
3.据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，
5.一种dna构建物，包括编码权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白的核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的dna构建物，其特征在于，
7.根据权利要求5所述的dna构建物，其特征在于，
8.一种植物细胞，引入权利要求5所述的dna构建物...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄仁焕，尹雅凛，文炳好，宋时健，刁海平，
申请(专利权)人：浦项工科大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：
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