【技术实现步骤摘要】
本申请涉及分子生物学及作物育种，特别涉及小麦叶夹角基因taspl8新等位变异的caps标记与应用。
技术介绍
1、小麦是重要的粮食作物之一，提供了全球约～20％的食物热量，保证其稳产高产是确保粮食安全的关键环节(shiferaw et al.,2013)。小麦旗叶夹角是小麦高产育种中的重要性状之一。由于旗叶是光合作用的主要器官，为籽粒形成提供所需的碳水化合物，适当的旗叶夹角可以促进群体灌浆期光合作用和光能利用效率，从而增加小麦产量。因此，改良小麦旗叶夹角和形态对提高产量具有重要的意义。
技术实现思路
1、本申请要解决的技术问题是：如何鉴定小麦叶夹角大小。
2、为解决上述技术问题，本申请提供检测小麦基因组中wb24的多态性或基因型的组合物在如下任一种中的应用：
3、1)在鉴定或辅助鉴定小麦叶夹角角度大小中的应用；
4、2)在制备鉴定或辅助鉴定小麦叶夹角角度大小的产品中的应用；
5、3)在小麦育种或辅助小麦育种中的应用；
6、4)在制备小麦育种或辅助小麦育种的产品中的应用；
7、所述wb24为小麦基因组中的一个snp，其核苷酸种类为c或t，为seq idno.1第324位核苷酸。
8、其中，所述检测小麦基因组中所述wb24的多态性或基因型的组合物可为通过下述至少一种方法确定wb24的多态性或基因型。所需的试剂和/或仪器：限制性酶切片段长度多态性、dna测序、单链构象多态性、变性高效液相色谱和snp芯片。
9、进一步地，所述的应用中，所述组合物可包括引物对，所述引物对扩增包括所述wb24的小麦基因组dna片段。
10、进一步地，所述的应用中，所述引物对可由引物wb24f和引物wb24r组成；
11、所述引物wb24f可为核苷酸序列是seq id no.2的单链dna分子，
12、所述引物wb24r可为核苷酸序列是seq id no.3的单链dna分子。
13、进一步地，所述的应用中，所述组合物还包括限制性内切酶xmni。
14、本申请还提供上述的组合物。
15、本申请还提供鉴定或辅助鉴定小麦叶夹角角度大小的试剂盒，所述试剂盒包括上述的引物对和上述的限制性内切酶xmni。
16、所述试剂盒还可包括pcr扩增所需的其他试剂。
17、所述试剂盒还可包括限制性内切酶xmni对扩增产物进行酶切所需的其他试剂。
18、所述限制性内切酶xmni的切割位点如以下箭头指示。
19、5'g a a n n↓n n t t c 3'；
20、3'c t t n n↑n n a a g 5'；
21、n可为核苷酸a/t/c/g中的任一种。
22、本申请还提供一种鉴定或辅助鉴定小麦叶夹角角度大小的方法，所述方法包括检测待测小麦基因组中wb24的基因型，根据所述wb24的基因型鉴定或辅助鉴定待测小麦的叶夹角角度大小；所述wb24为小麦基因组中的一个snp，其核苷酸种类为c或t，为seq id no.1第324位核苷酸。
23、近一步地，根据所述待测小麦的基因型鉴定或辅助鉴定小麦的叶夹角角度大小为：
24、基因型为c/c和c/t的待测小麦叶夹角角度大于或候选大于基因型为t/t的待测小麦的叶夹角角度；
25、所述c/c是小麦基因组中所述wb24为c的纯合型；所述t/t是小麦基因组中所述wb24为t的纯合型；所述c/t是小麦基因组中所述wb24为t和c的杂合型。
26、进一步地，所述的方法中，所述检测待测小麦基因组中wb24的基因型包括a1)或a2)：
27、a1)测序；
28、a2)用上述的引物对对所述待测小麦基因组dna进行pcr扩增，再用限制性内切酶xmni酶切扩增产物，检测酶切产物条带数：根据所述酶切产物条带数判断所述待测小麦基因组中wb24的基因型。
29、进一步地，a2)所述的方法中，根据所述酶切产物条带数确定所述待测小麦基因组中wb24的基因型为：
30、如果酶切产物条带数为1条，则小麦基因组中wb24的基因型为c/c。如果酶切产物条带数为3条，则小麦基因组中wb24的基因型为c/t或t/t。
31、在本申请的一些实施方式中，鉴定或辅助鉴定小麦叶夹角基因新等位变异taspl8b基因型的方法包括如下步骤：
32、s1.提取待检测小麦基因组dna，对提取到的dna进行pcr扩增，获得扩增产物；所述pcr扩增使用的引物序列，其上游引物的序列为seq id no.2，下游引物序列为seq idno.3；
33、pcr扩增使用的引物序列：
34、wb24f：5’ttgcctagctactgcatcga 3’(seq id no.2)
35、wb24r：5’ccgagctgaaggatgttgcta 3’(seq id no.3)
36、s2.将扩增产物使用xmni限制性内切酶进行酶切，获得酶切产物；
37、s3.分析所述酶切产物的条带数目，当产生三段酶切产物时，对应待测小麦为纯合型的小叶夹角材料(wb24基因型为t/t)或杂合型材料(wb24基因型为c/t)；当酶切产物仅有一条主带时，对应待检测小麦为大叶夹角的材料(wb24基因型为c/c)。
38、所述步骤s1中，pcr扩增总体系为50μl，其中2×phanta flash master mix25μl，dna总量为200ng，20μm上游引物，20μm下游引物，加入ddh2o至50μl体系；反应条件为：98℃预变性30s，98℃变性10s，60℃退火5s，72℃延伸5s，共循环34次；最后72℃充分延伸1min。
39、所述步骤s2中，酶切总体系为10μl，其中xmni限制性内切酶0.2μl，pcr产物4μl，10×neb buffer为1μl，加入ddh2o至10μl总体系；反应条件为：酶切温度37℃，酶切反应时间30min。
40、本申请中，上述小麦或待测小麦可为a小麦和b小麦的杂交后代，所述a小麦为携带所述wb24的小麦，且所述wb24的核苷酸种类为c；所述b小麦为携带所述wb24的小麦，且所述wb24的核苷酸种类为t或为c和t。所述杂交后代可为f2代及其以上世代，如f2代，bc1f2、f3代等。
41、进一步地，所述b小麦具体可为携带所述wb24的小麦，且所述wb24的核苷酸种类为t。
42、在本申请的一些实施方式中，所述a小麦为小麦京411，所述b小麦本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测小麦基因组中WB24的多态性或基因型的组合物在如下任一种中的应用：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物包括引物对，所述引物对扩增包括所述WB24的小麦基因组DNA片段。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述组合物还包括限制性内切酶XmnI。
4.权利要求1-3中任一项所述的组合物。
5.鉴定或辅助鉴定小麦叶夹角角度大小的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2或3所述的引物对和权利要求3所述的限制性内切酶XmnI。
6.一种鉴定或辅助鉴定小麦叶夹角角度大小的方法，其特征在于，所述方法包括检测待测小麦基因组中WB24的基因型，根据所述WB24的基因型鉴定或辅助鉴定待测小麦的叶夹角角度大小；所述WB24为小麦基因组中的一个SNP，其核苷酸种类为C或T，为SEQ ID No.1第324位核苷酸。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述检测待测小麦基因组中WB24的基因型包括A1)或A2)：
8.权利要求6或7所述的方法在小麦育种中的应用。
10.DNA分子，其特征在于：所述DNA分子的核苷酸序列是SEQ ID No.1。
...【技术特征摘要】
1.检测小麦基因组中wb24的多态性或基因型的组合物在如下任一种中的应用：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物包括引物对，所述引物对扩增包括所述wb24的小麦基因组dna片段。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述组合物还包括限制性内切酶xmni。
4.权利要求1-3中任一项所述的组合物。
5.鉴定或辅助鉴定小麦叶夹角角度大小的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2或3所述的引物对和权利要求3所述的限制性内切酶xmni。
6.一种鉴定或辅助鉴定小麦叶夹角角度大小的方法，其特征在于，所述方法包括检测待测小麦基因组中wb24的基因型，根据所述wb24的基因型鉴定或辅助鉴定待测小麦的叶夹角角度大小；所...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘录祥，郭会君，白家兴，王秋实，谢永盾，熊宏春，赵林姝，古佳玉，李慧园，丁玉萍，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：
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