【技术实现步骤摘要】
本申请属于mrna疫苗，具体涉及一种rsv融合前f蛋白的突变体、核酸及mrna疫苗。
技术介绍
1、人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,rsv)属于副黏病毒科的肺病毒属(pneumovirus)，主要引起6个月以下婴儿患细支气管炎和肺炎等下呼吸道感染疾病，并会引起较大儿童和成人患鼻炎、感冒等上呼吸道感染疾病。rsv的形态为球形，具有包膜，直径约为120nm至300nm。rsv的基因组为单股负链rna，主要编码10种蛋白质，即为融合糖蛋白f、黏附糖蛋白g、小疏水蛋白sh、m1基质蛋白、m2基质蛋白、n蛋白、p蛋白、l蛋白、ns1非结构蛋白和ns2非结构蛋白。融合糖蛋白f(fusion glycoprotein,f)是激发机体产生保护性抗体的主要病毒抗原之一。
2、rsv是引起婴幼儿下呼吸道感染的重要病毒病原，绝大多数的婴幼儿在2岁以内感染过rsv至少一次。对于1岁以内的婴幼儿，rsv感染引起的死亡人数占总死亡人数的6.7％，仅次于疟疾。对于5岁以内的婴幼儿，rsv感染引起的死亡人数占总死亡人数的6.29％，仅次于肺炎球菌。在我国，26.5％的婴幼儿急性呼吸道感染是因rsv感染引起，老人和存在免疫缺陷的病人也易遭受rsv引起的严重感染，且有rsv感染史的人易出现肺功能异常、支气管哮喘等肺部疾病。
3、rsv疫苗是预防rsv感染的有效措施之一，随着mrna疫苗的快速发展，其安全性好、免疫效果强、生产速度快和应用范围广等相关优势迅速成为生物医药行业发展的热点方法。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种rsv融合前f蛋白的突变体、核酸及mrna疫苗，以解决现有技术中的存在的针对rsv的mrna疫苗普遍基于野生型rsv的融合前f蛋白制备，难以保证抗原具有稳定的融合前构象以诱导产生更高水平的中和抗体的技术问题。
2、为了实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
3、提供一种rsv融合前f蛋白的突变体，所述突变体由野生型rsv融合前f蛋白的全长或部分区域发生突变获得，所述突变包括以下氨基酸取代中的一个或多个：s155c，s190f，v207l，s290c，l373r，a149c，y458c，s46g，n67i，e92d，s215p，k465q。
4、在一个或多个实施方式中，所述突变包括以下氨基酸取代：s155c，s190f，v207l，s290c，l373r，a149c，y458c，s46g，n67i，e92d，s215p，k465q。
5、在一个或多个实施方式中，所述突变体由野生型rsv融合前f蛋白的全长发生所述突变获得，所述突变体包括如seq id no.1所示的氨基酸序列，或与如seq id no.1所示的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的氨基酸序列。
6、在一个或多个实施方式中，所述突变体由野生型rsv融合前f蛋白的胞外域发生所述突变获得，所述突变体还包括三聚体肽，所述三聚体肽包括如seq id no.2所示的氨基酸序列，或与如seq id no.2所示的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的氨基酸序列；所述突变体包括如seq id no.3所示的氨基酸序列，或与如seq id no.3所示的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的氨基酸序列。
7、为了实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
8、提供一种核酸，包括用于编码上述一实施方式所述的突变体的核苷酸序列，所述核酸包括如seq id no.3所示的核苷酸序列，或与如seq id no.3所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
9、为了实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
10、提供一种核酸，包括用于编码上述一实施方式所述的突变体的核苷酸序列，所述核酸包括如seq id no.4所示的核苷酸序列，或与如seq id no.4所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
11、为了实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
12、提供一种包括上述任一实施方式所述的核酸的核糖核酸分子，还包括结构元件，所述结构元件包括5’utr序列、3’utr序列和polya尾序列中的一个或多个。
13、在一个或多个实施方式中，所述5’utr序列包括如seq id no.5所示的核苷酸序列，或与如seq id no.5所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
14、在一个或多个实施方式中，所述3’utr序列包括如seq id no.6所示的核苷酸序列，或与如seq id no.6所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
15、在一个或多个实施方式中，所述polya尾序列包括至少100个a核苷酸；优选的，所述polya尾序列包括如seq id no.7所示的核苷酸序列，或与如seq id no.7所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
16、为了实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
17、提供一种dna分子，包括用于转录上述任一实施方式所述的核糖核酸分子的核苷酸序列。
18、为了实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
19、提供一种重组质粒，含有上述任一实施方式所述的dna分子。
20、为了实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
21、提供一种上述任一实施方式所述的核糖核酸分子、上述任一实施方式所述的dna分子或上述任一实施方式所述的重组质粒在制备呼吸道合胞病毒mrna疫苗中的应用。
22、为了实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
23、提供一种呼吸道合胞病毒mrna疫苗，其特征在于，包括上述任一实施方式所述的核糖核酸分子、疫苗载体和辅料，所述疫苗载体为脂质纳米颗粒。
24、为了实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
25、提供一种呼吸道合胞病毒mrna疫苗的制备方法，包括：
26、合成用于编码上述任一实施方式所述的突变体的dna片段以及用于编码上述任一实施方式所述的结构元件的dna片段，分别克隆至第一质粒中，以在所述第一本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种RSV融合前F蛋白的突变体，其特征在于，所述突变体由野生型RSV融合前F蛋白的全长或部分区域发生突变获得，所述突变包括以下氨基酸取代中的一个或多个：S155C，S190F，V207L，S290C，L373R，A149C，Y458C，S46G，N67I，E92D，S215P，K465Q。
2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变包括以下氨基酸取代：S155C，S190F，V207L，S290C，L373R，A149C，Y458C，S46G，N67I，E92D，S215P，K465Q。
3.根据权利要求2所述的突变体，其特征在于，所述突变体由野生型RSV融合前F蛋白的全长发生所述突变获得，所述突变体包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，或与如SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的氨基酸序列。
4.根据权利要求2所述的突变体，其特征在于，所述突变体由野生型RSV融合前F蛋白的胞外域发生所述突变获得，所述突变体还包括三聚体肽，所述三聚体肽包括如SEQ
5.一种核酸，其特征在于，包括用于编码权利要求3所述的突变体的核苷酸序列，所述核酸包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，或与如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
6.一种核酸，其特征在于，包括用于编码权利要求4所述的突变体的核苷酸序列，所述核酸包括如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，或与如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
7.一种包括权利要求5或6所述的核酸的核糖核酸分子，其特征在于，还包括结构元件，所述结构元件包括5’UTR序列、3’UTR序列和polyA尾序列中的一个或多个。
8.根据权利要求7所述的核糖核酸分子，其特征在于，所述5’UTR序列包括如SEQ IDNO.5所示的核苷酸序列，或与如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
9.根据权利要求7所述的核糖核酸分子，其特征在于，所述3’UTR序列包括如SEQ IDNO.6所示的核苷酸序列，或与如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
10.根据权利要求7所述的核糖核酸分子，其特征在于，所述polyA尾序列包括至少100个A核苷酸；优选的，所述polyA尾序列包括如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列，或与如SEQID NO.7所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
11.一种DNA分子，其特征在于，包括用于转录权利要求7至10任一所述的核糖核酸分子的核苷酸序列。
12.一种重组质粒，其特征在于，含有权利要求11所述的DNA分子。
13.权利要求7至10任一所述的核糖核酸分子、权利要求11所述的DNA分子或权利要求12所述的重组质粒在制备呼吸道合胞病毒mRNA疫苗中的应用。
14.一种呼吸道合胞病毒mRNA疫苗，其特征在于，包括权利要求7至10任一所述的核糖核酸分子、疫苗载体和辅料，所述疫苗载体为脂质纳米颗粒。
15.一种呼吸道合胞病毒mRNA疫苗的制备方法，其特征在于，包括：
16.一种新型冠状病毒和呼吸道合胞病毒的联合mRNA疫苗，其特征在于，包括：
17.根据权利要求16所述的联合mRNA疫苗，其特征在于，所述重组刺突蛋白相对于新型冠状病毒Omicron EG.5.1毒株的刺突蛋白具有S-2P位点突变，所述重组刺突蛋白包括如SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，或与如SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的氨基酸序列。
18.根据权利要求17...
【技术特征摘要】
1.一种rsv融合前f蛋白的突变体，其特征在于，所述突变体由野生型rsv融合前f蛋白的全长或部分区域发生突变获得，所述突变包括以下氨基酸取代中的一个或多个：s155c，s190f，v207l，s290c，l373r，a149c，y458c，s46g，n67i，e92d，s215p，k465q。
2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变包括以下氨基酸取代：s155c，s190f，v207l，s290c，l373r，a149c，y458c，s46g，n67i，e92d，s215p，k465q。
3.根据权利要求2所述的突变体，其特征在于，所述突变体由野生型rsv融合前f蛋白的全长发生所述突变获得，所述突变体包括如seq id no.1所示的氨基酸序列，或与如seq idno.1所示的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的氨基酸序列。
4.根据权利要求2所述的突变体，其特征在于，所述突变体由野生型rsv融合前f蛋白的胞外域发生所述突变获得，所述突变体还包括三聚体肽，所述三聚体肽包括如seq id no.2所示的氨基酸序列，或与如seq id no.2所示的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的氨基酸序列；所述突变体包括如seq id no.3所示的氨基酸序列，或与如seq id no.3所示的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的氨基酸序列。
5.一种核酸，其特征在于，包括用于编码权利要求3所述的突变体的核苷酸序列，所述核酸包括如seq id no.3所示的核苷酸序列，或与如seq id no.3所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
6.一种核酸，其特征在于，包括用于编码权利要求4所述的突变体的核苷酸序列，所述核酸包括如seq id no.4所示的核苷酸序列，或与如seq id no.4所示的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相似性的核苷酸序列。
7.一种包括权利要求5或6所述的核酸的核糖核酸分子，其特征在于，还包括结构元件，所述结构元件包括5’utr序列、3’utr序列和polya尾序列中的一个或多个。
8.根据权利要求7所述的核糖核酸分子，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：张凡，慕婷，徐龙，雷奕欣，喻峥嵘，胡晓蕾，
申请(专利权)人：艾美探索者生命科学研发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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