【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中医药领域，具体地说，涉及一种苓桂术甘汤基准样品的特征图谱构建方法、质量控制方法和制备方法。
技术介绍
1、苓桂术甘汤是一种古籍记载的经典名方，来源于《金匮要略》(汉·张仲景)，处方包括茯苓四两，桂枝、白术各三两，甘草二两。制法为：上四味，以水六升，煮取三升，分温三服。功效为温阳化饮，健脾利湿。主治中阳不足之痰饮。症见胸胁支满，目眩心悸，短气而咳，舌苔白滑，脉弦滑。相比于现代中药制剂，传统制剂普遍存在工艺落后、质量不稳定、生产效能不足等缺点。
2、物质基准是煎煮后所得的物质，以浓缩干燥品为基本形态。因苓桂术甘汤含挥发性成分，故基准样品无浓缩过程，水煎液直接冷冻干燥制得干粉，即为基准样品。基准样品失去了原有饮片的形态学指纹，单纯的指标成分的定性鉴别，难以反映其质量的优劣。作为衡量基准样品是否与临床汤剂基本一致的标准参照物，其质量应加强专属性鉴别和多成分整体质量的控制。因而基准样品质量控制要重视以特征图谱为主的整体质量控制以及其中主要有效成分的定量准确测定，有利于更好的控制苓桂术甘汤的质量。
3、有鉴于此特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种苓桂术甘汤基准样品的特征图谱构建方法、质量控制方法和制备方法。本专利技术的制备方法的有效成分提取率和转移率高，特征图谱的色谱峰信息丰富，分离度佳，专属性、稳定性、重复性均良好。质量控制方法的分离度高，稳定性好，检测限低，检测效率高。
2、为解
3、本专利技术的第一目的是提供一种苓桂术甘汤基准样品的特征图谱的构建方法，苓桂术甘汤基准样品的原料药材包括茯苓，桂枝，白术，甘草，构建方法包括：
4、(1)制备供试品溶液和对照品溶液；
5、(2)采用高效液相法进行检测，色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，0.1％磷酸为流动相b，进行梯度洗脱；检测波长为260nm；理论板数按甘草酸峰计不低于5000。
6、进一步的方案，所述梯度洗脱包括：
7、
8、本专利技术的梯度洗脱条件中，5～10分钟阶段无色谱峰出现，乙腈比例提升至21，可以使后面色谱峰保留时间提前，提高效率；21～32分钟阶段，可以提高分离度，特征峰2、3分离度达到1.5以上，并使峰3(甘草苷)纯度符合药典要求；36～46分钟阶段，控制乙腈比例由24提升至33，可以使特征峰4、5分离度符合要求；46～54分钟阶段，控制乙腈比例为33进行等度洗脱，可以使特征峰6、7分离度符合要求；54～65分钟阶段，控制已经比例由33至42，可以使特征峰8(甘草酸)分离度、纯度符合药典要求；70～80分钟阶段，保持乙腈高比例的洗脱时间，从而冲洗其余杂质。
9、优选的，柱温为30℃；流速为每分钟1.0ml；
10、优选的，色谱柱为kromisilc18，4.6×250mm，5μm。
11、进一步的方案，对照品溶液的制备方法包括：
12、取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品和桂皮醛对照品，精密称定，置棕色量瓶中，加入70％甲醇制成每1m含甘草苷对照品及含甘草酸铵对照品40μg、桂皮醛对照品6μg的混合溶液，摇匀，即得。
13、进一步的方案，供试品溶液的制备方法包括：取苓桂术甘汤基准样品粉末0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
14、优选的，超声处理的功率为500w，频率为40khz。
15、本专利技术的第二目的是提供一种如上所述的苓桂术甘汤基准样品的特征图谱的构建方法在苓桂术甘汤的质量检测中的应用；
16、优选的，构建的特征图谱包括8个特征峰，其中3个峰应分别与相应对照品参照物峰的保留时间相对应；与甘草酸铵参照物峰相对应的峰为s峰，其它特征峰的相对保留时间为：1号峰0.31、2号峰0.40、3号峰0.41、4号峰0.63、5号峰0.70、6号峰0.75、7号峰0.82、8号s峰1.00。
17、本专利技术的第三目的是提供一种苓桂术甘汤基准样品的质量控制方法，苓桂术甘汤基准样品的原料药材包括茯苓，桂枝，白术，甘草，质量控制方法包括：
18、(1)制备甘草苷、甘草酸铵及桂皮醛的对照品溶液；制备供试品溶液；
19、(2)采用高效液相法进行检测，色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，0.1％磷酸水溶液为流动相b，进行梯度洗脱；桂皮醛检测波长为290nm，甘草苷及甘草酸铵检测波长为237nm；理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000，桂皮醛峰计算应不低于3000。
20、
21、进一步的方案，梯度洗脱条件包括：
22、
23、优选的，柱温为30℃；流速为每分钟1.0ml；
24、优选的，色谱柱为kromisilc18，4.6×250mm，5μm。
25、进一步的方案，对照品溶液的制备方法包括：
26、取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品和桂皮醛对照品，精密称定，置棕色量瓶中，加入70％甲醇制成每1m含甘草苷对照品及含甘草酸铵对照品40μg、桂皮醛对照品6μg的混合溶液，摇匀，即得。
27、进一步的方案，供试品溶液的制备方法包括：取苓桂术甘汤基准样品粉末0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
28、优选的，超声处理的功率为500w，频率为40khz；
29、优选的，按干燥品计算，含甘草苷(c21h22o9)为0.61％～1.13％，甘草酸(c42h62o16)为1.18％～2.20％(甘草酸铵在溶液中不稳定，会分解为甘草酸，药典方法测定甘草酸，甘草酸与甘草酸铵的转换计算式为：甘草酸重量＝甘草酸铵重量/1.0207)、桂皮醛(c9h5o)为0.12％～0.22％。
30、本专利技术的第三目的是提供一种苓桂术甘汤基准样品的制备方法，苓桂术甘汤基准样品的原料药材包括茯苓，桂枝，白术，甘草，制备方法包括：
31、将四味原料药材混合，加水，浸泡30分钟后，武火煎煮至沸腾后，文火煎煮35分钟，筛网滤过，冷冻干燥，即得。
32、本专利技术的苓桂术甘汤基准样品的制备方法简单，各有效成分的转移率高，收率高。
33、优选的，所述武火为2200w，文火为800w；
34、优选的，所述滤过经过200目筛；
35、优选的，处方量的药材加1200ml的水；
36、优选的，出膏率范围为11.4％～14.0％。
37、进一步的方案，真空冷冻干燥的条件包括：预冻温度-20～-45本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种苓桂术甘汤基准样品的特征图谱的构建方法，苓桂术甘汤基准样品的原料药材包括茯苓，桂枝，白术，甘草，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，梯度洗脱包括：
3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，对照品溶液的制备方法包括：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品和桂皮醛对照品，精密称定，置棕色量瓶中，加入70％甲醇制成每1m含甘草苷对照品及含甘草酸铵对照品40μg、桂皮醛对照品6μg的混合溶液，摇匀，即得。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的构建方法，其特征在于，供试品溶液的制备方法包括：取苓桂术甘汤基准样品粉末0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
5.一种如权利要求1-4任意一项所述的苓桂术甘汤基准样品的特征图谱的构建方法在苓桂术甘汤的质量检测中的应用；
6.一种苓桂术甘汤基准样品的质量控制方法，苓桂术甘汤基准样品的原料药材包括茯苓，桂枝，白术，甘草，其特征在
7.根据权利要求6所述的质量控制方法，其特征在于，梯度洗脱条件包括：
8.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，对照品溶液的制备方法包括：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品和桂皮醛对照品，精密称定，置棕色量瓶中，加入70％甲醇制成每1m含甘草苷对照品及含甘草酸铵对照品40μg、桂皮醛对照品6μg的混合溶液，摇匀，即得。
9.根据权利要求1-3任意一项所述的构建方法，其特征在于，供试品溶液的制备方法包括：取苓桂术甘汤基准样品粉末0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
10.一种苓桂术甘汤基准样品的制备方法，苓桂术甘汤基准样品的原料药材包括茯苓，桂枝，白术，甘草，其特征在于，包括：
...【技术特征摘要】
1.一种苓桂术甘汤基准样品的特征图谱的构建方法，苓桂术甘汤基准样品的原料药材包括茯苓，桂枝，白术，甘草，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，梯度洗脱包括：
3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，对照品溶液的制备方法包括：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品和桂皮醛对照品，精密称定，置棕色量瓶中，加入70％甲醇制成每1m含甘草苷对照品及含甘草酸铵对照品40μg、桂皮醛对照品6μg的混合溶液，摇匀，即得。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的构建方法，其特征在于，供试品溶液的制备方法包括：取苓桂术甘汤基准样品粉末0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
5.一种如权利要求1-4任意一项所述的苓桂术甘汤基准样品的特征图谱的构建方法在苓桂术甘汤的质量检测中的应用；
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【专利技术属性】
技术研发人员：邹洵，李丽芳，石媛慧，周艳林，
申请(专利权)人：桂林三金药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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