【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生化分析，尤其涉及一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素b1化学发光法定量测定试剂盒及其使用方法。
技术介绍
1、黄曲霉毒素已被世界卫生组织(who)癌症研究机构划定为一类天然存在的致癌物，属于剧毒物质，其中以黄曲霉毒素b1(afb1)的毒性最大，是氰化钾的10倍，砒霜的68倍，致癌性最强，可通过多种途径污染食品和饲料，直接或间接进入人类食物链威胁人类健康和生命安全。我国非常重视食品中黄曲霉毒素的含量问题，并确定了食品中黄曲霉毒素的最高允许含量，食品监管需要一种简单快速、高选择性、高灵敏的生物传感方法实现对afb1的定量检测。现阶段检测afb1的较为常用的方法主要包括薄层色谱法(gb/t5009.23-2006)，高效液相色谱法(gb/t 30955-2014)等方法。其中薄层色谱法成本虽低，但特异性和灵敏度较差，而高效液相色谱法虽然具有较高的灵敏度和成熟的技术，但测试的时间较长以及对样品前处理的要求较高，所以开发新的检测方法显得尤为重要。近年来，功能核酸的生物传感器检测afb1的方法逐渐被研究者们所关注(recent progress in optical andelectrochemical aptasensor technologies for detection of aflatoxin b1,critical reviews in food science and nutrition,2023)。
2、核酸适配体(aptamer)是一种新型的用于生物传感方法的生物识别单元，它是一种经体外筛选技术-指数
3、功能核酸的独特功能源自于其独特的三维结构，例如核酸适配体的识别能力是由于单链核酸通过范德华力、氢键、静电相互作用、平板部分的堆积和形状互补折叠诱导其空间构象发生变化，形成特定三维结构而与相应的靶标分子高亲和力和高特异性结合。平行g-四链体可以与血红素形成复合体具有类过氧化物酶活性的dnazyme，可以催化过氧化氢氧化abts、tmb等显色，氧化amplex red显荧光，氧化鲁米诺产生化学发光。最新的研究表明g-三链体也可与血红素形成复合物，同样具有类过氧化物酶活性。
4、本专利技术首次公布了在富含g碱基的双链结构中错配富g结构与血红素形成复合物，并具有类过氧化物酶活性。已有研究表明afb1的核酸适配体形成有富含g碱基的错配结构与afb1相结合，我们的研究结果表明，此复合结构可与血红素相互结合，增强血红素对过氧化物的催化活性，利用此特性开发了afb1的快检化学发光试剂盒。
技术实现思路
1、本专利技术提供的是一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素b1化学发光法定量测定试剂盒，可用于黄曲霉毒素b1的检测，并且具有无标记、超灵敏、检测快、易操作、选择性好等优点。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
3、基于核酸适配体的黄曲霉毒素b1化学发光法定量测定试剂盒，是一种基于afb1核酸适配体在识别afb1后可与血红素形成类过氧化物酶活性的复合物，可催化过氧化氢氧化鲁米诺发光的afb1检测试剂盒，包括以下溶液：
4、检测液：包括浓度为10-1000nm的afb1核酸适配体；浓度为10-1000nm的血红素；浓度为100-1000mm、ph为4-10的缓冲溶液；浓度为10-1000mm的金属离子；浓度为10-100mm的显色试剂或发光试剂；质量分数为0.1％-10.0％的表面活性剂；防腐剂。所述检测液中的核酸适配体与afb1充分反应后形成碱基错配的双链b螺旋结构，与血红素复合形成具有类过氧化物酶活性的复合物，此复合物具有催化过氧化氢氧化鲁米诺产生化学发光信号，化学发光的强度与afb1的浓度相关，从而实现afb1的检测。
5、氧化液：浓度为50-500mm的过氧化物。
6、进一步的，所述的核酸适配体为从核酸分子文库中筛选得到黄曲霉毒素b1的特异性适配体序列中的一种，且经过优化(截短无用碱基并增加结构稳定性)具有更好的亲和性的34个碱基的核酸适配体，即优化为最优序列。
7、进一步的，所述的检测液中的缓冲溶液包括tris-hcl缓冲溶液、pbs缓冲溶液或hepes缓冲溶液。
8、进一步的，所述的金属离子包括k+、ca2+、mg2+、zn2+、pb2+或hg2+。
9、进一步的，所述的显色试剂或发光试剂包括tmb、abts、amplex red、鲁米诺等。
10、进一步的，所述的表面活性剂包括吐温20、吐温80或曲拉通x-100。
11、进一步的，所述的防腐剂包括肉桂酸或纳他霉素。
12、进一步的，所述检测液中通过加入防腐剂防止本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素B1化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于，所述的黄曲霉毒素B1化学发光法定量测定试剂盒包括以下溶液：
2.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素B1化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于，所述的核酸适配体为从核酸分子文库中筛选得到黄曲霉毒素B1的特异性适配体序列中的一种，且经过优化具有更好的亲和性的34个碱基的核酸适配体，即优化为最优序列。
3.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素B1化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于，所述的检测液中的缓冲溶液包括Tris-HCl缓冲溶液、PBS缓冲溶液或HEPES缓冲溶液。
4.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素B1化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于，所述的金属离子包括K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Pb2+或Hg2+。
5.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素B1化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于，所述的显色试剂或发光试剂包括TMB、ABTS、Amplex Red、鲁米诺。
6.根据权利
7.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素B1化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于，所述的过氧化物包括H2O2、过氧化脲。
8.一种基于权利要求1-7任一所述的基于核酸适配体的黄曲霉毒素B1化学发光法定量测定试剂盒的使用方法，其特征在于，所述检测液中的核酸适配体与AFB1充分反应后形成碱基错配的双链B螺旋结构，与血红素复合形成具有类过氧化物酶活性的复合物，此复合物具有催化过氧化氢氧化鲁米诺产生化学发光信号，化学发光的强度与AFB1的浓度相关，从而实现AFB1的检测，即实现定性、定量的检测黄曲霉毒素B1。
9.根据权利要求8所述的一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素B1化学发光法定量测定试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：
10.根据权利要求9所述的一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素B1化学发光法定量测定试剂盒的使用方法，其特征在于，所述的化学发光强度使用包括多功能酶标仪、化学发光酶标仪或其他机器测试得到。
...【技术特征摘要】
1.一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素b1化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于，所述的黄曲霉毒素b1化学发光法定量测定试剂盒包括以下溶液：
2.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素b1化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于，所述的核酸适配体为从核酸分子文库中筛选得到黄曲霉毒素b1的特异性适配体序列中的一种，且经过优化具有更好的亲和性的34个碱基的核酸适配体，即优化为最优序列。
3.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素b1化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于，所述的检测液中的缓冲溶液包括tris-hcl缓冲溶液、pbs缓冲溶液或hepes缓冲溶液。
4.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素b1化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于，所述的金属离子包括k+、ca2+、mg2+、zn2+、pb2+或hg2+。
5.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体的黄曲霉毒素b1化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于，所述的显色试剂或发光试剂包括tmb、abts、amplex red、鲁米诺。
6.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨成，王越，俞嘉秀，孙冰冰，梁瑜章，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：
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