【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物化学领域，具体涉及一种脱氧胸苷三磷酸的合成方法。
技术介绍
1、脱氧胸苷三磷酸(dttp)是合成dna分子的基本组成部分，具有重要的治疗和诊断应用,它已被应用于各种分子生物学应用，如pcr,real-time pcr,cdna synthesis,引物延伸,dna测序,dna标记等等，而dntps的质量和纯度对其在分子生物学上的成功应用至关重要。
2、而合成克级的脱氧胸苷三磷酸是一个很大的挑战，因为一个脱氧胸苷三磷酸有多个化学基团，比如伯羟基，仲羟基和氨基等，他们的在合成中活性不同，选择性不同，会造成大量的副产物，对纯化来说也是一个很大的问题。
3、由ludwig提出的“一锅三步法”，是目前较为常用的方法。但是，采用ludwig提出的“一锅三步法”，反应转化率低，副产物含量高，并且实验过程中转化率不稳定，无法进行稳定的工业化生产。
4、因此，本领域技术人员致力于开发反应转化率高，副产物含量低，工艺稳定的脱氧胸苷三磷酸(dttp)的制备工艺。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种反应转化率高，副产物含量低，工艺稳定的脱氧胸苷三磷酸(dttp)的制备工艺。
2、在本专利技术的第一方面，提供了一种脱氧胸苷三磷酸(dttp)的制备方法，所述方法包括步骤：
3、(s1)在含水溶剂中，化合物i(2’-脱氧胸苷(dt))和三氯氧磷反应生成化合物i i，反应式如下：
4、
5、在另一优选
6、(s2)化合物ii和焦磷酸三正丁基铵反应生成化合物i ii，反应式如下：
7、
8、在另一优选例中，所述步骤(s1)中所述含水溶剂为含水的惰性溶剂。
9、在另一优选例中，所述步骤(s1)中所述含水溶剂包括：磷酸三甲酯、水和三正丁胺。
10、在另一优选例中，所述步骤(s1)中所述含水溶剂包括：磷酸三甲酯、水和三丙胺。
11、在另一优选例中，所述含水溶剂由磷酸三甲酯、水和三正丁胺组成。
12、在另一优选例中，所述含水溶剂由磷酸三甲酯、水和三丙胺(三正丙胺)组成。
13、在另一优选例中，所述含水溶剂包括：
14、磷酸三甲酯50-100体积份；
15、水0.1-0.5体积份；
16、三正丁胺10-20体积份。
17、在另一优选例中，所述含水溶剂包括：
18、磷酸三甲酯50-100体积份；
19、水0.1-0.5体积份；
20、三丙胺10-20体积份。
21、在另一优选例中，所述含水溶剂包括：
22、磷酸三甲酯100体积份；
23、水0.3体积份；
24、三正丁胺15体积份。
25、在另一优选例中，所述含水溶剂包括：
26、磷酸三甲酯100体积份；
27、水0.3体积份；
28、三丙胺12体积份。
29、在另一优选例中，所述步骤(s1)在氮气或惰性气体保护下进行反应。
30、在另一优选例中，所述步骤(s1)的反应温度为-10℃至5℃；优选为-10℃至0℃；更优选为约-5℃至0℃。
31、在另一优选例中，所述步骤(s1)反应时间为0.5-3h；优选为约1-2h。
32、在另一优选例中，所述步骤(s1)中先用磷酸三甲酯溶解化合物i，然后再加入水和三正丁胺；或者，所述步骤(s1)中先用磷酸三甲酯溶解化合物i，然后再加入水和三丙胺；优选地，所述化合物i与磷酸三甲酯的质量体积比为3-10％；优选为约5％。
33、在另一优选例中，所述步骤(s1)中化合物i和三氯氧磷的质量体积比为1：1-1.1；优选为约1：1.032。
34、在另一优选例中，所述步骤(s2)在惰性溶剂中进行反应；优选地所述惰性溶剂包括无水乙腈和三正丁胺，或者所述惰性溶剂包括无水乙腈和三丙胺；优选地，无水乙腈和三正丁胺的体积比为50：20-35(如50：27.5)；优选地，无水乙腈和三丙胺的体积比为50：20-35(如50：22)。
35、在另一优选例中，所述步骤(s2)反应温度为-10℃至20℃；优选为约-5℃至20℃；更优选为约-5℃至15℃。
36、在另一优选例中，所述步骤(s2)中先用惰性溶剂溶解焦磷酸三正丁基铵；优选地，焦磷酸三正丁基铵和惰性溶剂的质量体积比为30％-40％；优选地，溶解后于-20℃下预冷。
37、在另一优选例中，所述步骤(s2)反应结束后，加水淬灭反应。
38、在另一优选例中，所述方法还包括对化合物i ii进行纯化的步骤。
39、在另一优选例中，所述方法包括步骤：
40、(1)称取5g的2’-脱氧胸苷(dt)，加入到250ml三口瓶中，插入温度计进行温度监控；
41、(2)加入100ml的磷酸三甲酯溶解dt,再加入0.3ml的水和15ml的三正丁胺或三丙胺，n2置换后，放于-5℃下预冷10min；
42、(3)缓慢加入5.16ml三氯氧磷，观察温度计，使得反应温度不超过0℃。
43、加入完毕后，反应1.5h；
44、(4)取150ml单口瓶，称取27.5g焦磷酸三正丁基铵于单口瓶中，加入50ml无水乙腈和27.5ml的三正丁胺或三丙胺，待焦磷酸三正丁基铵溶清后，放于-20℃下预冷1.5h，待(3)反应结束后，将溶清的混合溶液快速加入至三口瓶中，反应10min；
45、待(4)反应结束后，取600ml水溶液，淬灭反应，淬灭结束后，100mldcm萃取，分液，得水溶液，再向水溶液中加入2m的teab溶液60ml，旋蒸后获得目的化合物。
46、应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种脱氧胸苷三磷酸(dTTP)的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(S1)在含水溶剂中，化合物I(2’-脱氧胸苷(dT))和三氯氧磷反应生成化合物I I，反应式如下：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤：(S2)化合物I I和焦磷酸三正丁基铵反应生成化合物I I I，反应式如下：
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(S1)中所述含水溶剂为含水的惰性溶剂。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(S1)中所述含水溶剂包括：磷酸三甲酯、水和三正丁胺；或者，所述步骤(S1)中所述含水溶剂包括：磷酸三甲酯、水和三丙胺。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述含水溶剂包括：磷酸三甲酯50-100体积份；
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(S1)的反应温度为-10℃至5℃；优选为-10℃至0℃；更优选为约-5℃至0℃。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(S1)中先用磷酸三甲酯溶解化合物I，然后再加入水和三正丁胺；或者，所述步骤
8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(S1)中化合物I和三氯氧磷的质量体积比为1：1-1.1；优选为约1：1.032。
9.如权利要求2述的方法，其特征在于，所述步骤(S2)在惰性溶剂中进行反应；优选地所述惰性溶剂包括无水乙腈和三正丁胺，或者所述惰性溶剂包括无水乙腈和三丙胺；
10.如权利要求2述的方法，其特征在于，所述步骤(S2)反应结束后，加水淬灭反应。
...【技术特征摘要】
1.一种脱氧胸苷三磷酸(dttp)的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(s1)在含水溶剂中，化合物i(2’-脱氧胸苷(dt))和三氯氧磷反应生成化合物i i，反应式如下：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤：(s2)化合物i i和焦磷酸三正丁基铵反应生成化合物i i i，反应式如下：
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(s1)中所述含水溶剂为含水的惰性溶剂。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(s1)中所述含水溶剂包括：磷酸三甲酯、水和三正丁胺；或者，所述步骤(s1)中所述含水溶剂包括：磷酸三甲酯、水和三丙胺。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述含水溶剂包括：磷酸三甲酯50-100体积份；
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：兰诗龙，贺国强，蒋析文，余汤昊，张文钦，肖文平，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。