【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程，涉及一种一锅法生产莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖的方法。
技术介绍
1、高热量糖类的过量摄入是导致过度肥胖、糖尿病、高血压和心脑血管等疾病的主要原因之一。因此，开发低热量糖类逐渐引起人们重视，来自甜叶菊的甜菊糖苷类化合物因其甜度高、热量低且安全性高而受到广泛关注。其中，含量较为丰富的甜菊糖、莱鲍迪苷a(reba)等作为甜味剂已广泛应用于饮料、食品等领域，它们具有相较于蔗糖250～300倍的甜度，但是口感上存在甜味之外的苦后味，严重影响它们作为甜味剂的口感。而在甜菊糖苷中含量较少的莱鲍迪苷d相较于reba和甜菊糖具有更高的甜度，并且甜味之外的后苦味较低，且甜味更快，作为甜味剂具有更好的口感，被认为是非常具有潜力的下一代甜味剂。
2、目前主要采用生物法催化生产莱鲍迪苷d，以莱鲍迪苷a和尿苷二磷酸葡萄糖底物，利用糖基转移酶催化合成，如cn110846363a公开了一锅法生产莱鲍迪苷d的方法，包括如下步骤：构建能分泌表达糖基转移酶ugt1的重组菌培养重组菌，得到培养液；在培养液中加入底物莱鲍迪苷a，尿苷二磷酸葡萄糖，硫酸镁或氯化镁，甲醇，进行反应，得到莱鲍迪苷d。
3、d-阿洛酮糖是目前备受关注的稀少糖，已经被美国fda确认为普遍公认安全(gras)，在医药和食品等领域具有巨大的应用价值和市场前景。d-阿洛酮糖甜度约为蔗糖的70％，但能量值却只有蔗糖的10％，是理想蔗糖替代品，而且具有抑制脂肪堆积，预防肥胖的效果。同时，在食品体系中添加d-阿洛酮糖可以起到提高凝胶性的作用，并且能与食品体系中的蛋
4、但目前没有同时高效生产莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖的报道，因此，开发同时高效生产莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖的方法，有效降低成本，对于甜味剂领域具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种一锅法生产莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖的方法，本专利技术巧妙设计合成路线，同时利用蔗糖合酶、糖基转移酶和d-阿洛酮糖-3-差向异构酶协同催化反应，以实现低成本、高效地同时生产莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖，对于甜味剂领域具有重要意义。
2、为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种一锅法生产莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖的方法，所述方法包括：
4、将莱鲍迪苷a、尿苷二磷酸二钠盐、蔗糖、蔗糖合酶、糖基转移酶和d-阿洛酮糖-3-差向异构酶混合，进行反应，得到莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖。
5、本专利技术中，巧妙设计合成路线，以价格相对低廉的莱鲍迪苷a、尿苷二磷酸二钠盐和蔗糖为原料，同时利用蔗糖合酶、糖基转移酶和d-阿洛酮糖-3-差向异构酶协同催化反应，实现一步合成莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖，生产效率高，操作简单，且能有效降低副产物，提高产品收率，利于广泛应用。
6、本专利技术中，可根据需求合理控制原料添加量。
7、优选地，所述混合后莱鲍迪苷a的终浓度为20～100g/l，包括但不限于21g/l、22g/l、23g/l、25g/l、30g/l、40g/l、50g/l、60g/l、80g/l、100g/l、110g/l、112g/l、115g/l、116g/l、118g/l或119g/l，优选为100g/l。
8、优选地，所述混合后尿苷二磷酸二钠盐的终浓度为20～100g/l，包括但不限于21g/l、22g/l、23g/l、25g/l、30g/l、40g/l、50g/l、60g/l、80g/l、100g/l、110g/l、112g/l、115g/l、116g/l、118g/l或119g/l，优选为50g/l。
9、优选地，所述混合后蔗糖的终浓度为200～260g/l，包括但不限于201g/l、202g/l、203g/l、205g/l、230g/l、240g/l、250g/l、252g/l、254g/l、256g/l、2258g/l或259g/l，优选为250g/l。
10、本专利技术中，可根据需求合理控制酶添加量。
11、优选地，所述混合后蔗糖合酶、糖基转移酶和d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的终浓度各自独立地为1～10g/l，包括但不限于2g/l、3g/l、4g/l、5g/l、6g/l、7g/l、8g/l或9g/l。
12、优选地，所述蔗糖合酶的终浓度为5g/l，糖基转移酶终浓度为5g/l，d-阿洛酮糖-3-差向异构酶终浓度为8g/l。
13、优选地，所述反应的温度为40～60℃，包括但不限于42℃、44℃、45℃、46℃、50℃、52℃、55℃、56℃、58℃或59℃，时间为24～72h，包括但不限于25h、28h、30h、35h、40h、45h、50h、55h、60h、65h、68h、70h或71h。
14、优选地，所述反应的ph为6.0～8.0。
15、可以理解，本领域已公开的任意蔗糖合酶、糖基转移酶和d-阿洛酮糖-3-差向异构酶均适用于本专利技术，不作特殊限制。
16、可选地，所述糖基转移酶的氨基酸序列可包括seq id no.2所示的序列或与seqid no.2同源性高于90％的序列。
17、seq id no.2：
18、mklyffvicltygseaarilgifptpsishqvafrpltlelakrghelvvlttdpvfakgsspenyteidvhdmsyetwrkgfsatskgrtddifeqltrifdlipkifvkqfltdefqevlksekkfdlliieaivrpaiilghvfnapvvlmsslggfrdiydifgapnhpllypavtrqklydltyweklremyshytieriwkefeekdnelvtsvfgtnvpslsemmdrislillnvhpiwennrpvppniiyvggihqkpqqdlpsdlkayldasrhgvifisfgtnvmpsalpqeriqtlikafsqlpydvlwkwdkdelpgrskniriskwlpqpdllrhpkvklfitqgglqsteeaitagvpligmpmlgdqwynveqyvkhkiglrldmddlsedklqnsikeiindesyrqniarlrsqlydqpqssleravwwtehvlrhggaqhlraaganlswsqyldlelvsvfiisfivivmiftsvvwylwrflnsfnatikfkgs。
19、可选地，所述d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的氨基酸序列可包括seq id no.4所示的序列或与seq id no.4同源性高于90％的序列。
20、seq id no.4：
21、melscciwalsespgnaleqvsfagfksidvcpgfldtyeqivrsqaleldvscfgasfglpdgisldheetflrsqtvsyleqgiqtggelgan本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种一锅法生产莱鲍迪苷D和D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的一锅法生产莱鲍迪苷D和D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述混合后莱鲍迪苷A的终浓度为20～100g/L。
3.根据权利要求1或2所述的一锅法生产莱鲍迪苷D和D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述混合后尿苷二磷酸二钠盐的终浓度为20～100g/L；
4.根据权利要求1-3任一项所述的一锅法生产莱鲍迪苷D和D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述混合后蔗糖合酶、糖基转移酶和D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的终浓度各自独立地为1～10g/L。
5.根据权利要求1-4任一项所述的一锅法生产莱鲍迪苷D和D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述反应的温度为40～60℃，时间为24～72h。
6.根据权利要求1～5所述的一锅法生产莱鲍迪苷D和D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述反应的pH为6.0～8.0。
7.根据权利要求1-6任一项所述的一锅法生产莱鲍迪苷D和D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述糖基转移酶的氨基酸序列包括SEQ ID
8.根据权利要求1-7任一项所述的一锅法生产莱鲍迪苷D和D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的氨基酸序列包括SEQ ID NO.4所示的序列或与SEQID NO.4同源性高于90％的序列。
9.根据权利要求1-8任一项所述的一锅法生产莱鲍迪苷D和D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
10.根据权利要求1-9任一项所述的一锅法生产莱鲍迪苷D和D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种一锅法生产莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的一锅法生产莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述混合后莱鲍迪苷a的终浓度为20～100g/l。
3.根据权利要求1或2所述的一锅法生产莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述混合后尿苷二磷酸二钠盐的终浓度为20～100g/l；
4.根据权利要求1-3任一项所述的一锅法生产莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述混合后蔗糖合酶、糖基转移酶和d-阿洛酮糖-3-差向异构酶的终浓度各自独立地为1～10g/l。
5.根据权利要求1-4任一项所述的一锅法生产莱鲍迪苷d和d-阿洛酮糖的方法，其特征在于，所述反应的温度为40～60℃，时间为24～72h。
6.根据权利要求1～5所述的一锅法生产...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈开通，杨栋琳，王竞辉，张雅萍，
申请(专利权)人：万华化学集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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