【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析，特别涉及一种叶酸中6-甲酰蝶呤的hplc检测方法。
技术介绍
1、叶酸也叫维生素b9，是一种水溶性维生素。叶酸是机体细胞生长和繁殖所必需的物质，在体内以四氢叶酸的形式发挥作用，四氢叶酸在体内参与嘌呤核酸和嘧啶核苷酸的合成和转化。叶酸能够预防脑卒中。高同型半胱氨酸血症是脑卒中的高危因素之一，而同型半胱氨酸增高与人体的叶酸缺乏有密切的关联，因此，补充叶酸能够有效的降低同型半胱氨酸，减少h型高血压的发生以及减轻动脉硬化的程度，从而有效的预防脑卒中。叶酸还用于妊娠期、哺乳期妇女预防给药。用于预防胎儿神经管畸形、各种原因引起的叶酸缺乏及叶酸缺乏所致的巨幼红细胞贫血。叶酸因其重要的临床作用，在日常的应用普及率较高，尤其作为孕妇服用的药物，叶酸质量尤为关键。
2、传统叶酸的生产方法为对氨基苯甲酰谷氨酸，三氯丙酮及2,4,5-三氨基-6-羟基嘧啶硫酸盐，在乙酸钠和焦亚硫酸钠存在的条件下，保持ph3.4-3.6、温度36-40℃，环合反应6h，即得桔红色的叶酸粗品。叶酸粗品经酸精制及碱精制得叶酸成品。
3、人体内的叶酸(特别是皮肤中的叶酸)会在太阳光照射下，代谢产生6-甲酰蝶呤(6-formylpterin)。所以，该杂质是叶酸在体内产生的光代谢产物。根据ich-q3a指导原则，对于内源性代谢产物，可提高其可接受限度。但是，由于6-甲酰蝶呤在叶酸产品中的含量较低，因而采用常规高效液相色谱(hplc)分离无法检测，所以现需要一种有效的检测方法检测6-甲酰蝶呤的存在，对叶酸进行质量控制具有重要意义。p>
4、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种叶酸中6-甲酰蝶呤的hplc检测方法，该检测方法可以准确、灵敏的检测叶酸、含有叶酸的制剂以及含有叶酸的复方制剂、含有叶酸的多种维生素制剂中的6-甲酰蝶呤，并且能够有效的分离6-甲酰蝶呤和叶酸。
2、为了达到上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种叶酸中6-甲酰蝶呤的hplc检测方法，所述检测方法为液相色谱法，所述液相色谱法的检测条件为：
4、色谱柱采用阴离子交换手性色谱柱；
5、流动相由组分a、b组成；
6、所述组分a选自甲醇；所述组分b为含11.16g/l磷酸二氢钾与5.50g/l磷酸氢二钾的混合水溶液。
7、进一步地，在流动相中，所述组分a、b的体积比为(2～95)：(5～98)。
8、进一步地，在流动相中，所述组分a、b的体积比为(5：95)。
9、进一步地，所述流动相的流速为0.8～1.2ml/min；和/或，洗脱方式为等度洗脱；和/或，柱温为20～40℃；和/或，进样量为5～20μl；和/或，检测波长为260nm～300nm。
10、进一步地，所述流动相的流速为1.0ml/min；和/或，柱温为35℃；和/或，进样量为15μl；和/或，检测波长为280nm。
11、进一步地，所述阴离子交换手性色谱柱为辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
12、进一步地，所述阴离子交换手性色谱柱为100rp-8色谱柱。
13、进一步地，包括以下步骤：
14、s1、供试品溶液、对照品溶液的配置：
15、供试品溶液：取叶酸测试品5mg，加入0.1mol/l氢氧化钠溶液5ml溶解，用流动相定量稀释至50ml，摇匀、离心，取上清液滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
16、对照品溶液：用0.1mol/l氢氧化钠溶液溶解叶酸对照品，再用流动相定量稀释制成含叶酸浓度为0.1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；
17、s2、色谱条件：
18、色谱柱采用阴离子交换手性色谱柱；
19、流动相由组分a、b组成；
20、所述组分a选自甲醇；所述组分b为含11.16g/l磷酸二氢钾与5.50g/l磷酸氢二钾的混合水溶液；
21、s3、测定方法：
22、所述的供试品溶液、对照品溶液按照所述的色谱条件分别进样，进行hplc检测，记录色谱图，采用加校正因子自身对照法计算供试品溶液中6-甲酰蝶呤含量。
23、进一步地，所述计算供试品溶液中6-甲酰蝶呤含量的计算公式为：
24、
25、f为响应因子，f＝1/k；
26、k为6-甲酰蝶呤的校正因子；
27、a样为供试品溶液色谱图中6-甲酰蝶呤面积；
28、d样为供试品的稀释倍数，稀释倍数为10；
29、m均为多个供试品的平均片重，mg；
30、m为供试品的生产规格，5mg；
31、m样为供试品称样量，mg。
32、与现有技术相比，本专利技术的技术方案至少具有以下技术效果：
33、本专利技术提供的检测方法适用于检测叶酸、含有叶酸的制剂及含有叶酸的复方制剂、含有叶酸的多种维生素制剂中6-甲酰蝶呤的含量，操作方便，方法专属性，定量限和检测限，线性与范围，校正因子，准确度，溶液稳定性均符合规定。专属性实验中溶剂不干扰杂质检测。经检测叶酸中6-甲酰蝶呤的检测限为0.0750μg/ml，定量限为0.250μg/ml，方法灵敏度较好。6-甲酰蝶呤在0.2500-2.000μg/ml范围内呈线性，线性方程为y＝4.337×104x-1.670×103，线性相关系数为0.9999，残差平方和为5.632×107，线性关系良好。6-甲酰蝶呤回收率为98.6％～101.3％，均在92％～105％之间，rsd为1.1％，小于2％，表明方法的准确度良好。加标供试品溶液在室温放置31h，6-甲酰蝶呤和叶酸峰面积变化率均在98％～102％之间，溶液稳定性良好。
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1.一种叶酸中6-甲酰蝶呤的HPLC检测方法，其特征在于，所述检测方法为液相色谱法，所述液相色谱法的检测条件为：
2.根据权利要求1所述的叶酸中6-甲酰蝶呤的HPLC检测方法，其特征在于，在流动相中，所述组分A、B的体积比为(2～95)：(5～98)。
3.根据权利要求2所述的叶酸中6-甲酰蝶呤的HPLC检测方法，其特征在于，在流动相中，所述组分A、B的体积比为(5：95)。
4.根据权利要求1-3任一项所述的叶酸中6-甲酰蝶呤的HPLC检测方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.8～1.2mL/min；和/或，洗脱方式为等度洗脱；和/或，柱温为20～40℃；和/或，进样量为5～20μL；和/或，检测波长为260nm～300nm。
5.根据权利要求4所述的的叶酸中6-甲酰蝶呤的HPLC检测方法，其特征在于，所述流动相的流速为1.0mL/min；和/或，柱温为35℃；和/或，进样量为15μL；和/或，检测波长为280nm。
6.根据权利要求4所述的叶酸中6-甲酰蝶呤的HPLC检测方法，其特征在于，所述阴离子交换手性色谱柱为
7.根据权利要求6所述的叶酸中6-甲酰蝶呤的HPLC检测方法，其特征在于，所述阴离子交换手性色谱柱为100RP-8色谱柱。
8.根据权利要求1所述的叶酸中6-甲酰蝶呤的HPLC检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的叶酸中6-甲酰蝶呤的HPLC检测方法，其特征在于，所述计算供试品溶液中6-甲酰蝶呤含量的计算公式为：
...【技术特征摘要】
1.一种叶酸中6-甲酰蝶呤的hplc检测方法，其特征在于，所述检测方法为液相色谱法，所述液相色谱法的检测条件为：
2.根据权利要求1所述的叶酸中6-甲酰蝶呤的hplc检测方法，其特征在于，在流动相中，所述组分a、b的体积比为(2～95)：(5～98)。
3.根据权利要求2所述的叶酸中6-甲酰蝶呤的hplc检测方法，其特征在于，在流动相中，所述组分a、b的体积比为(5：95)。
4.根据权利要求1-3任一项所述的叶酸中6-甲酰蝶呤的hplc检测方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.8～1.2ml/min；和/或，洗脱方式为等度洗脱；和/或，柱温为20～40℃；和/或，进样量为5～20μl；和/或，检测波长为260nm～300nm。
5.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：王莉莉，王丽，王晓凤，付建宇，张冀璇，康倩，徐曼，李焕君，王鑫蕊，姚迎美，马凤霞，姚延光，孙丛燕，刘晓莲，马宁宁，
申请(专利权)人：河北冀衡药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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