【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别是涉及用于检测幽门螺杆菌耐药基因位点的引物组和试剂盒。
技术介绍
1、幽门螺杆菌(helicobacter pylori，hp)是一种螺旋形、微需氧的弯曲状革兰阴性细菌，该菌可高度适应胃黏膜，感染后难以自发清除。研究表明，hp定植与慢性胃炎、十二指肠溃疡、胃溃疡、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等胃肠道病变的发生有关。1994年，国际癌症研究机构把hp定为i类致癌因子。根除hp可以有效缓解胃粘膜炎性反应，特别是活动性胃粘膜炎症，治愈溃疡并预防消化性溃疡病的复发；根除hp也可以缓解胃malt淋巴瘤；早期根除hp可以在一定程度上降低胃癌发生的风险。
2、该菌感染了世界50％至70％的人口，有些发展中国家感染率甚至高达80％以上，是全球最普遍的病原体之一，可导致胃肠道疾病。我国hp感染率高，平均发生率农村人口为66％，城市人口为47％。成人感染hp后，不会自行消除，抗生素治疗是目前消除hp感染的常见策略。
3、hp感染的根除治疗一直以来都是以经验性治疗模式为主。目前，幽门螺杆菌的根除方案主要包括质子泵抑制剂(ppi)、胃粘膜保护剂和一种或两种抗生素，构成三联或四联疗法。质子泵抑制剂(ppi)是继h2受体阻断药后的一类重要的抑制胃酸分泌药，也是目前抑制胃酸分泌作用最强的一类药物。用于根除幽门螺杆菌的抗生素包括克拉霉素、甲硝唑、喹诺酮类药物(左氧氟沙星)、阿莫西林、四环素、利福平等。目前，质子泵抑制剂(ppi)、阿莫西林、克拉霉素或甲硝唑的三联疗法是根除hp感染的首选方案，该方案已经在国际会议上得到共
4、1990年代初，根除幽门螺杆菌的比率超过80％。但是近年来，随着全球幽门螺杆菌菌株对最常用抗生素的细菌耐药性不断增加，在过去20年中，许多国家的抗生素耐药性已超过15～20％的门槛，克拉霉素、阿莫西林和甲硝唑的耐药性水平最高分别达50％、30％和95％。多药耐药性的出现显著影响幽门螺杆菌根除标准疗法的疗效，导致幽门螺杆菌的根除率在全球范围内不断下降。为了最好地优化幽门螺杆菌感染的管理，幽门螺杆菌的治疗应基于局部和个体抗菌素耐药性模式，针对具体患者量身定制有效的抗生素治疗策略可能会大大减少治疗失败并降低抗生素耐药性。
5、传统检测幽门螺杆菌耐药性的方法是将细菌做分离培养，培养成功后再做耐药测试，进而判断患者耐药情况，但是幽门螺杆菌培养要求高、成功率低、时间长，大大限制了该方法在临床上的应用。随着对幽门螺杆菌耐药分子机制的深入研究，国内外研究者尝试开发分子生物学方法对耐药基因进行检测，通过对应的耐药位点基因分型确定患者感染的幽门螺杆菌的耐药情况，主要检测方法包括pcr-荧光探针法、二代测序法等。但是pcr-荧光探针法包含基因单一，检测位点少，一次检测不能全面覆盖临床常用药物对应的耐药位点；二代测序技术虽然能得到多位点的突变信息，但价格昂贵、用时长。
6、因此，急需要开发一种操作简单、快速、通量高、低成本、特异性强的方法来检测幽门螺杆菌耐药位点，为临床诊断幽门螺杆菌及用药提供指导。
技术实现思路
1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供用于检测幽门螺杆菌耐药基因位点的引物组和试剂盒，以期解决现有技术中存在的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术具体采用如下技术方案。
3、本专利技术的第一方面保护用于检测幽门螺杆菌耐药基因位点的引物组，所述的引物组包括扩增引物组和延伸引物组，所述的扩增引物组包含序列如seq id no.1所示至seqid no.42所示的扩增引物。
4、在本申请的某些实施方式中，所述的扩增引物组中的引物可以是每条扩增引物的单独形式存在，也可以是扩增引物的混合物。优选地，所述的扩增引物组是扩增引物的混合物。
5、在本申请的某些实施方式中，所述的扩增引物组分为第一扩增引物组和第二扩增引物组，所述的第一扩增引物组包含序列如seq id no.1所示至seq id no.20所示的扩增引物，所述的第二扩增引物组包含序列如seq id no.21所示至seq id no.42所示的扩增引物。
6、在本申请的某些实施方式中，所述的延伸引物组中的引物可以是每条延伸引物的单独形式存在，也可以是延伸引物的混合物。优选地，所述的延伸引物组是延伸引物的混合物。
7、在本申请的某些实施方式中，所述的延伸引物组包含序列如seq id no.43所示至seq id no.69所示的延伸引物。
8、在本申请的某些实施方式中，所述的延伸引物组分为第一延伸引物组和第二延伸引物组，所述的第一延伸引物组包含序列如seq id no.43所示至seq id no.52所示的延伸引物，所述的第二延伸引物组包含序列如seq id no.53所示至seq id no.69所示的延伸引物。
9、在本申请的某些实施方式中，所述的幽门螺杆菌耐药基因包括6种抗生素耐药基因。
10、优选地，所述的6种抗生素包括克拉霉素、喹诺酮类药物、甲硝唑、阿莫西林、四环素和呋喃唑酮。
11、更优选地，所述喹诺酮类药物选自氧氟沙星、诺氟沙星、二氟沙星、氟罗沙星、奥比沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、环丙沙星、培氟沙星、依诺沙星、司帕沙星和洛美沙星中的一种或多种。
12、更优选地，克拉霉素耐药基因包括23srrna，位点包括a2142g、a2143g和a2115c。
13、更优选地，喹诺酮类药物耐药基因包括gyra，位点包括87-snp1和87-snp2。
14、更优选地，阿莫西林耐药基因包括pbp1，位点包括t1096c、g1120c_t、c1267t、c1667g、a1684t、a1777g、g1783a和c959t。
15、更优选地，呋喃唑酮耐药基因包括pord和oord，位点包括c347g、c156t、c165t、a335g和c349a_g。
16、更优选地，四环素耐药基因包括16srrna，位点包括16s_926、16s_927和16s_928。
17、更优选地，甲硝唑耐药基因包括rdxa，位点包括a91g、c92a、t262c和g392a。
18、优选地，检测对象还包括1种质子泵抑制剂代谢基因，所述质子泵抑制剂代谢基因包括cyp2c19，位点包括rs4986893和rs4244285。
19、本专利技术的第二方面保护上文所述的引物组在制备检测幽门螺杆菌耐药基因位点的产品中的用途。
20、在本申请的某些实施方式中，所述的产品包括试剂盒、膜条、芯片、检测试剂或检测系统。
21、本专利技术的第三方面保护一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因位点的试剂盒，包括如上文所述的引物组。所述的试剂盒能检测幽门螺杆菌6种抗生素耐药基因和1种质子泵抑制剂代谢基因，共计27个检测位点。
22、在本申请的某些实施方式中，在由所述的扩增引物组形成的混合物中，每条扩增引物的浓度为0.5本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于检测幽门螺杆菌耐药基因位点的引物组，所述的引物组包括扩增引物组和延伸引物组，其特征在于，所述的扩增引物组包含序列如SEQ ID NO.1所示至SEQ ID NO.42所示的扩增引物。
2.如权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述的扩增引物组分为第一扩增引物组和第二扩增引物组，所述的第一扩增引物组包含序列如SEQ ID NO.1所示至SEQ ID NO.20所示的扩增引物，所述的第二扩增引物组包含序列如SEQ ID NO.21所示至SEQ ID NO.42所示的扩增引物。
3.如权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述的延伸引物组包含序列如SEQ IDNO.43所示至SEQ ID NO.69所示的延伸引物。
4.如权利要求3所述的引物组，其特征在于，所述的延伸引物组分为第一延伸引物组和第二延伸引物组，所述的第一延伸引物组包含序列如SEQ ID NO.43所示至SEQ ID NO.52所示的延伸引物，所述的第二延伸引物组包含序列如SEQ ID NO.53所示至SEQ ID NO.69所示的延伸引物。
5.如权利要求1-4任一项
6.一种用于检测幽门螺杆菌耐药基因位点的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-4任一项所述的引物组。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，在由所述的扩增引物组形成的混合物中，每条扩增引物的浓度为0.5～1μM；
8.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括PCR扩增反应用试剂、虾碱性磷酸酶消化反应用试剂或延伸反应用试剂。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，包括以下特征中任一项或多项：
10.如权利要求6-9任一项所述的试剂盒在制备检测幽门螺杆菌耐药基因位点的产品中的用途。
11.一种幽门螺杆菌耐药基因位点的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.用于检测幽门螺杆菌耐药基因位点的引物组，所述的引物组包括扩增引物组和延伸引物组，其特征在于，所述的扩增引物组包含序列如seq id no.1所示至seq id no.42所示的扩增引物。
2.如权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述的扩增引物组分为第一扩增引物组和第二扩增引物组，所述的第一扩增引物组包含序列如seq id no.1所示至seq id no.20所示的扩增引物，所述的第二扩增引物组包含序列如seq id no.21所示至seq id no.42所示的扩增引物。
3.如权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述的延伸引物组包含序列如seq idno.43所示至seq id no.69所示的延伸引物。
4.如权利要求3所述的引物组，其特征在于，所述的延伸引物组分为第一延伸引物组和第二延伸引物组，所述的第一延伸引物组包含序列如seq id no.43所示至seq id no.52所示的延伸引物，...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘伟，姚浩，李力，何逖，
申请(专利权)人：上海吉凯医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：
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