【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及nk细胞，特别涉及一种nk细胞在治疗肿瘤中的用途。
技术介绍
1、自然杀伤细胞(natural killer cell，nk)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、 抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生，能够识别靶细胞、杀伤介质。nk细胞不同于t、b细胞，是一类无需预先致敏就能非特异性杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的淋巴细。由于nk细胞能够识别和裂解肿瘤细胞，以nk细胞为基础的肿瘤免疫治疗领域受到广泛关注。nk细胞的特点是它们具有通过不同机制杀死肿瘤细胞的潜力，而无需事先致敏，因此已成为癌症免疫治疗中的重要工具。但是其抗肿瘤效果有待提高。
2、嵌合抗原受体（chimeric antigen receptors，cars）是在免疫细胞表面表达的合成蛋白，由细胞外和细胞内两部分组成。这些受体具有识别并绑定恶性细胞表面特定蛋白质的能力，进而触发免疫细胞的激活和细胞毒性，以消灭靶向的恶性细胞。car主要由三个功能域构成，分别是胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域。胞外结构域由负责识别并结合抗原的单克隆抗体的单链可变片段（scfv）及一段起连接作用的铰链区（hinge）构成。胞内结构域由共刺激结构域和信号转导结构域构成。
3、细胞毒t淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic t lymphocyte-associated antigen-4,ctla4）又名cd152，是一种白细胞分化抗原，是t细胞上的一种跨膜受体，与cd28共同享有b7分子配体，而ctla4与b7分子结
技术实现思路
1、针对现有技术所存在的技术问题，本专利技术提供了一种nk细胞在治疗肿瘤中的用途。本专利技术提供的nk细胞以car-nk方式呈现，该car分子能够特异性靶向ctla4分子，能够用于各种类型ctla4阳性实体瘤肿瘤的靶向治疗。
2、本专利技术的目的之一在于提供一种car-nk细胞的表达载体，所述表达载体包含靶向ctla4的car基因序列；
3、优选地，所述靶向ctla4的car依次是由cd8α信号肽、靶向ctla4的单链抗体、cd8a铰链区、cd8a跨膜结构域、cd28蛋白共刺激结构域和cd3ζ胞信号传导结构域组成；
4、进一步地，所述car-nk的氨基酸序列如seq id no.1所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.2所示；
5、优选地，所述cd8α信号肽序列的氨基酸序列如seq id no.3所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.4所示；
6、优选地，靶向ctla4的单链抗体的氨基酸序列如seq id no.5所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.6所示；
7、优选地，cd8a铰链区的氨基酸序列如seq id no.7所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.8所示；
8、优选地，cd8a跨膜结构域的氨基酸序列如seq id no.9所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.10所示；
9、优选地，cd28蛋白共刺激结构域的氨基酸序列如seq id no.11所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.12所示；
10、优选地，cd3ζ胞信号传导结构域的氨基酸序列如seq id no.13所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.14所示；
11、本专利技术的另一个目的之一在于提供一种car-nk表达载体的构建方法，以靶向ctla4的嵌合抗原受体基因为目的基因，利用重组慢病毒包装系统，构建获得靶向ctla4的car-nk表达载体。
12、本专利技术的另一个目的之一在于提供一种car-nk细胞，使用上述car-nk表达载体转导nk细胞获得。
13、本专利技术的另一个目的之一在于上述car-nk表达载体或car-nk细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。
14、优选地，上述肿瘤为ctla4过表达肿瘤。
15、本专利技术的优点如下：本专利技术提供的嵌合抗原受体能够特异识别ctla4，具有良好的靶向性，包含该嵌合抗原受体的car-nk细胞在体外表现出很好杀伤能力，并且其在体内实验中，同样显示出很好的抗原靶向性和肿瘤杀伤活性，因此，本专利技术制备的car-nk细胞能够用于各种类型实体瘤肿瘤的靶向治疗。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种通用型CAR-NK表达载体，其特征在于，所述表达载体包含靶向CTLA4的CAR基因序列；所述靶向CTLA4的CAR依次是由CD8α信号肽、靶向CTLA4的单链抗体、CD8a铰链区、CD8a跨膜结构域、CD28蛋白共刺激结构域和CD3ζ胞信号传导结构域组成；所述靶向CTLA4的CAR-NK的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.如权利要求1所述的通用型CAR-NK表达载体，其特征在于，所述CD8α信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其编码的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.如权利要求1所述的通用型CAR-NK表达载体，其特征在于，所述靶向CTLA4的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，其编码的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
4.如权利要求1所述的通用型CAR-NK表达载体，其特征在于，所述CD8a铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，其编码的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
5.如权利要求1所述的通用型CA
6.如权利要求1所述的通用型CAR-NK表达载体，其特征在于，所述CD28蛋白共刺激结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，其编码的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。
7.如权利要求1所述的通用型CAR-NK表达载体，其特征在于，所述CD3ζ胞信号传导结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示，其编码的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。
8.权利要求1-7任一项所述通用型CAR-NK表达载体的构建方法，其特征在于，以靶向CTLA4的嵌合抗原受体基因为目的基因，利用重组慢病毒包装系统，构建获得靶向CTLA4的CAR-NK表达载体。
9.一种通用型CAR-NK细胞，其特征在于，使用权利要求8所述CAR-NK表达载体转导NK淋巴细胞获得。
10.权利要求1-7任一项所述的通用型CAR-NK表达载体或权利要求9所述的通用型CAR-NK细胞在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤为CTLA4过表达肿瘤。
...【技术特征摘要】
1.一种通用型car-nk表达载体，其特征在于，所述表达载体包含靶向ctla4的car基因序列；所述靶向ctla4的car依次是由cd8α信号肽、靶向ctla4的单链抗体、cd8a铰链区、cd8a跨膜结构域、cd28蛋白共刺激结构域和cd3ζ胞信号传导结构域组成；所述靶向ctla4的car-nk的氨基酸序列如seq id no.1所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.2所示。
2.如权利要求1所述的通用型car-nk表达载体，其特征在于，所述cd8α信号肽的氨基酸序列如seq id no.3所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.4所示。
3.如权利要求1所述的通用型car-nk表达载体，其特征在于，所述靶向ctla4的单链抗体的氨基酸序列如seq id no.5所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.6所示。
4.如权利要求1所述的通用型car-nk表达载体，其特征在于，所述cd8a铰链区的氨基酸序列如seq id no.7所示，其编码的核苷酸序列如seq id no.8所示。
5.如权利要求1所述的通用型car-nk表达载体，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：戴晓宇，李栋，李树建，
申请(专利权)人：山东省泉溪生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。