【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，尤其涉及用于检测的引物组，具体是一种用于流产衣原体检测的lmtia引物组、探针、试剂盒及应用。
技术介绍
1、流产衣原体(chlamydophila abortus)属衣原体科衣原体属，是一种重要的人兽共患革兰氏阴性致病菌，可感染人并引起孕妇流产，被认为是绵羊地方性流产(ovineenzootic abortion，oea)的主要病原。流产衣原体主要感染反刍动物(特别是牛、绵羊和山羊)，并可在畜群中流行，导致被感染动物在妊娠后期出现流产、死胎和产弱仔等现象，对畜牧业造成严重的经济损失，人群也会通过接触患病动物及流产胎儿或吸入阳性气溶胶感染，参与到传染链条中。由于患病动物在感染早期很少表现出典型的临床症状，因此在怀孕期间及早发现病原的感染对于控制该病的传播至关重要，加强对流产衣原体检测方法的研究具有重要的实际意义和应用价值。
2、目前，关于流产衣原体的检测方法主要有病原检测法、血清学检测法和核酸检测法。根据世界动物卫生组织(office international desépizooties，oie)陆生动物疾病诊断手册，可采用改良的zilhl-neelsen(zn)方法对流产衣原体进行直接鉴定，但该方法依赖于熟练的技术人员，且存在一定的误检可能。补体结合试验(complement fixation test，cft)一直是诊断oea的标准血清学方法，但由于其特异性较低，逐渐被酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbnent assay，elisa)所替代。目前，市场
3、cn110760601a公开了一种基于多重pcr办法，可以同时检测布鲁氏菌、流产衣原体和产气荚膜梭菌，cn110656290a公开了一种可以同时检测流产布鲁氏菌、分歧杆菌和流产衣原体的多重pcr引物组，cn110791579a公开了一种用于鉴别流产嗜性衣原体的实时荧光定量pcr检测试剂盒和检测方法，以上核酸检测方法所需检测时间较长，往往需要等待一个小时以上，且灵敏度有待进一步提高。
4、梯形熔解温度核酸等温扩增技术(ladder-shape melting temperatureisothermal amplification，lmtia)是一种新型基因快速精准检测技术，可以在等温环境下对靶基因进行高效、快速的扩增，大大缩短反应时间(小于30min)，并可与特异性荧光探针结合，进一步提高扩增反应的灵敏度和特异性。目前，尚未有报道利用lmtia技术结合特异性荧光探针检测流产衣原体的试剂盒的检测方法。
5、因此，基于lmtia技术建立一种实验室诊断和临床检测流产衣原体的快速检测方法，对该病流行传播的控制和预防具有重要意义。
技术实现思路
1、为了解决现有技术的不足，本专利技术提出了一种用于流产衣原体检测的lmtia引物组、探针、试剂盒及其应用，能够有效的解决现有技术中对流产衣原体存在漏诊、检测所需时间较长等问题，为流产衣原体实验室诊断和临床快速检测中提供技术支持。
2、本专利技术要解决的技术问题是通过以下技术方案实现的：
3、一种用于流产衣原体检测的lmtia引物组，与探针相配合，引物组和探针的序列如下：
4、c.abortus-f：
5、5’-ttcggggagtttggatatgtttttagcaatagagtttccaaatcag-3’
6、c.abortus-b：
7、5’-actccccgaagacaaacattttctatccttgagttatttgtga-3’
8、c.abortus-lf：5’-ggagagagtaacagccttgga-3’
9、c.abortus-lb：5’-gtgagtagattgtcaaaaacga-3’
10、c.abortus-lf pr：5’-bhq2-agagtaacagcctta-6-fam-3’。
11、一种用于流产衣原体检测的试剂盒，包括上述lmtia引物组和探针。
12、在本专利技术中，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品。
13、进一步的，所述阳性对照品为流产衣原体基因组dna，阴性对照品为无菌双蒸水。
14、上述lmtia引物组、探针、试剂盒应用于流产衣原体c.abortus检测中。
15、一种检测流产衣原体的方法，利用上述的用于检测流产衣原体的lmtia引物组和探针或试剂盒进行核酸等温扩增。
16、在本专利技术中，检测方法包括以下步骤：
17、(1)取待测样品，抽提样品基因组dna；
18、(2)利用上述样品基因组dna，用前述lmtia引物组、探针或试剂盒配置lmtia反应体系，并将配制好的lmtia反应体系置于实时荧光pcr仪中进行等温扩增；
19、(3)对扩增曲线进行分析，若结果图中出现指数曲线，则该样品为流产衣原体阳性，若无扩增曲线，则该样品为流产衣原体阴性。
20、进一步的，所述检测方法步骤(2)中等温扩增的温度为59.5℃，等温扩增的时间为30min。
21、本专利技术提供上述用于检测流产衣原体的lmtia引物组、探针的用途，可用于检测流产衣原体。
22、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：本专利技术所述的用于检测流产衣原体的lmtia引物组、探针具有良好的特异性和灵敏度，特异性好，于59.5℃时特异性更好，灵敏度高，可达10fg/μl，检测速度快，仅需不到30分钟，在恒温条件下即可实现对样品中流产衣原体的检测。
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1.一种用于流产衣原体检测的LMTIA引物组，与探针相配合，其特征在于：所述引物组和探针的序列如下：
2.一种用于流产衣原体检测的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1中所述的LMTIA引物组和探针。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：还包括阳性对照品和阴性对照品。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照品为流产衣原体基因组DNA，阴性对照品为无菌双蒸水。
5.权利要求1所述的LMTIA引物组、探针在流产衣原体C.abortus检测中的应用。
6.权利要求2-4任一所述的试剂盒在流产衣原体C.abortus检测中的应用。
7.一种检测流产衣原体的方法，其特征在于：利用权利要求1所述的LMTIA引物组、探针或权利要求2-4任一所述的试剂盒进行核酸等温扩增。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中等温扩增的温度为59.5℃，等温扩增的时间为30min。
【技术特征摘要】
1.一种用于流产衣原体检测的lmtia引物组，与探针相配合，其特征在于：所述引物组和探针的序列如下：
2.一种用于流产衣原体检测的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1中所述的lmtia引物组和探针。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：还包括阳性对照品和阴性对照品。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照品为流产衣原体基因组dna，阴性对照品为无菌双蒸水。
5.权利要求1所述的lmtia引物组、探针在流产衣...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔朝辉，王德国，黄夕瑶，张良，卢作焜，贾凯，周世杰，贾璇，冯晓轩，张素兰，田娟，
申请(专利权)人：许昌学院，
类型：发明
国别省市：
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