【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测，具体涉及一种抗体免疫检测试剂及其制备方法和应用。
技术介绍
1、抗原表位，又称抗原决定簇或抗原决定基(antigenic determinant，ad)指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团。抗原表位可能是由一级结构决定的线性连续的，也可能是由三级结构决定的不连续的空间构象。表位是抗原免疫原性的基础，研究抗原表位，对于设计具有免疫原性和中和活性的多肽、新型疫苗分子及新型诊断试剂具有重大意义，尤其是在制作特异性、稳定性良好的诊断试剂盒中尤为重要。
2、免疫检测所针对的血清样本中含有的抗体类型包含构象型表位抗体和线性表位抗体两类。目前重组抗原的构象表位和线性表位的稳定性尚有不足，需要低温保存，并且只能在一定时间范围内保持活性。抗原的一级结构，即组成蛋白质多肽链的线性氨基酸序列决定其线性表位。在一级结构基础上，通过肽链的空间折叠形成固定的三级空间结构，空间结构上即包含有抗原的构象表位。抗原的三级结构通常由分子间作用力形成，少有共价键维持，主要靠次级键，包括氢键、疏水键、盐键以及范德华力等，这些次级键可存在于一级结构序号相隔很远的氨基酸残基的r基团之间，易受环境中ph、温度、离子强度等的影响，有变动的可能性，故随着储存条件变化和时间推移，三级结构会逐渐改变，最终导致抗原构象表位消失，导致抗原无法被对应构象表位抗体识别。而当抗原发生一级氨基酸序列的降解时，会导致线性表位的消失，从而使抗原的免疫检测能力进一步变弱。通常相比于线性表位，构象表位稳定性更差。
3、为了更好地将重组抗原应用在抗体的
4、因此，目前免疫诊断中亟需一种稳定性高的抗体免疫检测试剂。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术的不足，提供了一种抗体免疫检测试剂，所述检测试剂中的重组抗原包括通过位点特异性共价键环化的环状重组抗原，通过环化可以降低所述环状重组抗原中的蛋白折叠域与非折叠域的构象熵，进而使抗原表位稳定性显著提高，在相同条件下，比未环化重组抗原免疫活性稳定性提升2-10倍。因此本专利技术的检测试剂性能大幅提升，特异性、稳定性高。
2、为此，本专利技术第一方面提供了一种抗体免疫检测试剂，其包括：
3、试剂1，包含重组抗原1包被的发光微粒；
4、试剂2，包含与特异性配对成员中的一员连接的重组抗原2；
5、其中，所述重组抗原1和/或重组抗原2为环状单体蛋白，所述环状单体蛋白包括肽链a、肽链b和能够与特异性抗体相结合的肽链c；所述环状单体蛋白通过肽链a和肽链b之间自发形成位点特异性共价键成环。
6、在本专利技术的一些实施方式中，所述肽链a有空间构象，且能够识别肽链b并催化形成异肽键。
7、在本专利技术的另一些实施方式中，所述肽链a选自spycatcher、snoopcatcher和sdycatcher中的任意一种；和/或所述肽链b选自spytag、snooptag和sdytag中的任意一种g。
8、在本专利技术的一些实施方式中，所述肽链c有空间构象；优选地，所述空间构象中所述肽链c的氨基端和所述肽链c的羧基端的距离不超过优选不超过更优选不超过
9、在本专利技术的另一些实施方式中，所述肽链a与所述肽链c之间设置氨基酸桥a；和/或所述肽链b与所述肽链c之间设置氨基酸桥b；所述氨基酸桥a和氨基酸桥b是柔性的。
10、在本专利技术的一些实施方式中，所述氨基酸桥a和氨基酸桥b的总长度为6～50个氨基酸；优选为15～30个氨基酸。
11、在本专利技术的另一些实施方式中，所述氨基酸桥a和氨基酸桥b各自独立地由无侧链或只含有亲水侧链的氨基酸组成，且所述氨基酸桥a和氨基酸桥b均不含有带巯基侧链和/或带甲基侧链的氨基酸；优选地，所述亲水侧链为羟基。
12、在本专利技术的一些实施方式中，所述氨基酸桥a和氨基酸桥b中均包括重复序列；优选地，所述重复序列为gg或gs；进一步优选地，所述重复序列的重复倍数为2～6倍。
13、本专利技术第二方面提供了一种制备如本专利技术第一方面所述的检测试剂的方法，其包括如下步骤：
14、s1，将重组抗原1与发光微粒以质量比为(1～5)：10的比例混合于缓冲液进行反应，获得重组抗原1包被的发光微粒；
15、s2，将重组抗原2与特异性配对成员以摩尔比为1:(15～60)的比例混合后进行反应，获得与特异性配对成员连接的重组抗原2。
16、本专利技术第三方面提供了一种抗体免疫检测试剂盒，其包括如本专利技术第一方面所述的检测试剂或第二方面所述方法制备的检测试剂；其中，所述的重组抗原1的蛋白结构为线性结构，所述重组抗原2的蛋白结构为环状结构。
17、本专利技术第四方面提供了一种检测生物样品中的待测抗体的方法，其包括如下步骤：
18、t1，将生物样品与如权利要求1-13中任意一项所述检测试剂中的试剂1和试剂2混合或与如权利要求17或18中任意一项所述试剂盒中的试剂1和试剂2混合，获得混合液1；
19、t2，将混合液1与感光试剂混合，获得混合液2；所述感光试剂包含特异性配对成员中的另一员包被的感光微粒；
20、t3，对混合液2进行激光照射，检测化学发光信号，并确定生物样品中是否存在待测抗体以及待测抗体的含量。
21、本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的抗体免疫检测试剂中的重组抗原包括通过位点特异性共价键环化的环状重组抗原，通过环化可以降低所述环状重组抗原中的蛋白折叠域与非折叠域的构象熵，进而使得抗原表位稳定性显著提高。在相同条件下，环状重组抗原比未环化重组抗原的免疫活性和稳定性均提升了2-10倍。因此本专利技术的检测试剂性能大幅提升，灵敏度、特异性、稳定性高，能够更好地进行抗体免疫检测。
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1.一种抗体免疫检测试剂，其包括：
2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述肽链A有空间构象，且能够识别肽链B并催化形成异肽键；优选地，所述肽链A选自SpyCatcher、SnoopCatcher和SdyCatcher中的任意一种，和/或所述肽链B选自SpyTag、SnoopTag和SdyTag中的任意一种。
3.根据权利要求1或2所述的检测试剂，其特征在于，所述肽链C有空间构象；优选地，所述空间构象中所述肽链C的氨基端和所述肽链C的羧基端的距离不超过优选不超过更优选不超过
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的检测试剂，其特征在于，所述肽链A与所述肽链C之间设置氨基酸桥a；和/或所述肽链B与所述肽链C之间设置氨基酸桥b；所述氨基酸桥a和氨基酸桥b是柔性的。
5.根据权利要求4所述的检测试剂，其特征在于，所述氨基酸桥a和氨基酸桥b的总长度为6～50个氨基酸；优选为15～30个氨基酸。
6.根据权利要求4或5所述的检测试剂，其特征在于，所述氨基酸桥a和氨基酸桥b各自独立地由无侧链或只含有亲水侧链的氨基酸组成，且所
7.根据权利要求4-6中任意一项所述的检测试剂，其特征在于，所述氨基酸桥a和氨基酸桥b中均包括重复序列；优选地，所述重复序列为GG或GS；进一步优选地，所述重复序列的重复倍数为2～6倍。
8.一种制备如权利要求1-7中任意一项所述的检测试剂的方法，其包括如下步骤：
9.一种抗体免疫检测试剂盒，其包括如权利要求1-7中任意一项所述的检测试剂或权利要求8所述方法制备的检测试剂；其中，所述重组抗原1的蛋白结构为线性结构，所述重组抗原2的蛋白结构为环状结构。
10.一种检测生物样品中的待测抗体的方法，其包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种抗体免疫检测试剂，其包括：
2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述肽链a有空间构象，且能够识别肽链b并催化形成异肽键；优选地，所述肽链a选自spycatcher、snoopcatcher和sdycatcher中的任意一种，和/或所述肽链b选自spytag、snooptag和sdytag中的任意一种。
3.根据权利要求1或2所述的检测试剂，其特征在于，所述肽链c有空间构象；优选地，所述空间构象中所述肽链c的氨基端和所述肽链c的羧基端的距离不超过优选不超过更优选不超过
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的检测试剂，其特征在于，所述肽链a与所述肽链c之间设置氨基酸桥a；和/或所述肽链b与所述肽链c之间设置氨基酸桥b；所述氨基酸桥a和氨基酸桥b是柔性的。
5.根据权利要求4所述的检测试剂，其特征在于，所述氨基酸桥a和氨基酸桥b的总长度为6～50个氨基酸；优...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈英豪，洪琳，刘宇卉，李临，
申请(专利权)人：上海索昕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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