【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，具体而言，涉及一种基于环介导等温扩增的呼吸道病毒检测的核酸组合物、试剂盒及检测方法。
技术介绍
1、呼吸道疾病根据感染部位不同可分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，其中下呼吸道感染症状更为严重，多由病毒引起。下呼吸道感染常见的疾病包括气管炎、支气管炎和肺炎等，对患者的呼吸系统的伤害较大，主要表现为发热、咳嗽、并可能伴有胸痛、气促，严重时还可能出现呼吸困难、休克等症状，威胁生命健康。急性呼吸道感染的病毒包括流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒和腺病毒等。此外，肺炎支原体也是引起急性上呼吸道感染常见的病原体，多见于3岁以上的儿童。
2、尽管呼吸道疾病的临床表现相似，但不同病原体的治疗手段却不尽相同，第一时间确定病原体种类，进行精准诊断，可以大大提升疾病治疗的效果。呼吸道疾病往往由混合感染引发，单从症状上难以进行判断，因此快速精准的检测就成为了关键。
3、长期以来，病毒感染导致的呼吸道疾病的常规检测方法是病毒培养和直接/间接免疫荧光测定法，但是该方法对样本采集，保存的要求较高，同时培养条件要求严格，具有耗时，易污染，灵敏度有限等不足之处，无法满足快速精准检测的要求。核酸扩增技术作为新兴的检测手段，具有快速、高通量、准确度高的优点，其中运用最为广泛的当属实时荧光pcr技术。它不但可以区分不同的病原体，甚至可以对各种病原体进行定量检测，更利于临床上的诊断和治疗，但是该技术对仪器设备的要求较高。
4、环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplificatio
5、尽管市面上已经出现了一些基于lamp的呼吸道病毒检测方法或试剂盒，但其专利技术存在一些局限之处。江苏汇先医药技术有限公司专利技术的“lamp检测甲流病毒、乙流病毒及呼吸道合胞病毒的试剂盒及引物组合、方法”(cn202111317870.8)仅针对甲流和乙流两种病毒做出检测，“一种lamp检测呼吸道病毒的试剂盒及引物组合物”(cn202111319647.7)仅针对呼吸道合胞病毒a和呼吸道合胞病毒b两种病毒进行了检测，上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心专利技术的“环介导等温扩增检测肺炎支原体的试剂盒及方法”(cn201810704561.8)仅针对肺炎支原体一种病原体进行了检测，上海星耀医学科技发展有限公司专利技术的“一种检测鼻病毒的试剂盒”(cn201911386987.4)仅针对鼻病毒一种病原体进行了检测。
6、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种基于环介导等温扩增的呼吸道病毒检测的核酸组合物、试剂盒及检测方法，通过该检测方法可以同时检测包括腺病毒、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒a、呼吸道合胞病毒b、甲型流感病毒、乙型流感病毒和鼻病毒在内的7种病原体，能够快速、简便的、准确的对样本进行检测，用来弥补现有检测方法在市场上的不足。
2、本专利技术是这样实现的：
3、第一方面，本专利技术提供了一种用于检测呼吸道病原的核酸组合物，上述呼吸道病原包括腺病毒、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒a、呼吸道合胞病毒b、甲型流感病毒、乙型流感病毒和鼻病毒；
4、其中，扩增腺病毒的引物的核苷酸序列如seq id no：1-6所示；
5、扩增肺炎支原体的引物的核苷酸序列如seq id no：7-12所示；
6、扩增呼吸道合胞病毒a的引物的核苷酸序列如seq id no：13-18所示；
7、扩增呼吸道合胞病毒b的引物的核苷酸序列如seq id no：19-23所示；
8、扩增甲型流感病毒的引物的核苷酸序列如seq id no：24-29所示；
9、扩增乙型流感病毒的引物的核苷酸序列如seq id no：30-34所示；
10、扩增鼻病毒的引物的核苷酸序列如seq id no：35-40所示。
11、本专利技术中检测吸道病原微生物的核酸组合物包括以腺病毒、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒a、呼吸道合胞病毒b、甲型流感病毒、乙型流感病毒和鼻病毒作为检测靶标而设计的引物。在设计用于检测新腺病毒、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒a、呼吸道合胞病毒b、甲型流感病毒、乙型流感病毒和鼻病毒的引物时，需要找出转录效率高的病原基因片段进行设计，保证在此基因片段内设计的引物能够有较好的扩增效果。
12、在一些实施例中，上述核酸组合用于环介导等温扩增中以扩增呼吸道病原的核酸。
13、第二方面，本专利技术提供了上述核酸组合物在制备用于检测呼吸道病原的试剂盒中的应用。
14、第三方面，本专利技术提供了一种用于检测呼吸道病原微生物的核酸的试剂盒，其包括含有上述用于检测呼吸道病原微生物的核酸组合物的扩增试剂。
15、在一些实施例中，扩增试剂中还包括dntp、mgso4、荧光染料、bst dna聚合酶和反转录酶。
16、在一些实施例中，上述核酸组合物包括呼吸道病原的上游外部引物、下游外部引物、上游内部引物、下游内部引物、上游环引物和下游环引物；
17、其中，扩增试剂中的上游外部引物、下游外部引物、上游内部引物、下游内部引物、上游环引物和下游环引物的浓度比为1：1：8：8：4：4。
18、第四方面，本专利技术还提供了一种用于检测呼吸道病原的核酸的方法，其包括：将样本与上述扩增试剂混合，配制为扩增体系，然后加入荧光定量pcr仪中，进行扩增反应，反应完成后，根据扩增曲线图和ct值对检测结果进行分析或者肉眼观察白色沉淀，获得检测结果。
19、在一些实施例中，扩增反应的25μl反应体系为：1.5μldntp、1.5μlmgso4、0.5μlbstdna聚合酶、0.25μl反转录酶、0.5μl荧光染料、2.5μlbuffer、1.3μl核酸组合物、10μl核酸模板、补足无核酶水至25μl。
20、在一些实施例中，扩增反应的时间为30-40min，温度为60-65℃。
21、本专利技术具有以下有益效果：
22、(1)本专利技术中用于检测腺病毒、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒a、呼吸道合胞病毒b、甲型流感病毒、乙型流感病毒和鼻病毒的核酸组合物可快速、准确地检测各种呼吸道病毒，以弥补针对呼吸道病毒检测技术存在的费时耗力的缺陷，提高检测灵敏度和特异性，降低劳动强度，缩短检测周期；对于临床而言，能够在1小时内获得检测结果，对于快速辅助指导治疗和用药也具有重要意义；
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【技术保护点】
1.一种用于检测呼吸道病原的核酸组合物，其特征在于，所述呼吸道病原包括腺病毒、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒A、呼吸道合胞病毒B、甲型流感病毒、乙型流感病毒和鼻病毒；
2.根据权利要求1所述的用于检测呼吸道病原的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物用于环介导等温扩增中以扩增所述呼吸道病原的核酸。
3.如权利要求1或2所述的核酸组合物在制备用于检测呼吸道病原的试剂盒中的应用。
4.一种用于检测呼吸道病原的核酸的试剂盒，其特征在于，其包括含有权利要求1或2所述的用于检测呼吸道病原微生物的核酸组合物的扩增试剂。
5.根据权利要求4所述的用于检测呼吸道病原的核酸的试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂中还包括dNTP、MgSO4、荧光染料、Bst DNA聚合酶和反转录酶。
6.根据权利要求5所述的用于检测呼吸道病原的核酸的试剂盒，其特征在于，所述核酸组合物包括所述呼吸道病原的上游外部引物、下游外部引物、上游内部引物、下游内部引物、上游环引物和下游环引物；
7.一种用于检测呼吸道病原的核酸的方法，其特征在于，所述方法非疾病诊断
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述扩增反应的25μL反应体系为：1.5μLdNTP、1.5μLMgSO4、0.5μLBst DNA聚合酶、0.25μL反转录酶、0.5μL荧光染料、2.5μLBuffer、1.3μL核酸组合物、10μL核酸模板、补足无核酶水至25μL。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述扩增反应的时间为30-40min，温度为60-65℃。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测呼吸道病原的核酸组合物，其特征在于，所述呼吸道病原包括腺病毒、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒a、呼吸道合胞病毒b、甲型流感病毒、乙型流感病毒和鼻病毒；
2.根据权利要求1所述的用于检测呼吸道病原的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物用于环介导等温扩增中以扩增所述呼吸道病原的核酸。
3.如权利要求1或2所述的核酸组合物在制备用于检测呼吸道病原的试剂盒中的应用。
4.一种用于检测呼吸道病原的核酸的试剂盒，其特征在于，其包括含有权利要求1或2所述的用于检测呼吸道病原微生物的核酸组合物的扩增试剂。
5.根据权利要求4所述的用于检测呼吸道病原的核酸的试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂中还包括dntp、mgso4、荧光染料、bst dna聚合酶和反转录酶。
6.根据权利要求5所述的用于检测呼吸道病原的核酸的试剂盒，其特征在于，所述核酸组合...
【专利技术属性】
技术研发人员：王会娟，张杰，戴鹏高，李刚，陈翠萍，
申请(专利权)人：陕西佰美基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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