【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物病毒检测，具体涉及一种检测甘蔗花叶病毒的胶体金免疫试纸条及专用抗体。
技术介绍
1、玉米(zea mays l.)是世界第一大粮食作物，在保障全球粮食安全中举足轻重。玉米矮花叶病(maize dwarf mosaic disease)是一种世界性玉米病害，严重危害非洲、美洲、亚洲和欧洲的玉米安全生产(fuchs et al.,1990；kannan et al.,2018)。在中国，由矮花叶病造成的玉米产量损失在20％～80％，严重地块则高达90％甚至100％。该病毒病的发生具有典型的爆发性、迁移性和间歇性特点：最早于20世纪60至70年代在我国华北地区大流行，随后在不同玉米主产区流行发生；进入80年代，由于抗病玉米品种的推广和栽培措施的改进，有效防治了该病害；在20世纪90年代，由于感病品种的大面积种植，该病害又出现回升且逐年加重(张成和等，1995；李新海和张世煌，2000)；进入21世纪后玉米矮花叶病在我国间歇性发生(范武刚等，2011；gao et al.,2011；yan et al.,2016)。
2、在大部分玉米产区，导致玉米矮花叶病的主要病原是甘蔗花叶病毒scmv。近年来，尽管在玉米中已经鉴定了两个抗scmv的基因(leng et al.,2017；liu et al.,2017)，但在田间已经出现了一些能够突破玉米抗性的scmv强毒株系(gao et al.,2011；yan et al.,2016)；同时还发现了一些自然重组的scmv株系(moradi et al.,2016)；
3、“苗期检测+病株拔除”是防控作物病毒病的最有效手段之一，特别在一些高附加值的玉米制种田中确保scmv的清零具有重要经济价值。当前针对scmv的检测主要包括分子生物学和血清学检测方法；其中，基于rt-pcr的分子生物学检测手段可准确检测出样品中低丰度的scmv，灵敏度高，特异性强；血清学检测最常用的是酶联免疫吸附试验(elisa)，尽管检测灵敏度低于rt-pcr，但这种检测方法的特异性强和检测通量高；然而，以上2种检测方式需要精密仪器和专业的操作人员，只适用于低通量样品的检测，而并不适合于田间大量样品的检测，无法在田间地头实现对疑似病毒侵染样品的检测。而胶体金免疫试纸条操作简单，可在5～20分钟内通过肉眼观察判断检测结果，非常适用于在田间地头对病毒的检测。由于缺少配对识别scmv的特异性单克隆抗体，目前还未见有检测scmv胶体金试纸条的报道。
4、因此，开发和建立一种稳定地利用胶体金免疫试纸条检测scmv的方法对玉米矮花叶病的防控具有重要的应用价值。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种检测甘蔗花叶病毒的胶体金免疫试纸条及专用抗体。
2、第一方面，本专利技术提供了杂交瘤细胞株组，其包括分泌甘蔗花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株sc-bj-4和分泌甘蔗花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株sc-bj-6；
3、所述分泌甘蔗花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株sc-bj-4，其保藏编号为cctccno：c 2023360；
4、所述分泌甘蔗花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株sc-bj-6，其保藏编号为cctccno：c 2023361。
5、第二方面，本专利技术提供了单克隆抗体组，其包括单克隆抗体sc-bj-4和单克隆抗体sc-bj-6；
6、所述单克隆抗体sc-bj-4由保藏编号为cctcc no：c 2023360的杂交瘤细胞株分泌产生；
7、所述单克隆抗体sc-bj-6由保藏编号为cctcc no：c 2023361的杂交瘤细胞株分泌产生。
8、第三方面，本专利技术提供了第一方面所述的杂交瘤细胞株组或第二方面所述的单克隆抗体组在识别或辅助识别或检测或辅助检测甘蔗花叶病毒或其分离物或其粒子中的应用。
9、第四方面，本专利技术提供了第一方面所述的杂交瘤细胞株组或第二方面所述单克隆抗体组在制备识别或辅助识别或检测或辅助检测甘蔗花叶病毒或其分离物或其粒子产品中的应用。
10、上文所述应用中，所述产品为胶体金免疫试纸条。
11、第五方面，本专利技术提供了一种识别或辅助识别或检测或辅助检测甘蔗花叶病毒的产品，其包括第二方面所述单克隆抗体sc-bj-4和所述单克隆抗体sc-bj-6。
12、上文所述产品为胶体金免疫试纸条。
13、上文所述胶体金免疫试纸条包括固定在底板上的样品垫、免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；
14、所述免疫胶体金垫是结合有胶体金颗粒标记第二方面中所述单克隆抗体sc-bj-6的金标垫；
15、进一步地，所述免疫胶体金垫为将终浓度1.5mg/ml的含有胶体金颗粒标记单克隆抗体sc-bj-6的免疫胶体金溶液喷于金标垫，涂覆量2.5μl/cm，制备免疫胶体金垫。
16、所述硝酸纤维素膜设有检测线和质控线，所述检测线包被第二方面中所述单克隆抗体sc-bj-4。
17、所述质控线包被羊抗鼠igg抗体。
18、进一步地，所述单克隆抗体sc-bj-4和所述羊抗鼠igg抗体的包被浓度均为1mg/ml；
19、进一步地，所述检测线与质控线之间相距6-6.5mm。
20、在本专利技术的一种实施方案中，给出了检测甘蔗花叶病毒的胶体金免疫试纸条的制备过程，包括以下步骤：
21、(1)调节胶体金溶液的ph为7.0-7.8，向胶体金溶液中加入单克隆抗体sc-bj-6，使单克隆抗体sc-bj-6的终浓度为20-30μg/ml；混合均匀，室温反应35～45min，加入bsa溶液终止反应，静置20～40min，低速离心弃去凝聚的金胶粒沉淀，然后高速离心，弃去上清，沉淀物用金标液复溶，制成含有胶体金颗粒标记单克隆抗体sc-bj-6的免疫胶体金溶液；
22、(2)将步骤(1)制备的免疫胶体金溶液涂在金标垫上，得到免疫胶体金垫；
23、(3)将单克隆抗体sc-bj-4和羊抗鼠igg抗体分别喷涂于硝酸纤维素膜上，形成含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜；
24、(4)在底板上依次搭接固定样品垫、免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸，即制备得到胶体金免疫试纸条。
25、第六方面，本专利技术提供了第一方面中的所述分泌甘蔗花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株sc-bj-4或分泌甘蔗花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株sc-bj-6。
26、第七方面，本专利技术提供了第二方面中的所述单克隆抗体sc-bj-4或所述单克隆抗体sc-bj-6。
27、本专利技术还提供上本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.杂交瘤细胞株组，其包括分泌甘蔗花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株SC-BJ-4和分泌甘蔗花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株SC-BJ-6；
2.单克隆抗体组，其包括单克隆抗体SC-BJ-4和单克隆抗体SC-BJ-6；
3.权利要求1所述的杂交瘤细胞株组或权利要求2所述的单克隆抗体组在识别或辅助识别或检测或辅助检测甘蔗花叶病毒或其分离物或其粒子中的应用。
4.权利要求1所述的杂交瘤细胞株组或权利要求2所述的单克隆抗体组在制备识别或辅助识别或检测或辅助检测甘蔗花叶病毒或其分离物或其粒子产品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述产品为胶体金免疫试纸条。
6.一种识别或辅助识别或检测或辅助检测甘蔗花叶病毒的产品，其包括权利要求2中的所述单克隆抗体SC-BJ-4和所述单克隆抗体SC-BJ-6。
7.根据权利要求6所述的产品，其特征在于：所述产品为胶体金免疫试纸条。
8.根据权利要求6或7所述的产品，其特征在于：
9.权利要求1中的所述分泌甘蔗花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株S
10.权利要求2中的所述单克隆抗体SC-BJ-4或所述单克隆抗体SC-BJ-6。
...【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞株组，其包括分泌甘蔗花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株sc-bj-4和分泌甘蔗花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株sc-bj-6；
2.单克隆抗体组，其包括单克隆抗体sc-bj-4和单克隆抗体sc-bj-6；
3.权利要求1所述的杂交瘤细胞株组或权利要求2所述的单克隆抗体组在识别或辅助识别或检测或辅助检测甘蔗花叶病毒或其分离物或其粒子中的应用。
4.权利要求1所述的杂交瘤细胞株组或权利要求2所述的单克隆抗体组在制备识别或辅助识别或检测或辅助检测甘蔗花叶病毒或其分离物或其粒子产品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，...
【专利技术属性】
技术研发人员：费小红，杜开通，周涛，彭得智，王培，王皓，王黎锦，王蒙，
申请(专利权)人：隆平农业发展股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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