【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物合成及药物分析领域，具体涉及硼替佐米中三个具体结构的杂质及其制备方法，所述杂质作为硼替佐米质量控制参照标准品的用途，以及硼替佐米及其杂质的测试方法。
技术介绍
1、泛素-蛋白酶体途径是降解胞内蛋白质的重要途经，蛋白质通过与泛素活化酶、泛素结合、泛素连接酶相互作用从而进行泛素化标记，泛素化标记的蛋白质被26s蛋白酶体所识别并降解。近年来，人们意识到泛素-蛋白酶体系统功能紊乱与多种疾病的存在密切联系，包括神经退行性疾病、癌症、心血管和呼吸系统疾病等。特别是肿瘤，肿瘤细胞因其增殖的需求，对蛋白质稳态更加敏感，泛素-蛋白酶体系统可以通过促进抑癌蛋白如p53的降解或者阻滞致癌蛋白降解而影响肿瘤细胞的生存。
2、硼替佐米(bortezomib)，化学名为[(1r)-3-甲基-1-[[(2s)-1-氧代-3-苯基-2-[(吡嗪)氨基]丙基]丁基]硼酸，是全球首个人工合成的蛋白酶体抑制药。硼替佐米通过抑制泛素-蛋白酶体途径，导致多泛素化标记的蛋白质累积，诱导肿瘤细胞凋亡，达到治疗多发性骨髓瘤的作用。硼替佐米由美国millennium pharmaceutical公司开发，于2003年获得美国食品药品监督管理局批准，剂型为注射剂，一经上市就因疗效确切、毒副作用低、不易产生耐药而在临床治疗多发性骨髓瘤中占据重要的市场份额，随后于2004年5月在欧洲地区获准上市。在中国批准进口以后亦迅速占领骨髓瘤治疗市场，成为该领域销售额领先的产品。
3、硼替佐米结构较为复杂，其合成路线较长，目前主要的合成方法包括如专利文件
4、
5、蒎烷类结构化合物具有手性中心，硼替佐米的手性中心均由起始原料引入，因而该起始原料本身也是成品一种重要的工艺杂质。除此之外，硼替佐米在其整个合成过程、制剂过程以及储存过程中也都导致了结构多样的杂质的存在，包括未反应的原材料、原材料中所含的杂质的化学衍生物、合成副产物和降解产物等。
6、化学药物的杂质是指存在于化学药物中的无治疗作用或影响药物稳定性、疗效，甚至对人体健康有害的物质。任何影响药物纯度的物质均可称为杂质。杂质的分析和控制是保障用药安全有效的基础。因此，杂质研究在仿制药药学研究中占有重要地位，其是否得到全面准确的分析和控制，直接关系到药品的质量可控与安全性。化学药物中的有机杂质通常与活性成分具有类似的化学结构，其来源和去向的分析，以及准确和有效的控制，是化学仿制药药学研究的关键项目之一。
7、因此，为了进一步控制、监测硼替佐米制备、制剂及储存中的杂质，已有多项研究及多位学者关注硼替佐米的合成、纯化以及杂质监测方法，例如前述专利文件wo2005097809a中除制备方法以外，也描述了硼替佐米的纯化方法，采用乙酸乙酯或甲基叔丁基醚重结晶进行纯化，起到了一定的提高产物纯度效果，但该专利主要关注n(2-吡嗪羰基)-l-d/l-亮氨酸硼酸酐等结构类型的杂质，并未对硼替佐米生产制备中各类型杂质予以研究和监测。丛艳伟等([j].硼替佐米的合成，《中国新药杂志》，2014年第6期，第698-700页)开发了一种新的硼替佐米合成路线，在制备硼替佐米之前先制备含氟中间体，该中间体为固体颗粒，可用乙醇等有机溶剂进行纯化，保证产品质量，同时在采用含氟中间体进行后续操作的步骤中，几乎可全部使用水及与水互溶的有机溶剂作为反应媒介，大幅减少有机溶剂用量，降低对操作人员与环境的危害，合成路线如下所示：
8、
9、然而通过研究发现，上述制备方法虽具有操作和环境上的优越性，但产物中仍存在杂质，且杂质种类与既往合成方法中的杂质存在区别。因此，仅依靠合成、纯化方法的改进并不能满足硼替佐米生产制造全程中对杂质监测、控制的需求，并且控制杂质的首要条件是明确杂质的种类、结构及性质。因此，通过鉴定杂质、测定杂质含量是控制对硼替佐米工艺杂质的必要条件。
10、可见，现有的硼替佐米制备及分析技术中，存在产品纯度不足，缺乏对单个杂质的控制等缺陷。
11、针对现有技术种存在的上述缺陷，本专利技术在对硼替佐米的纯化及分析研究中，发现了硼替佐米的三种杂质，对它们各自的结构进行了鉴定，并开发出制备这三种杂质的方法，特别是一次性制备得到三种杂质化合物单体物质的方法。所述化合物可作为硼替佐米原料药和及制剂质量研究中可靠的杂质对照品，有助于硼替佐米原料和制剂质量研究与控制、有关物质的检测，有助于揭示药物的稳定性和可能降解途径，对药物的质量控制有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于提供如下的化合物a、b、c。
2、
3、所述化合物为硼替佐米的杂质。
4、所述化合物，其为至少70％的纯度，或者至少80％的纯度，或者至少90％的纯度，或者至少95％的纯度，或者至少96％的纯度，或者至少97％的纯度，或者至少98％的纯度，或者至少99％的纯度。
5、本专利技术的目的还在于提供上述化合物的制备方法：
6、(1)硅胶层析柱装填硅胶，以混合有机溶剂为洗脱溶剂洗脱；
7、(2)洗脱30小时后，继续洗脱，接收液点板监测，收集、合并接收液，浓缩、挥干溶剂，得到纯度在80％的化合物a；
8、(3)继续洗脱并点板监测接收液，直至以接收液主要成分为b，收集合并接收液，浓缩、挥干溶剂，得到纯度在80％的化合物b；
9、(4)继续洗脱并点板监测接收液，直至接收液中以c为主要成分，收集合并接收液，浓缩、挥干溶剂，得到纯度在80％的化合物c；
10、(5)以石油醚-乙酸乙酯(5:1，v/v)分别对以上得到的a、b、c进行硅胶柱层析，分别得到纯度大于95％的a、b、c。
11、所述方法中，其中(1)、(5)中所述洗脱溶剂为二元混合有机溶剂；优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、环己烷-乙酸乙酯、环己烷-丙酮中的一种；更优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯；最优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯(5:1，v/v)；
12、所述方法中，其中(1)、(5)使用300-400目硅胶；
13、所述方法中，其中(1)洗脱条件为rf＝0.05，洗脱速度为50ml/小时，冲洗30小时；
14、所述方法中，其中(2)在30小时后继续洗脱5小时；
15、所述方法中，其中(3)继续洗脱3小时以上；
16、所述方法中，其中(4)继续洗脱10小时以上。
17、本专利技术的目的还在于提供基于特定杂质的硼替佐米的纯化方法：
18、(1)硅胶层析柱装填硅胶，以洗脱溶剂洗脱；
19、(2)自30小时起，继续洗脱并接收液点板监测，收集、合并接收液，浓缩、挥干溶剂，监测所得接收液分别以a、b、c为主要成分；
20、(3)继续洗脱并点板监测接收液，直本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.如下的化合物：
2.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征进一步在于，还包括如下步骤：(5)以石油醚-乙酸乙酯分别对得到的A、B、C进行硅胶柱层析，分别得到纯度大于90％的A、B、C。
4.如权利要求2或3所述的方法，其中(1)、(5)中所述洗脱溶剂为二元混合有机溶剂；优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、环己烷-乙酸乙酯、环己烷-丙酮中的一种；更优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯；最优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯5:1，v/v；
5.一种硼替佐米的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.如权利要求5所述的纯化方法，其中(1)中所述洗脱溶剂为二元混合有机溶剂；优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、环己烷-乙酸乙酯、环己烷-丙酮中的一种；更优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯；最优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯5:1，v/v；
7.如权利要求1所述的任一化合物在测定硼替佐米及其杂质中作为参照品的
8.如权利要求1所述的任一化合物在硼替佐米质量控制中的用途。
9.一种测定硼替佐米及其杂质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
10.一种测定硼替佐米及其杂质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.如下的化合物：
2.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征进一步在于，还包括如下步骤：(5)以石油醚-乙酸乙酯分别对得到的a、b、c进行硅胶柱层析，分别得到纯度大于90％的a、b、c。
4.如权利要求2或3所述的方法，其中(1)、(5)中所述洗脱溶剂为二元混合有机溶剂；优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、环己烷-乙酸乙酯、环己烷-丙酮中的一种；更优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯；最优选地，所述洗脱溶剂为石油醚-乙酸乙酯5:1，v/v；
5.一种硼替佐米的纯化方法，其特征在于...
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