本发明专利技术属生物技术领域，涉及硫氧还蛋白－２在制药中的新用途，具体涉及硫氧还蛋白－２在制备肝纤维化诊断制剂中的用途，本发明专利技术采用ＤＩＧＥ技术研究了不同病程的肝纤维化病人血浆蛋白质组的差异，确定并验证了硫氧还蛋白２的表王既要随着病程的发展而上升，可进一步制备肝纤维化诊断制剂，用于诊断不同阶段的肝纤维化病人。本发明专利技术在此基础上，构建了可以高效地诊断肝纤维化各个阶段的决策树。本发明专利技术能够联合多个血液学指标，共同评价肝纤维化程度，可全面准确地提高临床非创伤性诊断肝纤维化的准确率，灵敏度和特异度。
Use of thioredoxin -2 in preparing diagnostic preparations for liver fibrosis
The invention belongs to the field of biotechnology and relates to thioredoxin - 2 in the new pharmaceutical use, in particular to thioredoxin - 2 use in preparation of liver fibrosis diagnosis in the preparation, the invention of the different course of liver fibrosis patient plasma proteome difference using DIGE technology, were identified and validated. Thioredoxin 2 table to rise the king with the development of the disease, the diagnosis of liver fibrosis can be further prepared for preparation, the diagnosis of liver fibrosis in patients of different stages. On the basis of the present invention, a decision tree capable of efficiently diagnosing various stages of liver fibrosis is constructed. The invention can be combined with a plurality of hematological indexes to evaluate the degree of hepatic fibrosis together, and can improve the accuracy, sensitivity and specificity of clinical non-invasive diagnosis of hepatic fibrosis comprehensively and accurately.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生物
，涉及硫氧还蛋白-2在制药中的新用途,具体涉及硫 氧还蛋白-2在制备肝纤维化诊断制剂中的用途
技术介绍
据有关统计，全世界约有3.5亿乙肝病毒携带者，我国的乙型肝炎病毒慢性 携带者约有1.25亿，每年至少有一百万患者死于乙肝病毒感染导致的慢性肝病， 包括肝硬化和肝癌，目前尚缺乏有效的治疗手段。有研究认为，肝纤维化是慢性乙肝病毒感染的中间过程，是肝脏对慢性肝损 伤的一系列修复反应，如不加以治疗，将有可能发展为肝硬化甚至肝癌。研究表 明在肝纤维化过程中，肝脏各类实质和非实质细胞发生明显的结构和功能变化， 激活星状细胞合成大量的细胞外基质蛋白(ECM)并导致肝脏纤维化。肝纤维化的诊断对于病情的判断及指导临床治疗均有重要的指导意义。目 前，临床所采用的诊断方法主要包括三大类，即病理学、影像学及血清学诊断。肝穿活检是诊断肝纤维化的金标准。通过对病人肝脏组织的染色将肝纤维化 的程度分为Sl-S4四期；将炎症活动程度分为Gl-G4四级。据有关统计显示， 肝穿活检具有损伤性，会引起约40%病人不适，引起0.5%病人发生并发症。取 得的组织量较少时诊断误差较大，主观判断性较强，难以用于临床的动态观察和 预后判断。因此，发展可靠、简单、非创伤性检验方法诊断肝纤维化显得尤为需 要。影像学检査是诊断肝纤维化的非创伤性手段之一。其中超声检查因其经济、 方便、无创，成为临床上最常用的检査手段。超声诊断肝硬变，特别是失代偿期 肝硬变的临床价值已得到基本肯定。彩色多普勒超声的应用为无创性评价血流动 力学提供了新的手段。但是在肝纤维化早期，肝脏的形态学和血流动力学改变不 明显，超声对早期肝纤维化的诊断意义存在有局限性。实验室血液学检査是最具应用前景的非创伤性检测手段。主要的指标分为以 下五类。①反映ECM成份合成增多的指标，如III型前胶原(procollagen III，PCIII)、 III型前胶原氨基端肽(type III procollagen aminopeptide， PIIIP)、 IV型 胶原(collagenIV， CIV)、层粘蛋白(laminin， LN)、透明质酸(hyaluronicacid, HA)及纤维连接蛋白(fibronectin， FN)等；②反映ECM合成酶改变的指标， 如单胺氧化酶(monoamineoxidase， MAO)及脯氨酰羟化酶(prolyhydroxylase， PH);③反映ECM降解的指标，如脯氨酸肽酶(prolidase, PLD)、脯氨酸(praline， Pro)、基质金属蛋白酶(matrixmetaUoproteinases， MMPs)及其组织抑制因子 (tissue inhibitors of metalloproteinases， TIMPs)等；④参与肝纤维化过程的细胞 因子，如转化生长因子ei (TGF-ei)、肿瘤坏死因子a (TNF-a)、白细胞介 素-6《IL-6)等；⑤其他血液学指标，如PGA指数、AST/ALT等。目前，这些血 液学标志物，对于检测早期肝纤维化的敏感度都不高；并且尚未发现单个的标志 物可以有效地用于肝纤维化病程的监控。在血液学指标中，以第一类反映ECM成份合成增多的指标研究最多、最深 入，实验室技术也较成熟，临床应用最广。但这些标志物仅能大体反映肝纤维化 程度，对纤维化分期无直接指导意义。它们受肝纤维化外多种因素影响，尤其受 慢性肝炎活动度的影响。临床流行病学研究了这些标志物对肝纤维化分期的意义 以及与慢性肝炎活动度的关系，发现各项纤维化指标的增高与纤维化的严重程度 相关，但相关系数都不高；同时，随着炎症程度的加重，各项纤维化指标也有明 显升高。迄今，尚没有一个非创伤性指标可以准确地诊断肝纤维化。因此联合多个血 液学指标，共同评价肝纤维化程度以提高临床诊断的准确率成为肝纤维化非创伤 性诊断的研究热点。但多数的联合非创伤性研究大多是根据研究者的经验或者是 文献报道事先确定联合的指标，然后计算联合指标诊断的灵敏度和特异度，这样 确定的指标不够全面。与此同时，在多数的研究中所研究的指标仍不能将四期肝 纤维化区分开来。蛋白质组学是一门新兴的学科，被广泛应用于研究疾病的诊断、治疗和预防。 蛋白质组学在肝脏疾病研究中的一个重要应用是通过比较分析正常组织细胞与 异常组织细胞、肝脏疾病在不同发展时期细胞内整体蛋白质的表达差异，对表达 有差异的蛋白迸行鉴定和定量，寻找与肝脏疾病相关的新的标志物，为肝脏疾病 研究提供新的手段和依据。Ying Liu等运用2DE技术研究了 CCU损伤的大鼠肝脏蛋白表达的差异，发现有30多种蛋白表达发生改变。Kristensen等研究了大鼠 HSC体内及体外激活前后的蛋白质组学，共鉴定了 43种表达水平发生改变的蛋 白质。目前，2DE结合质谱分析仍是蛋白质组学研究最流行和较可靠的技术平台。 但是2DE操作复杂、工作量大，胶和胶之间的变异会导致对蛋白表达水平差异 的错误判断。在2DE的基础上，发展和完善了 DIGE技术。该技术结合了多重 荧光分析的方法，将待比较的蛋白质样品经不同的荧光染料(Cy2、 Cy3、 Cy5) 标记后，在同一块胶上共同分离3个分别由不同荧光标记的样品，省去了不同胶 图之间的匹配问题。并且引入了内标的概念，降低了胶和胶之间的变异，极大地 提高了结果的准确性、可靠性和重复性。由于荧光染料有较好的灵敏度和动态范 围，DIGE技术能比传统的蛋白染色方法提供更精确的定性和定量分析。该技术 已应用于人结肠癌、前列腺癌、胰腺癌等的蛋白质组学研究之中。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供硫氧还蛋白-2(Prx11)的新的用途，具体涉及硫氧还蛋 白-2在制备肝纤维化诊断制剂中的用途。PrxII由198个氨基酸组成,具有如下氨基酸序列(下划线序列为质谱鉴定 匹配序列)1MASGNARIGK PAPDFKATAV VDGAFKEVKL SDYKGKYWL FFYPLDFTFV 51CPTEIIAFSN RAEDFRKLGC EVLGVSVDSQ FTHLAWINTP KEGGLGPLN 101IPLLADVTRR LSEDYGVLKT DEGIAYRGLF IIDGKGVLRQ ITVNDLPVGR 151SVDEALRLVQ AFQYTDEHGE VCPAGWKPGS DTIKPNVDDS KEYFSKHN)，所述PrxII分子量约为21.8KDa，是一类新发现的超氧化物酶，可以有效地 降低细胞内过氧化氢水平，抵御过氧化引起的细胞损伤。PrxII还可能通过调控 TNF-a信号通路和PDGF信号通路发挥抗氧化作用，或者通过诱导肝实质细胞 和肝星状细胞的分化和侵袭、提高细胞对过氧化氢的耐受等机制发挥抗氧化作 用。但迄今为止，尚未见有关硫氧还蛋白-2与肝纤维化分期之间的关系的报道。 本专利技术采用DIGE技术对不同病程肝纤维化病人以及正常志愿者和肝硬化 病人血浆蛋白质组的差异进行了实验研究，结果显示，血浆中硫氧还蛋白-2 (简称5PrxII)的表达变化与肝纤维化病程相关，结果表明，所述的PrxII可作为肝纤维 化病程相关的疾病标志物,进一步制备肝纤维化诊断制剂。本专利技术通过与肝纤维化相关的其它21项本文档来自技高网...
【技术保护点】
硫氧还蛋白－２在制备肝纤维化诊断制剂中的用途。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：贺福初，杨芃原，王吉耀，陆晔，姜颖，刘杰，林成招，王海键，
申请(专利权)人：复旦大学，复旦大学附属中山医院，北京蛋白质组研究中心，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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