【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析方法，涉及一种液相色谱-质谱联用法同时检测青砖茶中8个儿茶素和4个茶黄素的检测方法。
技术介绍
1、茶按照其加工方式的不同可以分为绿茶、乌龙茶、红茶、黑茶等，并且这些茶叶中的生物活性含量尽不相同，从而影响并且决定了不同茶叶的品质。青砖茶作为一种历史悠久的黑茶，因其复杂多样的生理功能而被研究者广泛研究，其儿茶素类、生物碱类、酚酸类等为代表的茶叶生物活性成分构筑了茶叶保健功能的物质基础，其中茶叶中儿茶素和茶黄素是影响茶叶品质的重要影响因素之一，对其进行深入研究对于了解茶叶的品质、风味、保存方式以及潜在的健康效应具有重要意义。研究表明儿茶素和茶黄素是茶多酚具有生理活性和广阔用途的关键成分。
2、目前国内外对茶叶中物质成分的含量测定方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法(hplc)、近红外光谱法和液相色谱-质谱联用法(lc-ms/ms)等。高效液相色谱法适用于检测茶叶中多种具有生物活性衍生物的总和，其他方法在区分不同物质存在相同的缺点。而液相色谱-质谱联用法能够准确的区分茶叶中具有生物活性的成分，灵敏度高，特异性强，非常适合用于检测茶叶中儿茶素与茶黄素的检测。但是，目前lc-ms/ms技术检测茶叶中茶黄素和儿茶素时仍然存在诸多问题，如灵敏度不够，前处理复杂和样本用量大等。因此，开发一种对青砖茶中儿茶素和茶黄素的分析与检测方法很有必要。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种液相色谱-质谱联用法同时检测青砖茶中8个儿茶素和4个茶黄素的检测方法，旨在解决目前
2、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种液相色谱-质谱联用法同时检测青砖茶中8个儿茶素和4个茶黄素的检测方法，包括以下步骤：
3、s1.配制标准储备液：分别称取8个儿茶素和4个茶黄素标准品(各0.010g)，8个所述儿茶素分别为没食子儿茶素(gc)、儿茶素没食子酸酯(egc)、儿茶素(c)、表儿茶素(ec)、表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg)、没食子儿茶素没食子酸酯(gcg)、表儿茶素没食子酸酯(ecg)和儿茶素没食子酸酯(cg)，4个所述茶黄素分别为茶黄素(tf1)、茶黄素-3-没食子酸酯(tf2a)、茶黄素-3,3'-没食子酸酯(tf3)和茶黄素-3'-没食子酸酯(tf2b)，用超纯水配制成1.0mg/ml的标准储备液；
4、s2.配制内标溶液：将内标物对乙酰氨基酚用纯甲醇溶解，配得1mg/ml的is储备液，再用1：1甲醇水稀释为1μg/ml工作液。
5、s3.配制标准工作液：取步骤s1中的标准储备液，用50％甲醇水溶液分别配制12个物质的标准曲线工作溶液，浓度分别为gc(38.961、2.435、1.218、0.609、0.304、0.152μg/ml)，过滤；
6、s4.标准曲线的绘制：对步骤s2配制的内标溶液和步骤s3配制的系列标准工作液进行lc-ms分析，以保留时间和质荷比对分离出的组分进行定性分析，以浓度为横坐标，以各儿茶素和茶黄素的峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，绘制标准曲线，获得8个儿茶素和4个茶黄素的线性回归方程；
7、s5.青砖茶样品中8个儿茶素和4个茶黄素提取：将茶砖研磨成细粉，取细粉溶于甲醇水溶液中，所述甲醇水溶液中的甲醇体积占比为40％-80％，所述细粉与所述甲醇水溶液的质量体积比为18-22mg/ml，然后80-100℃加热20-40分钟，离心取上清液，过滤，保留过滤液，挥干成粉末，保存至-20℃冰箱里，复溶，加入内标；
8、s6.样品检测：取步骤s5中加入内标的上清液进行lc-ms分析，由组分峰面积与内标峰面积的比值代入s3得到的标准曲线中得到其浓度。
9、进一步的，egc(93.506、23.377、5.844、2.922、0.731、0.365μg/ml)，c(23.377、1.461、0.731、0.365、0.183、0.091μg/ml)，ec(46.753、11.688、1.461、0.731、0.365、0.183μg/ml)，egcg(311.688、9.740、4.870、2.435、1.218、0.609μg/ml)，gcg(46.753、11.688、1.461、0.731、0.365、0.183μg/ml)，egc(101.299、6.331、3.166、1.583、0.791、0.396μg/ml)，cg(0.974、0.244、0.122、0.061、0.030、0.015μg/ml)，tf1(7.792、0.487、0.244、0.122、0.061、0.030μg/ml)，tf2a(15.584、0.974、0.487、0.244、0.122、0.061μg/ml)，tf2b(7.792、0.487、0.244、0.122、0.061、0.030μg/ml)，tf3(7.792、0.487、0.244、0.122、0.061、0.030μg/ml)
10、进一步的，所述液相色谱的条件为：采用shim-pack vp-ods柱，250×4.6mm，粒径5.0μm；进样体积为5μl，流动相a为0.5％甲酸水，流动相b为甲醇；柱温35℃；采用梯度洗脱，流速为0.2ml/min。
11、进一步的，所述质谱的条件为：质谱条件：离子源：电喷雾(electrosprayionization，esi)；检测模式：正离子模式、多反应检测(multiple reaction monition，mrm)模式定量分析；扫描模式：一级质谱q3扫描(质谱扫描范围m/z为100～600)、二级质谱产物离子扫描；扫描时间：0.5min；dl温度：250℃；加热块温度：400℃；电喷雾电压：3.5kv；雾化气体：氮气；碰撞气体：高纯氮气；碰撞气压力：230kpa；雾化气流速：3.0l/min；干燥器流量：15.0l/min。
12、进一步的，所述梯度洗脱的方法如下表：
13、
14、进一步的，所述步骤s5中，所述甲醇水溶液中的甲醇体积占比为60％。
15、进一步的，所述步骤s5中，所述细粉与所述60％甲醇水溶液的质量体积比为20mg/ml。
16、进一步的，所述步骤s5中，所述加热的温度为90℃，加热的时间为30分钟。
17、进一步的，所述步骤s5中，所述离心的转速为12000rmp/min，离心的时间为10分钟。
18、进一步的，所述步骤s3和s5中的过滤采用0.45μm尼龙滤膜。
19、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
20、1.本专利技术通过建立了一种高效、准确、快速的方法用于鉴定不同年份青砖茶中8个儿茶素和4个茶黄素的lc-ms/ms方法，并进行了方法学检验，即专属性、标准曲线和最低定量限、精密度和准确度、稳定性、重现性试验等仪器参数。回收率在85-115％之间，具有可接受的相对标准偏差本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种液相色谱-质谱联用法同时检测青砖茶中8个儿茶素和4个茶黄素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中12个物质的标准曲线工作溶液的浓度如下：所述没食子儿茶素的浓度为38.961、2.435、1.218、0.609、0.304、0.152μg/mL，儿茶素没食子酸酯的浓度为93.506、23.377、5.844、2.922、0.731、0.365μg/mL，儿茶素的浓度为23.377、1.461、0.731、0.365、0.183、0.091μg/mL，表儿茶素的浓度为46.753、11.688、1.461、0.731、0.365、0.183μg/mL，表没食子儿茶素没食子酸酯的浓度为311.688、9.740、4.870、2.435、1.218、0.609μg/mL，没食子儿茶素没食子酸酯的浓度为46.753、11.688、1.461、0.731、0.365、0.183μg/mL，表儿茶素没食子酸酯的浓度为101.299、6.331、3.166、1.583、0.791、0.396μg/mL，儿茶素没食子
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱的条件为：采用Shim-pack VP-ODS柱，250×4.6mm，粒径5.0μm；进样体积为5μL，流动相A为0.5％甲酸水，流动相B为甲醇；柱温35℃；采用梯度洗脱，流速为0.2mL/min。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述质谱的条件为：离子源：电喷雾；检测模式：正离子模式、多反应检测模式定量分析；扫描模式：一级质谱Q3扫描，质谱扫描范围m/z为100～600、二级质谱产物离子扫描；扫描时间：0.5min；DL温度：250℃；加热块温度：400℃；电喷雾电压：3.5KV；雾化气体：氮气；碰撞气体：高纯氮气；碰撞气压力：230KPa；雾化气流速：3.0L/min；干燥器流量：15.0L/min。
5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的方法如下：初始至10min时流动相A体积为80～49％，流动相B的体积为20～51％；10.00～18.00min时流动相A体积为49～49％，流动相B的体积为51～51％；18.00～19.00min时流动相A体积为49～0％，流动相B的体积为51～0％。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S5中，所述甲醇水溶液中的甲醇体积占比为60％。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S5中，所述细粉与所述60％甲醇水溶液的质量体积比为20mg/ml。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S5中，所述加热的温度为90℃，加热的时间为30分钟。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S5中，所述离心的转速为12000rmp/min，离心的时间为10分钟。
10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S3和S5中的过滤采用0.45μm尼龙滤膜。
...【技术特征摘要】
1.一种液相色谱-质谱联用法同时检测青砖茶中8个儿茶素和4个茶黄素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤s3中12个物质的标准曲线工作溶液的浓度如下：所述没食子儿茶素的浓度为38.961、2.435、1.218、0.609、0.304、0.152μg/ml，儿茶素没食子酸酯的浓度为93.506、23.377、5.844、2.922、0.731、0.365μg/ml，儿茶素的浓度为23.377、1.461、0.731、0.365、0.183、0.091μg/ml，表儿茶素的浓度为46.753、11.688、1.461、0.731、0.365、0.183μg/ml，表没食子儿茶素没食子酸酯的浓度为311.688、9.740、4.870、2.435、1.218、0.609μg/ml，没食子儿茶素没食子酸酯的浓度为46.753、11.688、1.461、0.731、0.365、0.183μg/ml，表儿茶素没食子酸酯的浓度为101.299、6.331、3.166、1.583、0.791、0.396μg/ml，儿茶素没食子酸酯的浓度为0.974、0.244、0.122、0.061、0.030、0.015μg/ml，茶黄素的浓度为7.792、0.487、0.244、0.122、0.061、0.030μg/ml，茶黄素-3-没食子酸酯的浓度为15.584、0.974、0.487、0.244、0.122、0.061μg/ml，茶黄素-3,3'-没食子酸酯的浓度为7.792、0.487、0.244、0.122、0.061、0.030μg/ml，茶黄素-3'-没食子酸酯的浓度为7.792、0.487、0.244、0.122、0.061、0.030μg/ml。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色...
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