【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及实验动物检测，本专利技术特别涉及一种实验动物微生物多重pcr快速检测试剂盒及快速检测方法。
技术介绍
1、实验动物是生命科学、医学等众多领域研究的基础条件，其关系到相关研究的准确性、可靠性，同时也涉及到实验操作人员的安全。因此实验动物质量控制至关重要，其中尤为关键的就是实验动物病原微生物的检测。
2、现行的实验动物微生物质量检测方法gb/t14926-2001中针对细菌的检测方法其推荐的是分离培养、生化检测。但是这些方法存在需要进一步改善的空间：耗时长，效率低，操作繁琐，需要有经验的实验操作人员，结检测果易受主观判断影响，可能产生检测批间差。
3、随着实验动物需求量的日益增加，相关机构的生产养殖规模也逐渐扩大，这就更加需要进一步改善。
4、因此为适应实验动物产业的发展，开发一种准确，高效，适合大规模检测的方法是十分必要的。
5、多重pcr是一种理性的方法，其可以在一个体系中对多种病原微生物进行检测，具有高效、快速、简便的优点，近些年有不少关于多重pcr研究及相关应用的文献及专利报道，如cn111518931a公开了一种牛奶中3种致病菌多重pcr诊断试剂盒》，实现了同时检测牛奶种的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌；za202108519b公开了一种用于检测不同念珠菌类型的引物探针组合、试剂盒、检测方法和应用，可同时检测出念珠球菌的不同类型，《兔源多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌多重 pcr 检测方法的建立》（《实验动物科学》，2023年第4期，10-16页
6、上述现有技术检测的细菌种类相对较少，且没有专门针对实验动物检测的研究。
7、上述
技术介绍
是为了便于理解本专利技术，并非是申请本专利技术之前已向普通公众公开的公知技术。
技术实现思路
1、针对上述缺陷，本专利技术提供一种实验动物微生物多重pcr快速检测试剂盒，可以同时检测4种病原菌的的多重pcr方法，检测效率高、耗时短、特异性好，成本低。
2、针对实验动物国家标准要求的微生物检测项目，本专利技术开发了一种可同时检测四种病原菌（金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯菌、绿脓杆菌）的多重pcr方法，检测项目多、针对性强、耗时短且成本低，是一种有效的实验动物病原菌检测方法。
3、技术方案是：一种实验动物微生物多重pcr快速检测试剂盒，用于并行检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯菌和绿脓杆菌，该实验动物微生物多重pcr快速检测试剂盒包括：
4、针对金黄色葡萄球菌的引物对，序列为seq id no15：及seq id no：16；
5、针对沙门氏菌的引物对，序列为seq id no：43及seq id no：44；
6、针对肺炎克雷伯菌的引物对，序列为seq id no：55及seq id no：56；
7、针对绿脓杆菌的引物对，序列为seq id no：83及seq id no：84。
8、进一步地，所述实验动物微生物多重pcr快速检测试剂盒还包括多重pcr酶mix和h2o。
9、进一步地，所述seq id no：15与seq id no：16各自均为0.5-1μl，seq id no：43与seq id no：44各自均为0.1-0.6μl，seq id no：55与seq id no：56各自均为0.1-0.6μl，seqid no：83与seq id no：84各自均为0 .1-0.5μl，多重pcr酶mix为12.5μl。
10、进一步地，所述实验动物为啮齿动物。
11、进一步地，所述啮齿动物为实验小鼠。
12、本专利技术还提供一种实验动物微生物多重pcr快速检测方法。
13、技术方案是：一种实验动物微生物多重pcr快速检测方法，并行检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯菌和绿脓杆菌，其特征在于，包括以下步骤：
14、（1）采集并培养处理样本；
15、（2）提取dna；
16、（3）扩增，加入（2）提取的dna液，针对金黄色葡萄球菌的引物对，序列为seq idno：15及seqid no：16；针对沙门氏菌的引物对，序列为seq id no：43及seqid no：44；针对肺炎克雷伯菌的引物对，序列为seq id no：55及seqid no：56；针对绿脓杆菌的引物对，序列为seq id no：83及seqid no：84；
17、（4）电泳；
18、（5）得电泳图。
19、进一步地，所述扩增的条件为：
20、多重pcr酶mix及h2o；
21、反应程序为：
22、a.预变性：94-98℃，3-5min；
23、b.循环延伸：94-98℃，30-45s
24、c.退火温度：55-60℃，30-45s
25、d.循环延伸：70-75℃，30-60s
26、e.循环30-35次
27、f.循环外延伸：70-75℃，5-10min。
28、进一步地，所述电泳的条件为：
29、a.配制凝胶，加热融化后加入溴化乙锭；
30、b.待凝胶凝固后，放入电泳槽中，在加样孔中扩增产物，并在最后一加样孔中加marker；
31、c.电泳仪电泳；
32、d.电泳结束后使用紫外成像仪拍摄凝胶图像。
33、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
34、本专利技术可以同时检测4种病原菌的的多重pcr方法，其同时检测4种病原菌提高了检测效率同时降低了成本，检测时间较短共2小时，且通过干扰实验证明其检测特异性较好，具有较高的应用价值。
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1.一种实验动物微生物多重PCR快速检测试剂盒，用于并行检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯菌和绿脓杆菌，其特征在于，该实验动物微生物多重PCR快速检测试剂盒包括：
2.根据权利要求1所述的实验动物微生物多重PCR快速检测试剂盒，其特征在于，所述实验动物微生物多重PCR快速检测试剂盒还包括多重PCR酶Mix和H2O。
3.根据权利要求2所述的实验动物微生物多重PCR快速检测试剂盒，其特征在于，所述SEQ ID NO：15与SEQ ID NO：16各自均为0.5-1μL，SEQ ID NO：43与SEQ ID NO：44各自均为0.1-0.6μL，SEQ ID NO：55与SEQ ID NO：56各自均为0.1-0.6μL，SEQ ID NO：83与SEQ IDNO：84各自均为0 .1-0.5μL，多重PCR酶Mix为12.5μL。
4.根据权利要求1-3任一项所述的实验动物微生物多重PCR快速检测试剂盒，其特征在于，所述实验动物为啮齿动物。
5.根据权利要求4所述的实验动物微生物多重PCR快速检测试剂盒，其特征在于，所述啮齿动
6.一种实验动物微生物多重PCR快速检测方法，采用权利要求1-5任一项所述的实验动物微生物多重PCR快速检测试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的实验动物微生物多重PCR快速检测方法，其特征在于，所述扩增的反应程序为：
8.根据权利要求6所述的实验动物微生物多重PCR快速检测方法，其特征在于，所述电泳的条件为：
...【技术特征摘要】
1.一种实验动物微生物多重pcr快速检测试剂盒，用于并行检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯菌和绿脓杆菌，其特征在于，该实验动物微生物多重pcr快速检测试剂盒包括：
2.根据权利要求1所述的实验动物微生物多重pcr快速检测试剂盒，其特征在于，所述实验动物微生物多重pcr快速检测试剂盒还包括多重pcr酶mix和h2o。
3.根据权利要求2所述的实验动物微生物多重pcr快速检测试剂盒，其特征在于，所述seq id no：15与seq id no：16各自均为0.5-1μl，seq id no：43与seq id no：44各自均为0.1-0.6μl，seq id no：55与seq id no：56各自均为0.1-0.6μl，seq id no：83与seq...
【专利技术属性】
技术研发人员：史培良，吴正中，姜颖蕤，辛闻婷，陈曦，
申请(专利权)人：成都药康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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