【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，尤其涉及一种长江江豚环境dna引物及其应用。
技术介绍
1、长江江豚是世界上体型最小的鲸类之一。鲸类长期生活在水中，分布广泛，活动能力强，其监测往往面临一些困难，尤其是小型鲸类，出水时间短，体型小，监测尤其困难。而长江江豚成年体长只有1.5米，平均出水时间少于1秒，是野外最难观察的鲸类动物之一，监测准确率低。过去几十年其种群快速衰退至1000头左右，极度濒危，对其种群数量和分布进行监测是促进其保护的关键。而长江江豚种群数量和遗传监测通常是基于直接捕获和视觉观察中获得的数据，难以准确监测。
2、鄱阳湖是中国第一大淡水湖，生活着近一半的现存江豚种群，其保护对整体江豚物种的保护至关重要。开展有效的鄱阳湖长江江豚监测是实施有效保护的基础，但是其具有明显的季节性吞吐特征，丰枯季节水面波动巨大，一直以来对于长江江豚的监测主要集中在低枯水位时期开展，对其在全年的分布并不十分清晰。同时，鄱阳湖自2020年起禁止生产性渔业捕捞十年，使得直接监测和评估长江江豚种群愈发困难。因此应采用破坏性较小的调查方法，改善对受保护物种的生态监测，并评估种群遗传的现状。
3、环境dna也称edna，是指生物体在皮肤脱落、排泄物、体表粘液、鳞屑、分泌物、精子、卵子等生理生态过程和个体死亡后细胞破碎新陈代谢过程中释放到水体、空气、冰芯、沉积物等环境中dna的总称。环境dna结合测序技术在生物多样性、物种监测、动物食性分析和外来入侵物种检测等方面均具有较好的应用前景。近年来，以线粒体序列为目标对象，利用环境dna技术分析
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种长江江豚环境dna引物，具有较高的特异性和灵敏度。
2、本专利技术的目的还在于提供上述dna引物在进行长江江豚环境dna检测鉴定长江江豚物种中的应用，可用于检测鄱阳湖长江江豚物种。
3、本专利技术的目的还在于提供一种长江江豚环境dna检测试剂盒。
4、本专利技术的目的还在于提供一种鄱阳湖长江江豚环境dna检测方法，检测效率高，准确度高，检测假阳性的可能性低。
5、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
6、本专利技术提供了一种长江江豚环境dna引物，所述引物基序为caaatt，正向引物的核苷酸序列如seq id no:1所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no:2所示。
7、本专利技术提供了上述dna引物在进行长江江豚环境dna检测鉴定长江江豚物种中的应用。
8、优选的，所述长江江豚环境dna检测为鄱阳湖长江江豚环境dna检测。
9、本专利技术还提供了一种长江江豚环境dna检测试剂盒，包含上述长江江豚环境dna引物。
10、本专利技术还提供了一种长江江豚环境dna检测方法，包括以下步骤：采集水样，用微孔滤膜抽滤；采用dna提取试剂盒提取滤膜上的dna；利用上述长江江豚环境dna引物对提取所得dna进行扩增，对扩增后的产物进行检测。
11、优选的，所述扩增方法为pcr扩增或qpcr扩增。
12、优选的，所述pcr扩增的反应体系包括正向引物10μm 1μl，反向引物10μm 1μl，mix高保真酶25μl，模板dna 1μl，ddh2o 22μl。
13、优选的，所述pcr扩增的反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸5s，35个循环；72℃延伸5min。
14、优选的，所述qpcr扩增的反应体系包括正向引物5μm 0.4μl，反向引物5μm 0.4μl，2×chamq sybr color qpcr master mix 5μl，50×rox reference dye 10.2μl，模板dna1μl，ddh2o 3μl。
15、优选的，所述qpcr扩增的反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s，58℃退火30s，35个循环；72℃延伸1min。
16、本专利技术的有益效果：
17、本专利技术基于生物信息学的方法，以鄱阳湖流域主要鱼类和长江江豚线粒体基因组序列比较分析为基础，围绕特定微卫星序列进行鄱阳湖长江江豚环境dna引物开发，得到一组长江江豚环境dna引物，旨在建立用于鄱阳湖长江江豚环境dna技术体系，可以提升检测的效率和精度，降低检测假阳性的可能性。
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1.一种长江江豚环境DNA引物，其特征在于，所述引物基序为CAAATT，正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.权利要求1所述的DNA引物在进行长江江豚环境DNA检测鉴定长江江豚物种中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述长江江豚环境DNA检测为鄱阳湖长江江豚环境DNA检测。
4.一种长江江豚环境DNA检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述长江江豚环境DNA引物。
5.一种长江江豚环境DNA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：采集水样，用微孔滤膜抽滤；采用DNA提取试剂盒提取滤膜上的DNA；利用权利要求1所述长江江豚环境DNA引物对提取所得DNA进行扩增，对扩增后的产物进行检测。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述扩增方法为PCR扩增或qPCR扩增。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系包括正向引物10μM 1μL，反向引物10μM 1μL，Mix高保真酶25μL，模板DNA 1μ
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸5s，35个循环；72℃延伸5min。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述qPCR扩增的反应体系包括正向引物5μM 0.4μL，反向引物5μM 0.4μL，2×ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix 5μL，50×ROXReference Dye 10.2μL，模板DNA 1μL，ddH2O 3μL。
10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述qPCR扩增的反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s，58℃退火30s，35个循环；72℃延伸1min。
...【技术特征摘要】
1.一种长江江豚环境dna引物，其特征在于，所述引物基序为caaatt，正向引物的核苷酸序列如seq id no:1所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no:2所示。
2.权利要求1所述的dna引物在进行长江江豚环境dna检测鉴定长江江豚物种中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述长江江豚环境dna检测为鄱阳湖长江江豚环境dna检测。
4.一种长江江豚环境dna检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述长江江豚环境dna引物。
5.一种长江江豚环境dna检测方法，其特征在于，包括以下步骤：采集水样，用微孔滤膜抽滤；采用dna提取试剂盒提取滤膜上的dna；利用权利要求1所述长江江豚环境dna引物对提取所得dna进行扩增，对扩增后的产物进行检测。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述扩增方法为pcr扩增或qpcr扩增。
7.根据权利要求6所...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴斌，张志红，王伟萍，杨春华，王洪秀，张国华，王崇瑞，陶志英，
申请(专利权)人：江西省科学院生物资源研究所，
类型：发明
国别省市：
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