【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于血清总游离巯基检测，尤其涉及一种检测血清总游离巯基的试剂盒及其应用与方法。
技术介绍
1、巯基是生物体内重要的还原性物质，参与机体的多种生化反应，与酶活性、药物代谢、毒性解毒和能量代谢密切相关。许多疾病均可引起机体巯基含量的明显改变，因此血清总游离巯基含量测定有重要的临床意义。
2、血清总游离巯基检测的经典方法是ellman法，使用的反应底物(或称衍生剂)为5,5’二硫代双(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithio bis-(2-nitrobenzoic acid)，下文简称dtnb)。ellman法的基本原理是dtnb与血清中游离巯基在碱性条件下反应，生成产物tnb，该物质在412nm处有最大吸收，吸收强度与样品中-sh的浓度呈正比关系。
3、以ellman法为基础的比色法目前尚无上市产品，主要应用在氧化应激和衰老相关的研究中。实验室通常的做法是：75μl血清以0.1m tris缓冲液(ph 8.2)按1:4比例稀释，转移至微孔板中。以sunrise微孔板读取计检测412nm处的背景吸光度和630nm处的参比吸光度。然后加入10μl 3.8mmol/ldtnb磷酸缓冲液(0.1m磷酸盐，ph 7.0)。室温静置孵育20min，在412nm和630nm再次读取吸光度。校准品：l-半胱氨酸tris溶液(0.1m tris，10mm edta，ph8.2)，浓度范围：15.6～1000μm。虽然该方法在总游离巯基的人群检测中应用较广泛，但孵育时间长、操作繁琐、易引入较大手工误差。
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技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种检测血清总游离巯基的试剂盒及其应用与方法，利用该试剂盒能够快速检测血清中总游离巯基，检测结果可靠。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种检测血清总游离巯基的试剂盒，所述试剂盒包括以下含量成分：
4、0.05～1.0mmol/l的磷酸钠缓冲液和1.0～2.5mmol/l 2,2'-二硫二吡啶工作液。
5、优选的，所述磷酸钠缓冲液与2,2'-二硫二吡啶工作液的体积比为180～220:35～45。
6、优选的，所述2,2'-二硫二吡啶工作液是将2,2'-二硫二吡啶、dmso溶液与磷酸钠缓冲液混合制备得到。
7、优选的，所述磷酸钠缓冲液的ph值为6.0～7.5。
8、优选的，所述磷酸钠缓冲液含有0.15～0.25mmol/l乙二胺四乙酸二钠(edta-2na·2h2o)和体积比0.01～0.1％的吐温80。
9、本专利技术还提供了一种上述试剂盒在制备检测血清总游离巯基产品中的应用。
10、本专利技术还提供了一种检测血清总游离巯基的方法，所述方法用于非诊断目的，包括以下步骤：
11、将待测样本与上述的磷酸钠缓冲液混合孵育4分钟后，检测吸光度值a1，然后加入上述2,2'-二硫二吡啶工作液，孵育17分钟后，检测吸光度值a2，根据样本吸光度a＝a2-0.84×a1，根据样本吸光度a值大小判断血清中总游离巯基含量高低。
12、优选的，所述孵育温度为35～40℃。
13、优选的，所述检测波长为340nm。
14、本专利技术还提供了一种定量检测血清总游离巯基的方法，所述方法用于非诊断目的，包括以下步骤：
15、按照上述检测血清总游离巯基的方法，以l-半胱氨酸为校准品，测定不同浓度的l-半胱氨酸吸光度值，计算出校准品吸光度，然后以浓度为横坐标，以校准品吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性标准曲线方程；
16、将待测样本按照上述检测血清总游离巯基的方法，计算出样本吸光度，根据线性标准曲线方程，得到待测样本中总游离巯基的浓度。
17、相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
18、本专利技术提供了一种检测血清总游离巯基的试剂盒及其应用与方法，本专利技术使用磷酸钠缓冲液、dmso、吐温80解决了dtdp在水溶液中的溶解性问题，进而实现快速检测血清总游离巯基的目的，而且利用本专利技术的试剂盒检测血清总游离巯基的结果可靠、精密度高。
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1.一种检测血清总游离巯基的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下含量成分：
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磷酸钠缓冲液与2,2'-二硫二吡啶工作液的体积比为180～220:35～45。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述2,2'-二硫二吡啶工作液是将2,2'-二硫二吡啶、DMSO溶液与磷酸钠缓冲液混合制备得到。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磷酸钠缓冲液的pH值为6.0～7.5。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述磷酸钠缓冲液含有0.15～0.25mmol/L EDTA-2Na·2H2O和体积比0.01～0.1％的吐温80。
6.权利要求1～5任意一项所述试剂盒在制备检测血清总游离巯基产品中的应用。
7.一种检测血清总游离巯基的方法，其特征在于，所述方法用于非诊断目的，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述孵育温度为35～40℃。
9.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述检测波长为340nm。<...
【技术特征摘要】
1.一种检测血清总游离巯基的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下含量成分：
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磷酸钠缓冲液与2,2'-二硫二吡啶工作液的体积比为180～220:35～45。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述2,2'-二硫二吡啶工作液是将2,2'-二硫二吡啶、dmso溶液与磷酸钠缓冲液混合制备得到。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磷酸钠缓冲液的ph值为6.0～7.5。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述磷酸钠缓冲液含有...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾洁，陈文祥，张传宝，邵芷钰，董军，王思明，周伟燕，张天娇，赵海建，张江涛，
申请(专利权)人：北京医院，
类型：发明
国别省市：
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