【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉基因工程领域，具体地涉及蜱传脑炎病毒样颗粒及其在诊断、治疗或预防tbev病毒感染引起的疾病或病况中的应用。
技术介绍
1、蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,tbev)是一种由蜱虫传播的黄病毒，广泛存在于亚欧大陆，主要通过蜱虫叮咬传播给人类或其他动物，在人类和动物中能引起一些严重的神经疾病，对全球公共卫生具有重大威胁。虽然现有基于tbev的灭活疫苗，但tbev疫苗接种时长非常耗时，除了需要进行多次剂量的初级免疫，还需定期加强接种疫苗以维持保护性免疫能力。因此，目前仍缺少高效且特异性强的针对tbev感染的药物以及疫苗，研发更高效、安全的tbev疫苗十分重要。
2、病毒样颗粒(viral-like particles,vlps)在疫苗应用与开发方面具有十分可观的应用前景。它是由一种或多种病毒结构蛋白组装成的颗粒，具有与病毒颗粒相似的外部结构和抗原性，但不含病毒基因组，不具有感染性。由于灭活或减毒疫苗有毒力返祖的可能，活病毒疫苗对免疫动物往往有一定的副作用，而vlps可以弥补以上缺陷，由于vlps保留了天然病毒颗粒的空间构象和诱导中和抗体的抗原表位，免疫性强，不但能激发体液免疫，还可以激发细胞和粘膜免疫，具有安全、高效的特点。目前尚未有关于蜱传脑炎病毒样颗粒形成的相关报道。
技术实现思路
1、本专利技术提供了蜱传脑炎病毒(tbev)的病毒样颗粒，其构建方法以及所述病毒样颗粒作为药物和疫苗的用途。本专利技术通过构建质粒、表达、纯
2、第一方面，本专利技术提供了tbev病毒样颗粒，其包括tbev病毒的至少一种结构蛋白和至少一种非结构蛋白，或包括与所述结构蛋白和非结构蛋白具有至少90％序列同一性的蛋白，所述非结构蛋白为ns2和ns3。
3、在一些实施方案中，所述tbev病毒样颗粒包括与tbev病毒的至少一种结构蛋白和至少一种非结构蛋白具有至少90％、92％、95％、98％或99％序列同一性的蛋白。
4、在一些实施方案中，所述非结构蛋白ns2为ns2b。
5、在一些实施方案中，所述非结构蛋白ns3选自ns3的n端蛋白酶结构域。
6、在一些实施方案中，所述结构蛋白选自膜蛋白m、包膜糖蛋白e、衣壳蛋白c中至少一种。优选地，所述结构蛋白选自膜蛋白前体prm、包膜糖蛋白e、衣壳蛋白c中至少一种。
7、在一些具体实施方案中，所述结构蛋白为膜蛋白前体prm、包膜糖蛋白e和衣壳蛋白c。
8、在一些实施方案中，所述tbev病毒样颗粒包括结构蛋白膜蛋白前体prm、包膜糖蛋白e和衣壳蛋白c，以及非结构蛋白ns2b和ns3。
9、在一些实施方案中，所述tbev病毒样颗粒包括结构蛋白膜蛋白前体prm、包膜糖蛋白e和衣壳蛋白c，以及非结构蛋白ns2b和ns3的n端蛋白酶结构域。所述tbev病毒样颗粒通过体内表达结构蛋白膜蛋白前体prm、包膜糖蛋白e和衣壳蛋白c，以及非结构蛋白ns2b和ns3 n端的蛋白酶结构域在体内依赖ns2b-3蛋白酶功能剪切core-prm形成prm-e，随后在宿主弗林蛋白酶作用下切割pr，最后形成tbev病毒样颗粒。
10、在一些实施方案中，所述膜蛋白前体prm具有如seq id no:1所示的氨基酸序列或与seq id no:1具有至少90％、92％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
11、在一些实施方案中，所述包膜糖蛋白e具有如seq id no:2所示的氨基酸序列或与seq id no:2具有至少90％、92％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
12、在一些实施方案中，所述衣壳蛋白c具有如seq id no:3所示的氨基酸序列或与seq id no:3具有至少90％、92％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
13、在一些实施方案中，所述非结构蛋白ns2b具有如seq id no:4所示的氨基酸序列或与seq id no:4具有至少90％、92％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
14、在一些实施方案中，所述非结构蛋白ns3具有如seq id no:5所示的氨基酸序列或与seq id no:5具有至少90％、92％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
15、在一些实施方案中，所述非结构蛋白ns3的n端蛋白酶结构域具有如seq id no:6所示的氨基酸序列或与seq id no:6具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
16、第二方面，本专利技术提供了一种核酸分子，所述核酸分子用于编码组装第一方面所述的tbev病毒样颗粒的tbev病毒的蛋白。
17、在一些实施方案中，所述核酸分子编码tbev病毒的至少一种结构蛋白和至少一种非结构蛋白，或编码与所述结构蛋白和非结构蛋白具有至少90％、92％、95％、98％或99％序列同一性的蛋白。
18、在一些实施方案中，所述非结构蛋白为ns2和ns3。优选地，所述非结构蛋白ns2为ns2b。优选地，所述非结构蛋白ns3为ns3的n端蛋白酶结构域。
19、在一些实施方案中，所述结构蛋白选自膜蛋白m、包膜糖蛋白e、衣壳蛋白c中至少一种。
20、在一些实施方案中，所述结构蛋白选自膜蛋白前体prm、包膜糖蛋白e、衣壳蛋白c中至少一种。
21、在一些实施方案中，所述结构蛋白为膜蛋白前体prm、包膜糖蛋白e和衣壳蛋白c。
22、在一些实施方案中，所述核酸分子编码结构蛋白膜蛋白前体prm、包膜糖蛋白e和衣壳蛋白c，以及非结构蛋白ns2b和ns3。
23、在一些优选实施方案中，所述核酸分子编码结构蛋白膜蛋白前体prm、包膜糖蛋白e和衣壳蛋白c，以及非结构蛋白ns2b和ns3的n端蛋白酶结构域。
24、在一些实施方案中，所述核酸分子包括第一核酸分子和第二核酸分子，其中第一核酸分子编码结构蛋白膜蛋白前体prm、包膜糖蛋白e和衣壳蛋白c，并且第二核酸分子编码非结构蛋白ns2和ns3。
25、在一些实施方案中，所述第一核酸分子具有seq id no：7的核苷酸序列或与seqid no:7所示的核苷酸序列具有至少90％、92％、95％、98％或99％序列同一性的核苷酸序列。
26、在一些实施方案中，所述第二核酸分子具有seq id no：8的核苷酸序列或与seqid no:8所示的核苷酸序列具有至少90％、92％、95％、98％或99％序列同一性的核苷酸序列。
27、第三方面，本专利技术提供了载体，其包含第二方面的核酸分子。
28、在一些实施方案中，所述载体任选地包含可操作地连接至所述核酸分子的表达调控序列。
29、在一些实施方案中，所述载体为质粒载体、慢病本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.蜱传脑炎病毒(TBEV)病毒样颗粒，其包括TBEV病毒的至少一种结构蛋白和至少一种非结构蛋白，或包括与所述结构蛋白和非结构蛋白具有至少90％序列同一性的蛋白，所述非结构蛋白为NS2和NS3。
2.根据权利要求1所述的TBEV病毒样颗粒，其特征在于，所述非结构蛋白NS2为NS2B；和/或所述非结构蛋白NS3为NS3的N端蛋白酶结构域。
3.根据权利要求1或2所述的TBEV病毒样颗粒，其特征在于，所述结构蛋白选自膜蛋白M、包膜糖蛋白E、衣壳蛋白C中至少一种；
4.根据权利要求3所述的TBEV病毒样颗粒，其特征在于，所述TBEV病毒样颗粒包括结构蛋白膜蛋白前体prM、包膜糖蛋白E和衣壳蛋白C，以及非结构蛋白NS2B和NS3；
5.根据权利要求4所述的TBEV病毒样颗粒，其特征在于，所述膜蛋白前体prM具有如SEQID NO:1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
6.核酸分子，所述核酸分子用于编码组装权利要求1-5任一项所述的TBEV病毒样颗粒的TBEV病毒的蛋白。
8.根据权利要求7所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码结构蛋白膜蛋白前体prM、包膜糖蛋白E和衣壳蛋白C，以及非结构蛋白NS2B和NS3；
9.载体，所述载体包含权利要求6-8中任一项所述的核酸分子。
10.宿主细胞，所述宿主细胞表达权利要求1-5中任一项所述的TBEV病毒样颗粒，或者包含权利要求6-8中任一项所述的核酸分子，或者包含权利要求9所述的载体。
11.药物组合物，其包含：
12.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为疫苗。
13.产生TBEV抗体的方法，其包括利用权利要求1-5中任一项所述的TBEV病毒样颗粒，或者权利要求6-8中任一项所述的核酸分子，或者权利要求9所述的载体与非人哺乳动物接触。
14.权利要求1-5中任一项所述的TBEV病毒样颗粒，或者权利要求6-8中任一项所述的核酸分子，或者权利要求9所述的载体，或者权利要求10所述的宿主细胞，或者权利要求11或12所述的药物组合物，或者权利要求13所述的方法产生的抗体在制备用于治疗或预防由TBEV病毒感染引起的疾病或病况药物中的应用，或者在制备用于诊断由TBEV病毒感染引起的疾病或病况的诊断试剂中的用途。
15.用于产生权利要求1-5中任一项所述的病毒样颗粒的方法，其包括：
...【技术特征摘要】
1.蜱传脑炎病毒(tbev)病毒样颗粒，其包括tbev病毒的至少一种结构蛋白和至少一种非结构蛋白，或包括与所述结构蛋白和非结构蛋白具有至少90％序列同一性的蛋白，所述非结构蛋白为ns2和ns3。
2.根据权利要求1所述的tbev病毒样颗粒，其特征在于，所述非结构蛋白ns2为ns2b；和/或所述非结构蛋白ns3为ns3的n端蛋白酶结构域。
3.根据权利要求1或2所述的tbev病毒样颗粒，其特征在于，所述结构蛋白选自膜蛋白m、包膜糖蛋白e、衣壳蛋白c中至少一种；
4.根据权利要求3所述的tbev病毒样颗粒，其特征在于，所述tbev病毒样颗粒包括结构蛋白膜蛋白前体prm、包膜糖蛋白e和衣壳蛋白c，以及非结构蛋白ns2b和ns3；
5.根据权利要求4所述的tbev病毒样颗粒，其特征在于，所述膜蛋白前体prm具有如seqid no:1所示的氨基酸序列或与seq id no:1具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
6.核酸分子，所述核酸分子用于编码组装权利要求1-5任一项所述的tbev病毒样颗粒的tbev病毒的蛋白。
7.根据权利要求6所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码tbev病毒的至少一种结构蛋白和至少一种非结构蛋白，或编码与所述结构蛋白和非结构蛋白具有至少90％序列同一性的蛋白；
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