【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于物质检测，涉及一种hplc测定替米沙坦中潜在基因毒性杂质的方法，尤其是涉及一种hplc测定替米沙坦中邻苯二胺(记为rc18)和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐(记为rc20)的方法。
技术介绍
1、替米沙坦的适应症是高血压。用于成年人原发性高血压的治疗，降低心血管风险。本品适用于年龄55岁及以上、存在发生严重心血管事件高风险且不能接受血管紧张素转换酶(ace)抑制剂治疗的患者，以降低其发生心肌梗死，卒中或心血管疾病导致死亡的风险。心血管事件的高风险包括冠状动脉疾病，外周动脉疾病、卒中、一过性脑缺血发作或伴有终末器官损害症的高危2型糖尿病(胰岛素依赖或非胰岛素依赖)病史。替米沙坦还可以与其他必要的治疗同时使用(例如降压药物，抗血小板药物或降脂药)。不推荐替米沙坦与ace抑制剂同时使用。
2、替米沙坦化学名是4’-[(1,4’-二甲基-2’-丙基[2,6’-二-1h-苯并咪唑]-1’-基)甲基]-[1,1’-二联苯基]-2-羧酸。邻苯二胺和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐是合成替米沙坦的起始物料n-甲基邻苯二胺盐酸盐中可能存在的杂质，因为邻苯二胺和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐含有基因毒性警示结构，除了在n-甲基邻苯二胺盐酸盐中作为有关物质进行控制外，还需要在成品替米沙坦中作为基因毒性杂质进行分析和控制。
3、较低水平即可直接造成dna损伤，进而导致dna突变，因此可能引发癌症的dna反应性物质，其分类可控制如表1。邻苯二胺和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐属于3类，有与原料药结构无关的警示结构，无致
4、表1.根据致突变性和致癌性对杂质进行分类及控制
5、
6、
7、替米沙坦为替米沙坦相关制剂中主要活性成分，基因毒性杂质的可接受限度一般根据毒理学关注阈值(ttc)限度计算。
8、
9、表2.ttc限度
10、 治疗期 ≤1个月 1～12个月 1～10年 ≥10年 日摄入量(μg/d) 120 20 10 1.5
11、替米沙坦作为口服制剂的主要活性成分，其最大日剂量是80mg，按照最严格的日摄入量1.5μg/d计算，基因毒性杂质的可接受限度为18.75ppm。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于建立一种hplc测定替米沙坦潜在基因毒性杂质邻苯二胺(rc18)和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐(rc20)的方法，以更好的控制替米沙坦的质量。
2、本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
3、一种hplc测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，包括：
4、配制供试品溶液：取替米沙坦20～100mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加氢氧化钠溶液-甲醇溶液适量超声使样品溶解，用氢氧化钠溶液-甲醇溶液稀释至刻度，摇匀；
5、配制对照品溶液：各取适量邻苯二胺和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐，精密称定，用氢氧化钠溶液-甲醇溶液定量，配制成每1ml溶液中含邻苯二胺0.01～0.2μg和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐0.01～0.2μg的混合对照品溶液；
6、分别对对照品溶液、供试品溶液进行hplc检测，采用外标法测定替米沙坦中邻苯二胺和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐的含量。
7、专利技术人基于：替米沙坦是难溶性化合物，在水中几乎不溶，在甲醇中微溶，在乙醇中极微溶解，在0.1mol/l氢氧化钠溶液中易溶，在0.1mol/l盐酸溶液中极微溶解。结合邻苯二胺和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐的性质和稳定性，采用氢氧化钠溶液和甲醇的混合溶液进行溶解替米沙坦。色谱柱的ph使用范围一般偏酸性，在ph值偏高时，色谱柱的寿命将缩短，因此需要尽可能的降低氢氧化钠的浓度。结合替米沙坦在甲醇中的溶解性，邻苯二胺和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐的稳定性，通过调整氢氧化钠溶液和甲醇体积比，筛选出既符合灵敏度要求又符合供试品要求的氢氧化钠溶液-甲醇溶液。
8、所述的氢氧化钠溶液-甲醇溶液是氢氧化钠溶液和甲醇按照体积比为30:70～60:40v/v的混合溶液。
9、优选的，所述的氢氧化钠溶液-甲醇溶液是氢氧化钠溶液和甲醇按照体积比为40:60v/v的混合溶液。
10、所述的氢氧化钠溶液的浓度为0.02～0.1mol/l，优选为0.02～0.05mol/l，更优选为0.05mol/l。
11、优选的，配制供试品溶液：取替米沙坦60mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加氢氧化钠溶液-甲醇溶液适量超声使样品溶解，用氢氧化钠溶液-甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。
12、优选的，配制对照品溶液：各取适量邻苯二胺和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐，精密称定，用氢氧化钠溶液-甲醇溶液定量，配制成每1ml溶液含邻苯二胺0.05～0.2μg和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐0.05～0.2μg的混合对照品溶液。
13、更优选的，配制对照品溶液：各取适量邻苯二胺和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐，精密称定，用氢氧化钠溶液甲醇溶液定量，配制成每1ml溶液含邻苯二胺0.1μg和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐0.1μg的混合对照品溶液。
14、所述的hplc(高效液相色谱)检测条件为：采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇为流动相a，以0.1％磷酸二氢钾溶液-甲醇(70:30v/v，含0.2％三乙胺，用磷酸调节ph值至4.8～5.2)为流动相b，进行梯度洗脱；检测波长为225～235nm；流速为0.9～1.1ml/min；进样体积50μl；梯度洗脱程序如下：
15、
16、所述的色谱柱选自kromasil-c18(4.6mm×250mm，5μm)、agilent extend-c18(4.6mm×250mm，5μm)。
17、优选的，所述的hplc检测条件为：色谱柱为kromasil-c18(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇为流动相a，以0.1％磷酸二氢钾溶液-甲醇(70:30v/v，含0.2％三乙胺，用磷酸调节ph值至5.0)为流动相b，进行梯度洗脱；检测波长为230nm；流速为1.0ml/min；进样体积50μl；梯度洗脱程序如下：
18、
19、流动相b是质量分数0本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：包括：
2.根据权利要求1所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的氢氧化钠溶液-甲醇溶液是氢氧化钠溶液和甲醇按照体积比为30:70～60:40V/V的混合溶液；所述的氢氧化钠溶液的浓度为0.02～0.1mol/L。
3.根据权利要求2所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的氢氧化钠溶液-甲醇溶液是氢氧化钠溶液和甲醇按照体积比为40:60V/V的混合溶液。
4.根据权利要求2或3所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的氢氧化钠溶液的浓度为0.02～0.05mol/L，优选为0.05mol/L。
5.根据权利要求1所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：配制供试品溶液：取替米沙坦60mg，精密称定，置于10mL量瓶中，加氢氧化钠溶液-甲醇溶液适量超声使样品溶解，用氢氧化钠溶液-甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。
6.根据权利要求1所述的HPLC测
7.根据权利要求6所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：配制对照品溶液：各取适量邻苯二胺和4-氯-N-甲基邻苯二胺盐酸盐，精密称定，用氢氧化钠溶液甲醇溶液定量，配制成每1mL溶液含邻苯二胺0.1μg和4-氯-N-甲基邻苯二胺盐酸盐0.1μg的混合对照品溶液。
8.根据权利要求1所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的HPLC检测的条件为：采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸二氢钾溶液-甲醇(70:30V/V，含0.2％三乙胺，用磷酸调节pH值至4.8～5.2)为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为225～235nm；流速为0.9～1.1mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序如下：
9.根据权利要求8所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的色谱柱选自Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)、Agilent Extend-C18(4.6mm×250mm，5μm)。
10.根据权利要求8所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的HPLC检测的条件为：色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸二氢钾溶液-甲醇(70:30V/V，含0.2％三乙胺，用磷酸调节pH值至5.0)为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为230nm；流速为1.0mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序如下：
...【技术特征摘要】
1.一种hplc测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：包括：
2.根据权利要求1所述的hplc测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的氢氧化钠溶液-甲醇溶液是氢氧化钠溶液和甲醇按照体积比为30:70～60:40v/v的混合溶液；所述的氢氧化钠溶液的浓度为0.02～0.1mol/l。
3.根据权利要求2所述的hplc测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的氢氧化钠溶液-甲醇溶液是氢氧化钠溶液和甲醇按照体积比为40:60v/v的混合溶液。
4.根据权利要求2或3所述的hplc测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的氢氧化钠溶液的浓度为0.02～0.05mol/l，优选为0.05mol/l。
5.根据权利要求1所述的hplc测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：配制供试品溶液：取替米沙坦60mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加氢氧化钠溶液-甲醇溶液适量超声使样品溶解，用氢氧化钠溶液-甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。
6.根据权利要求1所述的hplc测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：配制对照品溶液：各取适量邻苯二胺和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐，精密称定，用氢氧化钠溶液-甲醇溶液定量，配制成每1ml溶液含邻苯二胺0.05～0.2μg和4-氯-n-甲基邻苯二胺盐酸盐0.05～0.2μg的混合对照品溶液。
7.根据权利要求6所述的hplc测定替米沙...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙春霞，高倩，桂清，陈友芹，张根元，李维思，
申请(专利权)人：南京红太阳医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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