疫苗制造技术

本发明专利技术公开了一种预防和治疗用的疫苗，其中的抗原组成为吸附于可生物降解聚合物颗粒上的抗原与未吸附的抗原（游离抗原）两种形式，所述的颗粒的平均粒径为０．１～２０μｍ，所述的抗原结构明确，具有抗病毒作用，优选为乙肝表面抗原和人用狂犬病疫苗抗原，通过以下方法制备：将聚合物颗粒与抗原溶液进行混合，通过聚合物颗粒与抗原溶液的吸附作用制得的悬液即为疫苗产品。在所得的悬液状疫苗中加入冻干保护剂，可制备疫苗的冻干粉剂。本发明专利技术疫苗能够在机体内迅速诱导免疫应答，诱导机体产生较高水平的体液免疫和细胞免疫，通过分泌抗体或细胞因子等来清除或控制病毒，而且本发明专利技术疫苗的制备工艺简单，制备过程温和。

vaccine

The invention discloses a prevention and treatment with the vaccine, which is composed of the antigen adsorbed on biodegradable polymer particles on the antigen and non adsorbed antigen (antigen) in two forms, the average particle size of 0.1 particles and 20 mu m, the antigen structure clearly. Has antiviral effect, preferably hepatitis B surface antigen and Purified Hamster Kidney Cell Rabies Vaccine antigen prepared by the polymer particles and the antigen solution were mixed by polymer particles and the adsorption of the antigen solution prepared by suspension for vaccine products. A lyophilized powder of the vaccine can be prepared by adding freeze-dried protective agent to the suspended liquid vaccine. The vaccine can quickly induce immune response in the body, induce higher levels of humoral immunity and cellular immunity, to eliminate or control virus by secreting antibodies or cytokines, and the vaccine of the present invention has the advantages of simple preparation process, mild preparation process.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种疫苗，更具体地说，涉及一种以可生物降解聚合物颗粒作为佐剂的疫苗。技术背景乙型肝炎(Hepatitis B)是由乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)引起的全球性传染病，具有感 染性强、携带率高和流行面广等特点，严重危害着人类健康。根据世界卫生组织(WHO)统计， 迄今为止全球有20亿人感染过乙型肝炎病毒，其中约3.5亿人为慢性乙肝感染者，我国乙肝 病毒总感染率60%，携带率约为10%(即约1.3亿)，属乙型肝炎高流行区。对于乙型肝炎尚无 有效的治疗药物，目前抗病毒治疗上常用的干扰素和拉米呋啶，虽然能迅速抑制病毒复制， 但是停药后易反跳，也易导致变异株的产生。近年来，由于基因重组技术的发展与应用、免 疫学理论和技术的新进展等使得利用疫苗来治疗慢性HBV感染已成为研究的热点。在慢性HBV感染者体内由于免疫耐受的存在，特异性T细胞反应低下。传统观点认为， 治疗性疫苗的目的是发挥清除病毒作用的细胞免疫反应主要特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的溶细胞作用，即CTL通过释放穿孔素、颗粒酶杀伤感染的肝细胞或通过Fas介导 的途径来诱导感染的肝细胞凋亡。但是近年来研究显示，Thl类细胞和CTL分泌的细胞因子 参与的非溶细胞机制在抗病毒免疫中起着主导作用。IFN-y、 TNF-a等细胞因子都可以通过非 细胞病变的方式来抑制病毒复制，甚至清除病毒DNA。尤其是IFN-y在多种动物模型中的研 究表明其具有抑制HBV复制中间产物和HBV特异mRNA的作用，在病毒清除中发挥着重要 作用，通过激发自身的细胞免疫应答促进以IFN-y为主的细胞因子的分泌来清除病毒。检测 这些细胞因子的分泌水平可以衡量抗原特异性T细胞的活化程度，从而对疫苗的免疫效果进 行准确的评价。目前研究中的治疗性乙肝疫苗主要分为蛋白疫苗、免疫复合物型疫苗、多肽疫苗、DNA 疫苗或佐剂治疗性疫苗等。疫苗设计为考虑如何有效的激发或增强特异性多表位的细胞免疫 应答，达到清除体内病毒的目的。以聚合物微球作为疫苗佐剂，能够增强抗原被树突状细胞 吞噬的能力，增强抗原诱导的细胞免疫。中国专利号为011118448.5公开了一种以聚乳酸-聚 乙二醇为佐剂的乙肝疫苗，将抗原包埋于该材料制备的微球中，注射免疫小鼠，25天后能够 显著增强T细胞的功能，提高机体内抗原的特异性诱导的细胞免疫。但是作为一种治疗乙型 肝炎的药物来说，需要在机体内迅速诱导细胞免疫应答，而且抗原在微包埋过程中，不可能完全被包埋于微球中，抗原会有相当量的损失，制备过程中也涉及的剪切力及有机溶剂也会 影响抗原的生物活性，因而该方法从实际应用的角度来看不大可行。此外，狂犬病是一种由狂犬病病毒引起的世界性人兽共患性疾病，它能侵蚀人、家畜和 野生动物的中枢神经系统。人类感染狂犬病毒后， 一旦发病，死亡率为100%。我国狂犬病发 病率和死亡率仅次于印度，并且近年来呈不断上升趋势，因此对于狂犬病的预防也是刻不容 缓。目前对狂犬病尚无有效治疗方法，接种人狂犬病疫苗后，可刺激机体产生抗狂犬病病毒 免疫力，用于预防狂犬病。狂犬病疫苗可采用免疫5针用于暴露后免疫，也可接种3针暴露 前免疫，按是否添加佐剂可分为佐剂疫苗和无佐剂疫苗，使用Al(OH)3佐剂能够增强疫苗的 免疫原性而提高免疫效果，有利于抗体持续产生。但是狂犬病是致死性疾病，早期抗体产生 在防止发病中起到了重要的作用，注射狂犬病疫苗后抗体产生的越早越好，因此需要一种新 型佐剂疫苗，能快速在机体内迅速诱导抗原的特异性的免疫应答。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术存在的不足，提供一种以可生物降解聚合物颗粒作为佐 剂的疫苗，能够在机体内迅速诱导抗原的特异性诱导的免疫应答，诱导机体产生体液免疫和 细胞免疫，分泌抗体或细胞因子等来清除或控制疾病。本专利技术提供的疫苗包含吸附于聚合物颗粒上的抗原与未吸附的抗原(游离抗原)两种形 式，聚合物颗粒表面吸附有一定量的抗原溶液，增强了抗原被抗原提呈细胞吞噬的能力，从 而达到增强免疫效果的作用。在本专利技术中，所提供的疫苗包含有平均粒径为O.l-20/im的可生物降解的聚合物颗粒和乙 肝表面抗原溶液，其中聚合物颗粒与抗原的重量比为10~5000，通过聚合物颗粒与抗原溶液 的吸附作用制得的悬液即为疫苗产品。在本专利技术中，在抗原与聚合物颗粒混合前，比较优选的抗原浓度为5//g 100Qwg/ml，优 选的抗原浓度为lQMg 50(^g/ml ，更优选的抗原浓度为20//g 20(^g/ml ，还可以是 30〃g 10Qag/ml。在本专利技术中，所述的聚合物颗粒与抗原溶液的吸附作用使得所得疫苗产品的悬液中包含有两种形式的抗原吸附于聚合物颗粒上的抗原与未吸附的抗原(游离抗原)，两者的比例依 赖于具体选择的吸附方式，通过控制制备过程的工艺条件，就能制备得到满足要求的疫苗产口叫o在本专利技术中，将聚合物颗粒加入至与抗原溶液中，所述的吸附作用可通过在盐溶液存在的条件下聚合物颗粒的疏水性与抗原蛋白分子的疏水作用来完成。在一定盐浓度存在的条件 下，将聚合物颗粒抗原溶液混合后振荡吸附一定时间，抗原与聚合物颗粒通过疏水作用相互 作用，就能制备得到可快速诱导抗原的特异性细胞免疫应答的治疗性疫苗。抗原通常在有利于疏水作用的条件下吸附至疏水性的材料上，影响抗原与聚合物颗粒的 因素有多种，如盐种类、盐浓度、溶液的pH及一些添加剂对于抗原与聚合物颗粒之间的吸 附都有影响。本领域技术人员可以根据需要，选择具体的制备工艺。可选择的盐的种类有多 种，如氯化钠、氯化镁、硫酸钠、硫酸镁和硫酸铵等，作为一种注射用疫苗的辅料，优选的 实施方式是选用氯化钠。盐的浓度也对吸附作用有影响，抗原在聚合物颗粒中的吸附量随盐 浓度的提高而增加，但过高的盐浓度会使得聚合物颗粒之间发生明显的聚集，同时过高的盐 浓度也使得注射用疫苗的渗透压超过机体的耐受范围。作为本专利技术提供的一个优选的实施方 式，选用氯化钠作为吸附用盐时，其浓度可在0.1 10mg/ml调节，优选的浓度为03~5mg/ml， 更优选的浓度为0.5 1.5mg/ml。抗原与聚合物颗粒吸附时，溶液的pH值影响抗原的吸附效率， 同时影响抗原的生物活性保持。在本专利技术中，抗原与聚合物颗粒吸附溶液的pH优选作为5~8， 更优选的pH值为5.5 6.5。此外，作为疏水作用的吸附方式，抗原与聚合物颗粒吸附的温度 也对所得的疫苗产品有影响，过低的温度不利于抗原的吸附，而过高的温度不利用抗原的生 物活性保持， 一般可在室温下进行疫苗产品的制备。通过抗原与聚合物颗粒在盐溶液中以疏 水作用来制备疫苗产品，离心测上清液中抗原的残留量，计算聚合物颗粒对抗原的吸附效率， 吸附于聚合物颗粒上的抗原相对于吸附前的抗原用量，重量比一般在1%~30%，优选的为 3%~25%，更优选的是5~20%，可以是5-15%，还可以是10%左右，其比例依赖于具体选择 的吸附方式。在本专利技术中，可以用做疫苗佐剂的材料很多，可选自聚乳酸、聚羟基乙酸、聚乳酸-聚羟 基乙酸共聚物、聚己内酯、聚原酸酯、聚酸酐、聚磷腈及其与聚乙二醇共聚所得的聚合物材 料中的一种或者几种。它们都是可生物降解、生物相容性很好的聚合物材料，而且都具有疏 水基团，能呈现一定程度的疏水本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗，其中的抗原组成为吸附于可生物降解聚合物颗粒上的抗原与未吸附的抗原（游离抗原）两种形式，所述的颗粒的平均粒径为０．１～２０μｍ，所述的抗原结构明确，具有抗病毒作用。

【技术特征摘要】
1、一种疫苗，其中的抗原组成为吸附于可生物降解聚合物颗粒上的抗原与未吸附的抗原(游离抗原)两种形式，所述的颗粒的平均粒径为0.1～20μm，所述的抗原结构明确，具有抗病毒作用。2、 如权利要求1所述的疫苗，通过以下方法制备:将聚合物颗粒与抗原溶液以重量比10~5000 进行混合，通过聚合物颗粒与抗原溶液的吸附作用制得的悬液即为疫苗产品。3、 如权利要求l所述的疫苗，其特征在于，所述的吸附作用是通过抗原与聚合物颗粒在盐溶 液中以疏水作用来实现。4、 如权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述的吸附作用是通过抗原与聚合物颗粒以静电 作用来实现。5、 如权利要求l所述的疫苗，所述的抗原为乙肝表面抗原，优选为通过重组汉逊酵母表达体 系得到的乙肝表面抗原。6、 如权利要求l所述的疫苗，所述的抗原为人用狂犬病疫苗抗原。7、 如权利要求l所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗产品中的抗原总浓度根据需要可调节为 l~50ng/0.2~lml，聚合物颗粒的浓度为0.5~5mg/0.2~lml。8、 如权利要求1-7中任一种所述的疫苗，其特征在于，在抗原与聚合物颗粒吸附前，所述的 抗原浓度为5ng~1000ng/ml，优选为10ng~500ng/ml，更优选的抗原浓度为20ng~200ng/ml。9、 如权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所制备得到的疫苗产品中，吸附于聚合物颗粒上 的抗原与吸附前的抗原总量的重量比为在1%~30%，优选为3%~25%，更优选的是5~20%。10、 如权利要求4所述的疫苗，其特征在于，所制备得到的疫苗产品中，吸附于聚合物颗...

【专利技术属性】
技术研发人员：马光辉，卫强，梁争论，邱少辉，苏志国，李河民，安康，林小军，范蓓，田瑞，魏炜，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]