【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测，具体涉及一种免疫亲和柱作为前处理联用量子点免疫层析试纸条检测水产品中河豚毒素的方法。
技术介绍
1、河豚毒素(tetrodotoxin，ttx)是主要存在于河豚鱼体内的一种相对分子质量约为319da的非蛋白海洋神经毒素，2mg的剂量即可致人死亡。有研究证实，由于食物链蓄积、共生细菌、人类活动和气候变化导致的物种迁徙和随后入侵生态系统等原因，除河豚鱼外，一些腹足类软体动物和头足类也携带有河豚毒素，导致了误食含有河豚毒素或被其污染的水产品而导致中毒事件报道的增加，而河豚毒素中毒无特效药可以治疗，因此河豚毒素的检测对预防河豚毒素中毒事件的发生和对水产品河豚毒素的风险评估有重要意义。
2、目前河豚毒素的检测方法主要有生物法、理化检测法和免疫法。生物法主要是小鼠生物法，其剂量-反应关系明显，但易受主观意识的影响，精密度低，专一性差；理化检测法包括荧光分光光度法、液相-荧光色谱法、气相/液相串联质谱法等，理化法可以实现河豚毒素的定性定量分析，但对设备、人员要求高、前处理复杂、检测时间长；利用抗原抗体结合原理的免疫法具有高特异性和高灵敏度，包括酶联免疫吸附法、电化学免疫分析法、免疫层析法，可广泛应用于样本初筛。其中基于河豚毒素单克隆抗体和竞争elisa原理的免疫层析(iac)法检测因其灵敏度、快速直观、便携性、易操作性、成本等方面的优势适用于水产品中河豚毒素的筛查。
3、已有的文献表明，使用免疫层析技术可以实现河豚毒素检测，试纸条的基本组装技术已经成熟，这些学者对河豚毒素免疫层析技术的建立进行了
4、针对以上问题，从以下两个方面入手解决：第一方面，基于特异性单克隆抗体选择合适的标记物：量子点材料，对检测抗体进行标记，增强检测方法的稳定性，提高灵敏度，优化检测性能，构建检测方法；第二方面，制备河豚毒素免疫亲和柱，对河豚毒素提取液进行净化，高亲和性、高效性富集得到目标物溶液后进行免疫层析检测，降低基质干扰。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种免疫亲和柱作为前处理联用量子点免疫层析试纸条检测水产品中河豚毒素的方法，可实现快速准确定量检测多种水产样品中河豚毒素的含量，灵敏度高，且前处理过程可以消减样品基质对检测结果的影响，提高检测的准确性，降低方法检测限。
2、本专利技术提供了一种河豚毒素亲和吸附介质，所述河豚毒素亲和吸附介质由载体和河豚毒素抗体偶联得到；
3、所述载体包括能够被溴化氰活化的琼脂糖凝胶、交联的琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶或纤维素。
4、优选的，所述河豚毒素抗体包括单克隆igg抗体或多克隆抗体。
5、优选的，所述偶联，包括：每ml所述载体与1～10mg所述河豚毒素抗体混合，25～30℃偶联10～60min。
6、本专利技术还提供了一种河豚毒素免疫亲和柱，所述河豚毒素免疫亲和柱的主体结构包括柱体、垫板和堵头，所述柱体中间填充上述河豚毒素亲和吸附介质。
7、本专利技术还提供了一种河豚毒素定量检测试剂盒，包括上述河豚免疫亲和柱、河豚毒素量子点免疫层析试纸条和量子点标记的河豚毒素单克隆抗体；
8、所述河豚毒素量子点免疫层析试纸条包括卡壳、底板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线上包被河豚毒素完全抗原，所述质控线包被羊抗小鼠igg抗体。
9、优选的，所述河豚毒素完全抗原由河豚毒素标准品和载体蛋白偶联得到。
10、优选的，所述完全抗原的喷涂浓度为0.4～1.2mg/ml，所述羊抗小鼠igg抗体的喷涂浓度为0.4～1.6mg/ml。
11、优选的，还包括平衡缓冲液、洗脱液、清洗液1、清洗液2和保护液；
12、所述平衡缓冲液为10mm pbs，ph值为7.4；
13、所述洗脱液为含0.1m甘氨酸和0.5m nacl的混合液，ph值为3；
14、所述清洗液1为含0.1m ch3coona和0.5m nacl的混合液，ph值为4；
15、所述清洗液2为含0.1m tris-hcl和0.5m nacl的混合液，ph值为8；
16、所述保护液为含20％(v/v)乙醇的10mm pbs，ph值为7.4。
17、本专利技术还提供了一种基于上述河豚毒素定量检测试剂盒定量检测河豚毒素的方法，包括以下步骤：(1)将醋酸和水产品肌肉组织混合匀浆并加热，冷却后收集上清液，得提取液；
18、(2)利用河豚毒素免疫亲和柱对步骤(1)得到的所述提取液进行净化和富集，收集洗脱液，得到待测物；
19、(3)将量子点标记的河豚毒素单克隆抗体的稀释液与步骤(2)得到的所述待测物混合孵育，得待测溶液；
20、(4)将步骤(3)中得到的待测溶液加入河豚毒素量子点免疫层析试纸条中的样品垫上，读取检测线的荧光强度值，根据所述荧光强度值定量计算所述待测溶液中河豚毒素的浓度。
21、优选的，还包括利用不同浓度的河豚毒素标准品完成上述方法，绘制定量曲线。
22、有益效果：本专利技术提供了一种由载体和河豚毒素抗体偶联得到的河豚毒素亲和吸附介质，填充后制备得到河豚毒素免疫亲和柱。本专利技术将水产品的肌肉组织的提取液，经过上样、洗涤、洗脱等系列操作后作为水产品提取液中河豚毒素的富集净化作为检测方法的前处理手段，样品中河豚毒素与柱中填充的吸附剂特异性结合，再通过一定体积的洗脱液洗脱结合的河豚毒素，实现水产品提取液中河豚毒素的净化富集从而提高荧光免疫层析检测的准确性，间接降低河豚毒素检测限。
23、本专利技术提供了一种水产品中河豚毒素的免疫亲和柱作为前处理富集净化提取液并联用量子点免疫层析试纸条的系统检测方法，可实现快速准确定量检测多种水产样品中河豚毒素的含量，灵敏度高，且前处理过程可以消减样品基质对检测结果的影响，提高检测的准确性，降本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种河豚毒素亲和吸附介质，其特征在于，所述河豚毒素亲和吸附介质由载体和河豚毒素抗体偶联得到；
2.根据权利要求1所述河豚毒素亲和吸附介质，其特征在于，所述河豚毒素抗体包括单克隆IgG抗体或多克隆抗体。
3.根据权利要求1或2所述河豚毒素亲和吸附介质，其特征在于，所述偶联，包括：每mL所述载体与1～10mg所述河豚毒素抗体混合，25～30℃偶联10～60min。
4.一种河豚毒素免疫亲和柱，其特征在于，所述河豚毒素免疫亲和柱的主体结构包括柱体、垫板和堵头，所述柱体中间填充权利要求1～3任一项所述河豚毒素亲和吸附介质。
5.一种河豚毒素定量检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求4所述河豚免疫亲和柱、河豚毒素量子点免疫层析试纸条和量子点标记的河豚毒素单克隆抗体；
6.根据权利要求5所述河豚毒素定量检测试剂盒，其特征在于，所述河豚毒素完全抗原由河豚毒素标准品和载体蛋白偶联得到。
7.根据权利要求5或6所述河豚毒素定量检测试剂盒，其特征在于，所述完全抗原的喷涂浓度为0.4～1.2mg/mL，所述羊抗小鼠IgG抗体的喷
8.根据权利要求5所述河豚毒素定量检测试剂盒，其特征在于，还包括平衡缓冲液、洗脱液、清洗液1、清洗液2和保护液；
9.一种基于权利要求5～8任一项所述河豚毒素定量检测试剂盒定量检测河豚毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将醋酸和水产品肌肉组织混合匀浆并加热，冷却后收集上清液，得提取液；
10.根据权利要求9所述方法，其特征在于，还包括利用不同浓度的河豚毒素标准品完成权利要求9所述方法，绘制定量曲线。
...【技术特征摘要】
1.一种河豚毒素亲和吸附介质，其特征在于，所述河豚毒素亲和吸附介质由载体和河豚毒素抗体偶联得到；
2.根据权利要求1所述河豚毒素亲和吸附介质，其特征在于，所述河豚毒素抗体包括单克隆igg抗体或多克隆抗体。
3.根据权利要求1或2所述河豚毒素亲和吸附介质，其特征在于，所述偶联，包括：每ml所述载体与1～10mg所述河豚毒素抗体混合，25～30℃偶联10～60min。
4.一种河豚毒素免疫亲和柱，其特征在于，所述河豚毒素免疫亲和柱的主体结构包括柱体、垫板和堵头，所述柱体中间填充权利要求1～3任一项所述河豚毒素亲和吸附介质。
5.一种河豚毒素定量检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求4所述河豚免疫亲和柱、河豚毒素量子点免疫层析试纸条和量子点标记的河豚毒素单克隆抗体；
6.根据权...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。