【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及一种mrna肿瘤疫苗及其制备方法和在治疗肿瘤和/或预防肿瘤复发中的应用。
技术介绍
1、外科手术是实体肿瘤的一线治疗手段。然而，在能接受手术治疗的病人中，会有术后的肿瘤组织和肿瘤细胞残留，高达30％-40％的肿瘤病人在术后5年内发生复发或转移。目前主要以传统放化疗为术后治疗，然而经过初始放化疗后仍然有较大部分患者出现肿瘤复发且复发性肿瘤存在不易早期发现、治疗效果较差、甚至可能会在患者体内长期存在一系列不良反应。因此肿瘤复发仍是肿瘤患者面临的重要问题，目前还没有药物可以长期预防肿瘤的复发和转移。随着免疫诊疗技术的不断提高，免疫疗法将能够填补这一空白。
2、目前术后免疫疗法的现有技术包括溶瘤病毒疗法、细胞因子疗法、单克隆抗体技术以及免疫检查点抑制剂方法。溶瘤病毒疗法：这一疗法将天然或经过基因重组的病毒，选择性地感染癌细胞，通过病毒自身的复制杀死并裂解癌细胞，释放出的病毒继续侵入癌细胞发挥作用[1,2]。同时癌细胞裂解后释放的肿瘤相关抗原来增强抗肿瘤免疫应答反应，溶瘤病毒能够消除局部残留肿瘤细胞，引导免疫系统对其他癌细胞甚至远端病灶展开攻击[3,4]。然而仅仅依靠溶瘤病毒完全清除肿瘤具有较大的难度，溶瘤病毒的主要限制是宿主快速产生中和抗体，这限制了病毒向转移性癌症部位的递送和治疗效果。溶瘤病毒常常需要与其他疗法联合使用[5]。细胞因子疗法：细胞因子为细胞分泌的小蛋白质，是细胞通信和相互作用的关键。这些蛋白参与控制炎症，是有效抗肿瘤免疫反应的关键组成部分[6]。例如ifn-α、il-2等细胞因
3、本专利技术提供了一种制备携带肿瘤抗原的mrna疫苗，通过抗原递呈细胞途径去激活特异性t细胞的方法，相对于其他术后配合治疗方法如放化疗而言，能够降低副作用、帮助其他癌症治疗取得更好的效果，更好的防止肿瘤的复发和转移。
技术实现思路
1、为了克服现有技术中的缺陷，本专利技术提供了一种mrna肿瘤疫苗及其制备方法和在治疗肿瘤和/或预防肿瘤复发中的应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术的第一方面是提供一种mrna肿瘤疫苗的制备方法，包括：制备含有携带肿瘤抗原序列的mrna的水相和含有脂质的油相；混合水相和油相，采用微流控混合技术来制备核酸脂质纳米颗粒，即为mrna肿瘤疫苗。
4、进一步地，上述肿瘤抗原选自hpv16、hpv18、hpv31、hpv33、hpv39、hpv45、ebv、ny-eso、mage-a3、psa、her2、tp53 mut、kras mut中的一种。
5、进一步地，上述含有携带肿瘤抗原序列的mrna的水相为含有浓度为0.09～0.20mg/ml的携带肿瘤抗原序列的mrna的醋酸钠缓冲液；优选地，醋酸钠缓冲液的浓度为0.08～0.2mol/l，ph为3.5～4.5；更优选地，浓度为0.1mol/l，ph为4。
6、进一步地，上述含有脂质的油相包括阳离子脂质、辅助性脂质、胆固醇、peg脂质和无水乙醇；优选地，阳离子脂质的浓度为6～7mm，阳离子脂质、辅助性脂质、胆固醇和peg脂质的摩尔比为(35～50)：(5～10)：(30～38)：(0.5～2)。
7、进一步地，上述携带肿瘤抗原序列的mrna的水相和含有脂质的油相的体积比为2～5：1。
8、进一步地，上述携带肿瘤抗原序列的mrna通过如下步骤合成：
9、步骤一，将上述肿瘤抗原基因插入到puc57载体质粒；
10、步骤二，通过载体质粒的酶切、体外转录、加帽反应获得上述携带肿瘤抗原序列的mrna。
11、进一步地，上述肿瘤抗原基因的序列为seq id no.1。
12、本专利技术的第二方面是提供上述制备方法制备的治疗肿瘤和/或预防肿瘤复发生的mrna肿瘤疫苗。
13、本专利技术的第三方面是提供上述mrna肿瘤疫苗在制备治疗肿瘤和/或预防肿瘤复发的药物中的应用。
14、进一步地，上述药物还包括药学上可接受的载体或赋形剂。
15、本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
16、本专利技术提供的mrna肿瘤疫苗通过抗原递呈细胞递呈肿瘤抗原，从而激活特异性t细胞以及特异性记忆性t细胞，杀伤残留肿瘤细胞的特异性强、对正常细胞无杀伤作用，配合手术治疗方法，可使得肿瘤复发的可能性明显降低，使人体更长时间地远离癌症。
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1.一种mRNA肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，包括：制备含有携带肿瘤抗原序列的mRNA的水相和含有脂质的油相；混合所述水相和油相，采用微流控混合技术来制备核酸脂质纳米颗粒，即为mRNA肿瘤疫苗。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述肿瘤抗原选自HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV39、HPV45、EBV、NY-ESO、MAGE-A3、PSA、HER2、TP53 mut、Kras mut中的一种。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含有携带肿瘤抗原序列的mRNA的水相为含有浓度为0.09-0.20mg/ml的携带肿瘤抗原序列的mRNA的醋酸钠缓冲液；优选地，所述醋酸钠缓冲液的浓度为0.08～0.2mol/L，pH为3.5～4.5；更优选地，所述醋酸钠缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH为4。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含有脂质的油相包括阳离子脂质、辅助性脂质、胆固醇、PEG脂质和无水乙醇；优选地，所述阳离子脂质的浓度为6～7mM，阳离子脂质、辅助性脂质、胆固醇和PEG脂质的
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述携带肿瘤抗原序列的mRNA的水相和含有脂质的油相的体积比为2～5：1。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述携带肿瘤抗原序列的mRNA通过如下步骤合成：
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述肿瘤抗原基因的序列为SEQ IDNO.1。
8.如权利要求1-7任一项所述制备方法制备的治疗肿瘤和/或预防肿瘤复发生的mRNA肿瘤疫苗。
9.如权利要求8所述的mRNA肿瘤疫苗在制备治疗肿瘤和/或预防肿瘤复发的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体或赋形剂。
...【技术特征摘要】
1.一种mrna肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，包括：制备含有携带肿瘤抗原序列的mrna的水相和含有脂质的油相；混合所述水相和油相，采用微流控混合技术来制备核酸脂质纳米颗粒，即为mrna肿瘤疫苗。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述肿瘤抗原选自hpv16、hpv18、hpv31、hpv33、hpv39、hpv45、ebv、ny-eso、mage-a3、psa、her2、tp53 mut、kras mut中的一种。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含有携带肿瘤抗原序列的mrna的水相为含有浓度为0.09-0.20mg/ml的携带肿瘤抗原序列的mrna的醋酸钠缓冲液；优选地，所述醋酸钠缓冲液的浓度为0.08～0.2mol/l，ph为3.5～4.5；更优选地，所述醋酸钠缓冲液的浓度为0.1mol/l，ph为4。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含有脂质的油相包括阳离子...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱明华，胡隆胜，张可，施洪亮，钱龙，路兴爱，黄欢欢，屈佳浩，任丽，
申请(专利权)人：江苏若泰医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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