一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活疫苗的方法及其制品技术

本发明专利技术提供了一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活疫苗的方法及其猪瘟细胞活疫苗产品，该方法包括如下步骤：将生物反应器和微载体经消毒后接种所述制苗用细胞，并加入细胞生长液进行培养。将生物反应器接种所述含猪瘟兔化弱毒毒种的维持液，继续培养。接毒后１～３日或流加方式收获得到的细胞培养毒液；再加入稳定剂和抗生素，经冷冻真空干燥得到猪瘟细胞活疫苗；本发明专利技术使细胞密度大大增加，病毒浓度极大提高；疫苗效价提高，副反应减小；降低劳动强度，减少生产成本；疫苗生产可监控性提高；保证产品质量均一稳定。利用本发明专利技术生产的猪瘟细胞活疫苗安全性好、免疫效力高，对猪瘟强毒攻击具有较好的免疫保护作用。

Method for producing hog cholera cell live vaccine by bioreactor and product thereof

The present invention provides a method for vaccine production using bioreactor and swine fever swine fever cell vaccine products, the method comprises the following steps: biological reactor and micro carrier after disinfection for vaccine inoculation of the cells, and adding cell growth cultured. The bioreactor inoculated with the purified liquid containing different kinds of weak maintenance, continue to cultivate. 1 ~ 3 days after inoculation or feeding harvested cell culture venom; adding stabilizer and antibiotics, by vacuum freeze drying to get swine fever vaccine; the cell density increases greatly, greatly improve the concentration of virus; vaccine titer increased, the side reaction is reduced; reduce labor intensity, reduce the production cost; vaccine production monitoring to ensure product quality improve; uniform stability. The classical swine fever cell vaccine produced by the invention has good safety and high immunity, and has better immune protection effect to the strong toxin attack of hog cholera.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于兽用生物制品
，更具体是涉及一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活疫苗的方法及其制品。
技术介绍
当前猪瘟细胞活疫苗的生产主要是转瓶细胞培养的传统培养方式，该培养方式是 培养细胞贴壁生长于玻璃培养瓶的内壁上，虽然其操作技术要求较低和技术成熟稳定；但 转瓶培养技术已经使用数十年，与当前大规模动物疫苗生产不相适应，主要表现为(l)转 瓶细胞培养，不能做到培养条件适时调整，无法保证细胞培养处于最佳条件，培养细胞密度 小，培养病毒滴度低，动物的免疫效果差；(2)转瓶细胞培养，细胞碎片与杂蛋白多，疫苗的 杂质多，导致免疫动物的副反应大；(3)转瓶细胞培养，细胞批间差异较大，产品质量不均 一、不稳定；(4)转瓶细胞培养，生产效率低，生产成本高。
技术实现思路
为克服上述技术缺陷，本专利技术的目的是提供一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活 疫苗的方法及猪瘟细胞活疫苗产品。 为实现上述目的，本专利技术首先提供了 一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活疫苗的方法，该方法包括如下步骤 (1)用细胞生长液培养制苗用细胞； (2)将所述步骤(1)得到的细胞接种含猪瘟兔化弱毒毒种的维持液，并进行繁殖 培养； (3)接毒后1 3日或流加方式收获所述步骤(2)得到的细胞培养毒液； (4)在所述步骤(3)得到的细胞培养毒液中加稳定剂和抗生素，经冷冻真空干燥得到猪瘟细胞活疫苗； 其中，上述方法中使用了含微载体的生物反应器进行培养。 优选的，所述步骤(1)包括如下步骤将所述生物反应器和微载体经消毒后接种 所述制苗用细胞，并加入细胞生长液进行培养。 优选的，所述步骤(2)包括如下步骤将所述生物反应器接种所述含猪瘟兔化弱 毒毒种的维持液，继续培养。 优选的，所述步骤(1)和(2)中的培养温度为36°C 37°C。 优选的，所述步骤(l)中的细胞生长液含90X 92X体积百分比的MEM液、抗菌素和8% 10%体积百分比的犊牛血清，所述细胞生长液的pH值为7. 0 7. 2。 优选的，所述步骤(2)中的接种时的接种量为1% 2%体积百分比的生产用细胞毒种的维持液。 优选的，所述步骤(2)中的细胞维持液含95% 98%体积百分比的MEM液、抗菌 素和2% 5%体积百分比的犊牛血清，所述细胞维持液的pH值为7. 2 7. 4。 优选的，所述生物反应器为TideCell固定床微载体生物反应器。TideCell生物 反应器可达到简化至只需一般针筒以及无血清培养细胞方式，培养之载体细胞均匀分布成 长，其有效量产经实验证实， 一个TideCell生物反应器，产能约一般传统生物反应器的4 倍。 优选的，所述制苗用细胞为猪睾丸细胞系ST、猪肾细胞系PK15或猪肾细胞系 I服S-2。 本专利技术的目的之二是提供一种猪瘟细胞活疫苗制品，该猪瘟细胞活疫苗通过上述 方法得到。 本专利技术利用生物反应器大规模高密度培养技术，可最大限度地提高生物反应器中 单位体积细胞生长密度，在病毒疫苗生产中具有很大潜力和优势，具体表现为(l)细胞密 度大大增加，病毒浓度极大提高；(2)疫苗效价提高，副反应减小；(3)降低劳动强度，减少 生产成本；(4)疫苗生产可监控性提高；(5)保证产品质量均一稳定。利用本专利技术生产的猪 瘟细胞活疫苗安全性好、免疫效力高，对猪瘟强毒攻击具有较好的免疫保护作用。具体实施例方式为使本专利技术更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这 些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围，下列实施例中未提及的具体实验 方法，通常按照常规实验方法进行。 利用生物反应器大规模细胞培养技术，生产猪瘟细胞活疫苗的生产工艺技术与方 法，包括如下步骤 (1)选择生物反应器TideCell固定床微载体生物反应器。 (2)选择细胞系作为制苗用细胞本实施例中选择猪睾丸(ST)细胞系作为制苗用 细胞。在另两个实施例中，分别选用猪肾(PK15)细胞系和猪肾(IBRS-2)细胞系。 (3)利用生物反应器培养制苗用细胞选择适宜的细胞系，生物反应器和微载体 经消毒后接种适宜的细胞浓度(10e 8X10e个细胞/ml)并加入适量的培养基，通过调 整细胞培养系统中各培养条件溶氧浓度为50% 100%、 C02浓度为5%、葡萄糖含量为 500 3000mg/L和pH值为7. 0 7. 4，培养高密度的细胞系作为制苗用细胞。 (4)选择制苗用毒种猪瘟兔化弱毒株。 (5)生物反应器繁殖制苗用毒液将生物反应器中生长良好的上述传代细胞微载 体培养灌中的细胞生长液弃去，接种含适量毒种的维持液，继续培养；接毒后1 3日或流 加方式收获细胞培养毒液，收获的毒液置_15°C以下保存； 制苗毒液的检验按《中华人民共和国兽药典》(2005年版)附录15、19页进行检 验，无细菌、霉菌、支原体生长。细胞毒液对猪安全无副作用，各收次病毒培养液分别用兔测 定效价，每lml含病毒^ 2X1()6兔体感染量(RID)。 (6)配苗、分装及冻干将检验合格的病毒培养液，混合于同一容器内，加入稳定 剂，同时加入抗生素，充分摇匀，定量分装；分装后迅速进行冷冻真空干燥后即得成品。 成品检验按《中华人民共和国兽药典》(2005年版)进行检验，符合猪瘟细胞活 疫苗的规定，对猪安全无副作用，每头份疫苗含病毒^ 1.5X104RID。 其中，上述方法中涉及到的具体的条件如下4 步骤(3) 、 (5)中所述的传代细胞培养温度是36 37°C。 步骤(5)中所述的接种量为含1% 2%生产用细胞毒种的维持液。 步骤(3)中所用生长液的配方是90% 92% MEM液、8X 10%犊牛血清、加适量的抗菌素，pH值调整为7. 0 7. 2。 步骤(5)中所用维持液的配方是95X 98XMEM液、2X 5X犊牛血清、加适量 的抗菌素，pH值调整为7. 2 7. 4。 最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本专利技术的技术方案而非对本专利技术保 护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本专利技术作了详细说明，本领域的普通技术人员应当 理解，可以对本专利技术的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的实质 和范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活疫苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：　　　　（１）用细胞生长液培养制苗用细胞；　　　　（２）将所述步骤（１）得到的细胞接种含猪瘟兔化弱毒毒种的维持液，并进行繁殖培养；　　　　（３）接毒后１～３日或流加方式收获所述步骤（２）得到的细胞培养毒液；　　　　（４）在所述步骤（３）得到的细胞培养毒液中加入稳定剂和抗生素，经冷冻真空干燥得到猪瘟细胞活疫苗；　　　　其中，上述方法中使用了含微载体的生物反应器进行培养。

【技术特征摘要】
一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活疫苗的方法，其特征在于，包括如下步骤(1)用细胞生长液培养制苗用细胞；(2)将所述步骤(1)得到的细胞接种含猪瘟兔化弱毒毒种的维持液，并进行繁殖培养；(3)接毒后1～3日或流加方式收获所述步骤(2)得到的细胞培养毒液；(4)在所述步骤(3)得到的细胞培养毒液中加入稳定剂和抗生素，经冷冻真空干燥得到猪瘟细胞活疫苗；其中，上述方法中使用了含微载体的生物反应器进行培养。2. 根据权利要求1所述的一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活疫苗的方法，其特征在 于，所述步骤(1)包括如下步骤将所述生物反应器和微载体经消毒后接种所述制苗用细 胞，并加入细胞生长液进行培养。3. 根据权利要求1所述的一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活疫苗的方法，其特征在 于，所述步骤(2)包括如下步骤将所述生物反应器接种所述含猪瘟兔化弱毒毒种的维持 液，继续培养。4. 根据权利要求1所述的一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活疫苗的方法，其特征在 于，所述步骤(1)和(2)中的培养温度为36°C 37°C。5. 根据权利要求1所述的一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活疫苗的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴文福，张毓金，林旭野，岑小清，任向阳，游启有，张木辉，周泽标，刘秋燕，司徒剑谋，
申请(专利权)人：广东永顺生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]