用于人和猴组织中的增强型BCMA免疫组织化学检测的方法技术
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本文提供了检测样本诸如患者的体液或组织中分子的存在的方法。
技术介绍
技术实现思路
1、在一个方面，本文提供了一种在福尔马林固定石蜡包埋(“ffpe”)样品中检测b细胞成熟抗原(“bcma”)分子的方法，该方法包括：将ffpe样本切片并封固；将样本脱蜡；对样本进行热介导的抗原修复；用封闭剂预处理样本；使样本与第一检测剂接触，其中任选地第一检测剂包含结合样本中的至少一个bcma分子的抗体或其抗原结合片段；任选地，去除未结合的样本；使与第一检测剂结合的样本与第二检测剂接触，其中任选地第二检测剂是抗体或其片段；任选地去除未结合的第二检测剂；以及检测与样本结合的第二检测剂的存在；其中与样本结合的第二检测剂的量高于背景的检测指示样本中至少一个bcma分子的存在。
2、在一些实施方案中，使用基于edta的溶液进行热介导的抗原修复。
3、在一些实施方案中，基于edta的溶液具有8.5至9.5之间的ph。在一些实施方案中，基于edta的溶液具有9.0的ph。
4、在一些实施方案中，热介导的抗原修复步骤进行5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟或60分钟。
5、在一些实施方案中，热介导的抗原修复步骤在85℃与100℃之间的温度下进行。在一些实施方案中，热介导的抗原修复步骤在100℃下进行。
6、在一些实施方案中，封闭剂封闭内源性过氧化物酶。在一些实施方案中，封闭剂为过氧化物封闭液。
7、在一些实施方案中，用过氧化物封闭液预
8、在一些实施方案中，封闭剂封闭非特异性抗体结合。在一些实施方案中，封闭剂为dako/agilent蛋白封闭液。
9、在一些实施方案中，用dako/agilent蛋白封闭液预处理的步骤进行5分钟、10分钟、15分钟、20分钟或30分钟。
10、在一些实施方案中，第一检测剂为抗体或其抗原结合片段。
11、在一些实施方案中，使样本在室温或37℃下与第一检测剂接触。
12、在一些实施方案中，使样本与第一检测剂接触15分钟、30分钟、45分钟、60分钟、95分钟或120分钟。
13、在一些实施方案中，第二检测剂为抗体或其抗原结合片段。
14、在一些实施方案中，使与第一检测剂结合的样本与第二检测剂接触5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟或30分钟。
15、在一些实施方案中，样本包含来自体液或组织的细胞。在一些实施方案中，组织为脑组织。在其他实施方案中，组织来自脑的纹状体、丘脑、中脑或髓质区。
16、在一些实施方案中，组织为肿瘤组织。
17、在一些实施方案中，样品来自受试者。在一些实施方案中，受试者为哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物是人。在一些实施方案中，哺乳动物为食蟹猴(macacafascicularis)。
18、在一个方面，本文提供了一种用于执行本文所公开的方法的试剂盒。
19、在一个方面，本文提供了一种用bcma靶向剂治疗受试者的方法，该方法包括在来自受试者的样本中检测bcma的步骤。
20、在一些实施方案中，在样本中检测bcma的步骤包括本文所公开的方法。
21、在一些实施方案中，靶向剂是嵌合抗原受体(car)t细胞。在其他实施方案中，靶向剂是t细胞重定向抗体。
22、在一些实施方案中，受试者患有癌症。在一些实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种在福尔马林固定石蜡包埋(“FFPE”)样品中检测B细胞成熟抗原(“BCMA”)分子的方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中使用基于EDTA的溶液进行所述热介导的抗原修复。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述基于EDTA的溶液具有8.5至9.5之间的pH。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述基于EDTA的溶液具有9.0的pH。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述热介导的抗原修复步骤进行5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟或60分钟。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述热介导的抗原修复步骤在85℃与100℃之间的温度下进行。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述热介导的抗原修复步骤在100℃下进行。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述封闭剂封闭内源性过氧化物酶。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述封闭剂为过氧化物封闭液。
10.根据权利要求9所述的方法，其中用过氧化物封闭液预处理
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述封闭剂封闭非特异性抗体结合。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述封闭剂为Dako/Agilent蛋白封闭液。
13.根据权利要求12所述的方法，其中用Dako/Agilent蛋白封闭液预处理的所述步骤进行5分钟、10分钟、15分钟、20分钟或30分钟。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述第一检测剂为抗体或其抗原结合片段。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中使所述样本在室温或37℃下与所述第一检测剂接触。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中使所述样本与所述第一检测剂接触15分钟、30分钟、45分钟、60分钟、95分钟或120分钟。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述第二检测剂为抗体或其抗原结合片段。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中使与所述第一检测剂结合的所述样本与所述第二检测剂接触5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟或30分钟。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述样本包含来自体液或组织的细胞。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述组织是脑组织。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述组织来自所述脑的纹状体、丘脑、中脑或髓质区。
22.根据权利要求19所述的方法，其中所述组织是肿瘤组织。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述样本来自受试者。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述受试者为哺乳动物。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述哺乳动物为人。
26.根据权利要求24所述的方法，其中所述哺乳动物为食蟹猴。
27.一种试剂盒，所述试剂盒用于执行根据权利要求1至26中任一项所述的方法。
28.一种用BCMA靶向剂治疗受试者的方法，包括在来自所述受试者的样本中检测BCMA的步骤。
29.根据权利要求28所述的方法，其中在所述样本中检测BCMA的所述步骤包括根据权利要求1至22或24至26中任一项所述的方法。
30.根据权利要求28或29所述的方法，其中所述靶向剂是嵌合抗原受体(CAR)T细胞。
31.根据权利要求28或29所述的方法，其中所述靶向剂是T细胞重定向抗体。
32.根据权利要求28至31中任一项所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种在福尔马林固定石蜡包埋(“ffpe”)样品中检测b细胞成熟抗原(“bcma”)分子的方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中使用基于edta的溶液进行所述热介导的抗原修复。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述基于edta的溶液具有8.5至9.5之间的ph。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述基于edta的溶液具有9.0的ph。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述热介导的抗原修复步骤进行5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟或60分钟。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述热介导的抗原修复步骤在85℃与100℃之间的温度下进行。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述热介导的抗原修复步骤在100℃下进行。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述封闭剂封闭内源性过氧化物酶。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述封闭剂为过氧化物封闭液。
10.根据权利要求9所述的方法，其中用过氧化物封闭液预处理的所述步骤进行2分钟、5分钟、8分钟、10分钟或15分钟。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述封闭剂封闭非特异性抗体结合。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述封闭剂为dako/agilent蛋白封闭液。
13.根据权利要求12所述的方法，其中用dako/agilent蛋白封闭液预处理的所述步骤进行5分钟、10分钟、15分钟、20分钟或30分钟。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述第一检测剂为抗体或其抗原结合片段。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中使所述样本在室温或37℃下与所述第一检测剂接触。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中使所述样...
【专利技术属性】
技术研发人员：V·卡雷拉，M·马雷拉，I·科纳克斯，
申请(专利权)人：詹森生物科技公司，
类型：发明
国别省市：
-
0来自[美国] 2024年06月14日 12:49e