【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于检测甲流病毒和乙流病毒的逻辑门智能化检测系统及其检测方法，属于生物检测。
技术介绍
1、病毒传播对人类健康构成巨大威胁，深刻影响人们的日常生活。病毒的检测是传染病预防、控制和治疗的前提。与病毒表面糖蛋白分析相比，内在基因序列分析更为准确，可以进一步区分病毒或梳理传播链。逆转录定量聚合酶链反应(rt-qpcr)因其灵敏度高、检测通量高成为主流检测方法。但它也有一定的局限性，在实际应用中存在一定的问题。例如，由于严重依赖大型仪器和专业操作人员，样品需要在人群中集中采集，然后通过冷链运输到测试地点，增加了交叉感染的风险，延长了等待时间。此外，由于底物是dna序列，病毒rna首先应逆转录，这将导致较长的周转时间和可能的转录错误，从而影响检测结果。另外，样品在检测过程中易受气溶胶或储存污染，可能导致假阳性结果。因此，近年来出现了许多新的病毒核酸检测方法，如荧光法、电化学法、比色法。其中目视检测对仪器的依赖最小，适合流行病中个人使用方法的推广，避免群体感染，实现即时诊断。
2、呼吸道疾病可由一种或几种症状相似病毒引起。一方面，不同的病毒可能会引起相似的症状，清楚病毒类型，有助于采取有效的对应治疗措施。另一方面，由于有共同的传播途径，不同类型的病毒可以同时感染，与一种病毒感染相比，因其引起不同的疾病过程，需要特殊的治疗方式。
3、但目前现有技术仅仅是通过pcr等方法对甲流病毒和乙流病毒分别进行检测，根据两次或多次检测的结果来确定甲流病毒和乙流病毒是否共存，或者仅存在某一种。然而这种方法成本高，周期
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种用于检测甲流病毒和乙流病毒的逻辑门智能化检测系统及其检测方法。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、一种甲流病毒和乙流病毒逻辑门智能化定性检测试剂，包括“or”逻辑门智能化定性检测试剂和“inhibit”逻辑门智能化定性检测试剂；
4、所述“or”逻辑门智能化定性检测试剂包括or-脱氧核酶(or-dnazyme)、or-锁定链(l)和底物dna(hs)；所述“inhibit”逻辑门智能化定性检测试剂包括inhibit-脱氧核酶(inh-dnazyme)、inhibit-锁定链l1、inhibit-锁定链l2、互补链ct2和底物dna(hs)；
5、所述or-脱氧核酶(or-dnazyme)的核苷酸序列如seq id no.1所示；
6、所述or-锁定链(l)的核苷酸序列如seq id no.2所示；
7、所述底物dna的核苷酸序列如seq id no.3所示；
8、所述inhibit-脱氧核酶(inh-dnazyme)的核苷酸序列如seq id no.4所示；
9、所述inhibit-锁定链l1的核苷酸序列如seq id no.5所示；
10、所述inhibit-锁定链l2的核苷酸序列如seq id no.6所示；
11、所述互补链ct2的核苷酸序列如seq id no.7所示。
12、一种定性检测甲流病毒和乙流病毒的试剂盒，所述试剂盒包括上述“or”逻辑门智能化定性检测试剂、“inhibit”逻辑门智能化定性检测试剂、mg2+溶液和试纸条。
13、根据本专利技术优选的，所述试纸条包括底板，以及依次衔接贴合于底板的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和控制线。
14、根据本专利技术优选的，所述结合垫上喷涂有dna修饰的金纳米颗粒；所述检测线上固定有经链霉亲和素处理的生物素化t-capture；所述控制线上固定有经链霉亲和素处理的生物素化c-capture。
15、进一步优选的，所述dna修饰的金纳米颗粒按照如下方法制备：
16、(1)配制浓度为38.8mm的柠檬酸钠水溶液，配制浓度为1mm的haucl4水溶液；将haucl4水溶液加热至沸腾，然后一边搅拌一边将柠檬酸钠水溶液加入至haucl4水溶液中，在加热沸腾状态下反应10min，反应完成后再搅拌15min，冷却至25℃，过滤，得到纳米金粒子；
17、(2)将c-aunp和t-aunp分别与tcep在25℃下孵育2h，得到处理后的c-aunp和t-aunp；
18、(3)将处理后的c-aunp和t-aunp和纳米金粒子混合均匀，在25℃下孵育16h后，加入100μl的盐缓冲液，孵育完成后搅拌24h，经洗涤后分散到tris-hcl缓冲液中，得到o-aunp和c-aunp修饰的金纳米颗粒。
19、最优选的，步骤(2)中，所述c-aunp与tcep的摩尔比为1：50，t-aunp与tcep的摩尔比为1:50；所述c-aunp的序列为5’-sh-ctagtcaattgaacc-3’；所述t-aunp的序列为5'-tggcatctgatc-sh-3'；
20、步骤(3)中，所述c-aunp、t-aunp和纳米金粒子的摩尔比为100：100：1；所述盐缓冲液成分为57mm tris-hcl、2280mm nacl、ph 8.0；所述盐缓冲液分10次加入，每次加入的时间间隔40min。
21、利用上述试剂盒定性甲流病毒和乙流病毒的方法，包括步骤如下：
22、(1)将底物dna加入至te缓冲液中，在95℃下加热2min，得到发夹底物dna；
23、(2)将or-脱氧核酶(or-dnazyme)、or-锁定链(l)加入至tnak缓冲液中，混合均匀，在95℃下加热5min，得到阻断后的or-脱氧核酶(or-dnazyme)；将inhibit-脱氧核酶(inh-dnazyme)与inhibit-锁定链l1加入至tnak缓冲液中，混合均匀，在95℃下加热5min，得到阻断后的inhibit-脱氧核酶(inh-dnazyme)；将inhibit-锁定链l2与互补链ct2加入至tnak缓冲液中，混合均匀，在95℃下加热5min，得到l2/ct2双链；
24、(3)将待测样品、阻断后的or-脱氧核酶、发夹底物dna和mg2+溶液加入至tnak缓冲液中，构建第一反应体系；将待测样品、阻断后的inhibit-脱氧核酶、l2/ct2双链、发夹底物dna和mg2+溶液加入至tnak缓冲液中，构建第二反应体系；将第一反应体系和第二反应体系在25～30℃下孵育1.5～2.5h，得到第一反应溶液和第二反应溶液；
25、(4)将第一反应溶液滴加至试纸条上，4～6min后，当检测线显色时，表明存在甲流病毒和乙流病毒中的一种、或同时存在甲流病毒和乙流病毒；当检测线不显色时，表明甲流病毒和乙流病毒均不存在；将第二反应溶液滴加至试纸条上，4～6min后，当检测线显本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种甲流病毒和乙流病毒逻辑门智能化定性检测试剂，其特征在于，包括“OR”逻辑门智能化定性检测试剂和“INHIBIT”逻辑门智能化定性检测试剂；
2.一种定性检测甲流病毒和乙流病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的“OR”逻辑门智能化定性检测试剂、权利要求1所述的“INHIBIT”逻辑门智能化定性检测试剂、Mg2+溶液和试纸条。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试纸条包括底板，以及依次衔接贴合于底板的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和控制线。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述结合垫上喷涂有DNA修饰的金纳米颗粒；所述检测线上固定有经链霉亲和素处理的生物素化T-capture；所述控制线上固定有经链霉亲和素处理的生物素化C-capture。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA修饰的金纳米颗粒按照如下方法制备：
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，步骤(2)中，所述C-AuNP与TCEP的摩尔比为1：50，T-AuNP
7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，步骤(2)中，步骤(3)中，所述C-AuNP、T-AuNP和纳米金粒子的摩尔比为100：100：1；所述盐缓冲液成分为57mM Tris-HCl、2280mMNaCl、pH 8.0；所述盐缓冲液分10次加入，每次加入的时间间隔40min。
8.利用权利要求2所述试剂盒定性甲流病毒和乙流病毒的方法，其特征在于，包括步骤如下：
9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述第一反应体系中，阻断后的OR-脱氧核酶的浓度为5～10nM，发夹底物DNA的浓度为25～35nM，所述Mg2+的浓度为0.5～1.5mM；所述第二反应体系中，阻断后的OR-脱氧核酶的浓度为5～10nM，发夹底物DNA的浓度为25～35nM，所述Mg2+的浓度为0.5～1.5mM。
...【技术特征摘要】
1.一种甲流病毒和乙流病毒逻辑门智能化定性检测试剂，其特征在于，包括“or”逻辑门智能化定性检测试剂和“inhibit”逻辑门智能化定性检测试剂；
2.一种定性检测甲流病毒和乙流病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的“or”逻辑门智能化定性检测试剂、权利要求1所述的“inhibit”逻辑门智能化定性检测试剂、mg2+溶液和试纸条。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试纸条包括底板，以及依次衔接贴合于底板的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和控制线。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述结合垫上喷涂有dna修饰的金纳米颗粒；所述检测线上固定有经链霉亲和素处理的生物素化t-capture；所述控制线上固定有经链霉亲和素处理的生物素化c-capture。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述dna修饰的金纳米颗粒按照如下方法制备：
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，步骤(2)中，所述c-aunp与tc...
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