一种珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法，旨在提供一种繁殖速度快、成本低的珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法。该繁殖方法包括以下步骤：（ａ）芽的诱导和分化步骤；（ｂ）无菌苗的增殖培养步骤；（ｃ）无菌苗的驯化移栽步骤，本发明专利技术采用加有０．５～１．５ｍｇ／Ｌ的６－苄氨基嘌呤（６ＢＡ）和０．０５～０．１５ｍｇ／Ｌ的２，４－二氯苯氧乙酸（２，４－Ｄ）的ＭＳ培养基，可以有效促进珊瑚草叶片快速分化出不定芽；采用０．３～１ｍｇ／Ｌ的６－苄氨基嘌呤（６ＢＡ），糖为３％的ＭＳ培养基中增殖培养，不定芽能旺盛增殖；最后增殖苗置于０．８～１．５ｍｇ／Ｌ的３吲哚丁酸（３ＩＢＡ），糖３％的ＭＳ培养基中培养，增殖苗四周即可快速生根。本发明专利技术可广泛应用于珊瑚草种苗组织培养领域。

Propagation method for tissue culture of coral grass seedlings

The invention discloses a propagation method for the seed tissue culture of coral grass, aiming at providing a propagation method for tissue culture of coral grass seedlings with fast propagation speed and low cost. The reproduction method comprises the following steps: (a) induction and bud differentiation step; (b) the development steps of aseptic seedling proliferation; (c) the aseptic seedling transplanting steps, the invention adopts the addition of 0.5 ~ 1.5mg / L 6-Benzylaminopurine (6BA) and 0.05 ~ 0.15mg / L 2. 4 - two chlorophenoxyacetic acid (2, 4 D) MS medium, can effectively promote the coral grass rapid leaf differentiation of adventitious buds; using 0.3 ~ 1mg / L 6 - benzylaminopurine (6BA), the proliferation of sugar culture medium for 3% MS medium, adventitious buds can exuberant proliferation; finally, proliferation the seedling on 0.8 ~ 1.5mg / L 3 (3IBA), indole butyric acid sugar 3% MS medium, proliferation seedlings can be quickly rooting around. The invention can be widely applied to the field of tissue culture of coral grass seedlings.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，特别涉及。
技术介绍
珊瑚草(Heuchera)又名缠百合，为鸭跖草科植物竹叶吉祥草的花，竹叶吉祥草 (《植物名实图考》)攀援状草本，长0.5 l米，单叶互生，狭披针形，长5 IO厘米，宽 1. 2 1. 5厘米，先端长渐尖，基部阔楔形，全缘；叶柄长3 6毫米，叶鞘抱茎。花紫色，杂 性，为顶生的圆锥花序，雄花多数，生于花序的上部；萼片3，披针状卵形；花瓣线形，与萼等 长；雄蕊6，基部有须毛；雌花少数，生于花序的基部，大于雄花，包藏于佛焰苞状的叶腋内， 有不发育雄蕊3 ;子房圆柱状，花柱圆柱状，柱头3裂。蒴果纸质，椭圆球形3瓣裂。种子5 7粒，近多角形，淡棕色，排成2裂。生长于山坡阴湿处。分布云南、广西和湖南。珊瑚草具 有调和气血，止痛，治疗月经不调，神经性头痛以及便秘，有排毒等功效。以前采用分株进行 繁殖的方法， 一棵珊瑚草一年只能繁殖出6 8棵，因其繁殖系数低，远不能满足市场的需 要。因此，目前珊瑚草的繁殖方法大多采用组织培养法，它是一种利用植物细胞的全能性，离体培养植物组织小块，进行植物无性快繁的工厂化育苗技术，具体工艺是切下珊瑚草的幼嫩叶片，先诱导出愈伤组织，再分化出不定芽，再培育成可以移栽驯化的壮苗。 一般情况 下此过程需要四个月以上，而且需要较高的生产成本(包括培养基成本和培养条件耗费)等，所以现有的珊瑚草种苗繁殖技术仍存在以下缺陷繁殖速度较慢，成本较高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种繁殖速度快、成本 低的珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法。本专利技术所采用的技术方案是本专利技术包括以下步骤 (a)芽的诱导和分化步骤取珊瑚草的嫩叶作为外植体，将所述外植体加入培养 基进行芽分化培养，所述培养基为加有0. 5 1. 5mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)和0. 05 0. 15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培养基，培养温度为24 26度，光照强度为 1800 20001ux，光照时间为每天10 14小时; (b)无菌苗的增殖培养步骤取所述分化芽置于0. 3 lmg/L的6_苄氨基嘌呤 (6BA)，糖为3%的MS培养基中增殖培养，分化出增殖苗，培养温度为24 26度，光照强度 为2000 30001ux，光照时间为每天10 14小时； (c)无菌苗的驯化移栽步骤将所述增殖苗置于培养基中进行生根培养，形成小 植株，可进行移栽驯化，培养基为0. 8 1. 5mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3%的MS培养基， 培养温度为18 28度，弱光条件。 所述外植体来源于开放带菌环境的活体植物，需经消毒处理在作为外植体，消毒 处理是指所述活体植物先用75%的酒精处理，再在0. 1%的升汞溶液中浸泡后取出，然后 用无菌水冲洗。3 所述酒精处理时间为8 12秒，所述升汞溶液浸泡时间为8 12分钟，所述无菌 水冲洗4 5次。 本专利技术的有益效果是本专利技术采用加有0. 5 1. 5mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)和 0.05 0. 15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培养基，所以可以有效促进珊瑚草 叶片快速分化出不定芽；又由于本专利技术采用0. 3 lmg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)，糖为3% 的MS培养基中增殖培养，所以不定芽能旺盛增殖；最后增殖苗置于0. 8 1. 5mg/L的3吲 哚丁酸(3IBA)，糖3X的MS培养基中培养，所以增殖苗四周即可快速生根。本专利技术通过直 接诱导出分化芽，分化芽又直接快速增殖减少了愈伤组织的诱导这一步骤，简化培养条件 或培养方式等工艺，可以降低生产成本，提高商品化生产的效率和利润，因此本专利技术珊瑚草 种苗组织培养的繁殖方法繁殖速度快，成本低。具体实施方式 实施例一( — )芽的诱导和分化步骤取珊瑚草刚展开一天的嫩叶作为外植体；将所述叶片 先用75 %的酒精处理8秒，再在0. 1 %的升汞溶液中浸泡8分钟取出，然后用无菌水冲洗 4 5次；取经升汞消毒后的所述叶片切成lcm的小块，放入加有0. 5mg/L的6苄氨基嘌呤 (6BA)和0. 05mg/L的2， 4- 二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培养基中，所述叶片放入培养基中 时保持叶片切块的叶面向上；培养温度为24 26度，光照18001ux，光照时间每天10小时， 培养6周后，可见叶片切口处分化出不定芽。 (二)无菌苗的增殖培养取分化芽置于0.3mg/L的6苄氨基嘌呤(6BA)，糖为 3X的MS培养基中，培养四周后，每个分化芽可多分化出3 4个新的植株；培养温度要求 24 26度，光照20001ux，每天光照10小时。(三)无菌苗的驯化移栽所述增殖苗置于0.8mg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖 3X的MS培养基中培养四周后，无菌苗长出1.5cm的根后，可进行移栽驯化；栽前4天打 开瓶盖使无菌苗逐步适应外界条件；洗净所述无菌苗根部培养基并移栽入泥炭土和珍珠 岩比例为4 : 1的基质内；保持温度为18 28度，弱光条件，移栽后的第一周用无纺布 覆盖，控制湿度85 95%，保持叶表面水雾不干。MS培养基组成元素包括大量元素、微 量元素、有机成分，大量元素NH4N03 1650mg/L、 KN03 1900mg/L、 CaC12 2H20 440mg/L、 MgS04 7H20370mg/L、KH2P04 1700mg/L。 微量元素KI 0. 83mg/L、 H3B03 6. 2mg/L、 MnS04 4H20 22. 3mg/L、 ZnS04 7H20 8. 6mg/L、Na2Mn04 2H20 0. 25mg/L、CuS04 5H20 0. 025mg/L、CoC12 6H20 0. 025mg/L、Fe S04 7H20(27. 8)+Na2-EDTA 2H20 (37. 3)mg/L。有机成分肌醇100mg/L、烟酸0. 5mg/L、盐酸吡哆醇(维生素B6) 0. 5mg/L、盐酸硫 胺素(维生素Bl)O. 5mg/L、甘氨酸2mg/L。 实施例二( — )芽的诱导和分化步骤取珊瑚草刚展开两天的嫩叶作为外植体；将所述叶片 先用75%的酒精处理IO秒，再在O. 1%的升汞溶液中浸泡IO分钟取出，然后用无菌水冲 洗4 5次；取经升汞消毒后的所述叶片切成lcm的小块，放入加有lmg/L的6苄氨基嘌呤 (6BA)和O. lmg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D)的MS培养基中，所述叶片放入培养基中时保持叶片切块的叶面向上；培养温度为24 26度，光照20001ux，光照时间每天12小时， 培养4周后，可见叶片切口处分化出不定芽。 ( 二 )无菌苗的增殖培养取分化芽置于lmg/L的6苄氨基嘌呤(6BA)，糖为3%的 MS培养基中，培养四周后，每个分化芽可多分化出3 4个新的植株；培养温度要求24 26度，光照30001ux，每天光照10小时。(三)无菌苗的驯化移栽所述增殖苗置于lmg/L的3吲哚丁酸(3IBA)，糖3X的 MS培养基中培养四周后，无菌苗长出1. 5cm的根后，可进行移栽驯化；栽前4天打开瓶盖 使无菌苗逐步适应外界条件；洗净所述无菌苗根部培养基并移栽入泥炭土和珍珠岩比例为 4 : 1的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法，其特征在于：该繁殖方法包括以下步骤：　　　　（ａ）芽的诱导和分化步骤：取珊瑚草的嫩叶作为外植体，将所述外植体加入培养基进行芽分化培养，所述培养基为加有０．５～１．５ｍｇ／Ｌ的６－苄氨基嘌呤（６ＢＡ）和０．０５～０．１５ｍｇ／Ｌ的２，４－二氯苯氧乙酸（２，４－Ｄ）的ＭＳ培养基，培养温度为２４～２６度，光照强度为１８００～２０００ｌｕｘ，光照时间为每天１０～１４小时，培养４～６周后，可见叶片切口处分化出不定芽；　　　　（ｂ）无菌苗的增殖培养步骤：取所述分化芽置于０．３～１ｍｇ／Ｌ的６－苄氨基嘌呤（６ＢＡ），糖为３％的ＭＳ培养基中增殖培养，分化出增殖苗，培养温度为２４～２６度，光照强度为２０００～３０００ｌｕｘ，光照时间为每天１０～１４小时；　　　　（ｃ）无菌苗的驯化移栽步骤：将所述增殖苗置于培养基中进行生根培养，形成小植株，可进行移栽驯化，培养基为０．８～１．５ｍｇ／Ｌ的３吲哚丁酸（３ＩＢＡ），糖３％的ＭＳ培养基，培养温度为１８～２８度，弱光条件。

【技术特征摘要】
一种珊瑚草种苗组织培养的繁殖方法，其特征在于该繁殖方法包括以下步骤(a)芽的诱导和分化步骤取珊瑚草的嫩叶作为外植体，将所述外植体加入培养基进行芽分化培养，所述培养基为加有0.5～1.5mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)和0.05～0.15mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)的MS培养基，培养温度为24～26度，光照强度为1800～2000lux，光照时间为每天10～14小时，培养4～6周后，可见叶片切口处分化出不定芽；(b)无菌苗的增殖培养步骤取所述分化芽置于0.3～1mg/L的6-苄氨基嘌呤(6BA)，糖为3％的MS培养基中增殖培养，分化出增殖苗，培养温度为24～26度，光照强度为2000～3000lux，光照时...

【专利技术属性】
技术研发人员：金剑平，徐红，文方德，姚慧芬，巫仕荣，黄皑冰，
申请(专利权)人：珠海市园艺研究所，珠海诺德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]