【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及一种提高nk细胞杀伤力的培养液及方法和应用。
技术介绍
1、 nk细胞过继性免疫疗法是肿瘤生物免疫治疗的一种，其原理是应用现代生物医学技术，对人体nk细胞在体外进行活化与扩增培养后回输，调整和激发机体抗肿瘤的免疫系统，从而杀伤肿瘤细胞。同时，nk细胞过继免疫疗法对病毒或细菌感染、免疫调节相关疾病以及抗衰老也有一定疗效。目前，nk细胞疗法是一种新兴的癌症治疗方法，主要通过利用天然nk细胞来攻击癌细胞。这种疗法相对于传统的放化疗具有一定的优势，如选择性杀伤癌细胞、免疫活性强、毒副作用小等。
2、现有nk细胞疗法的主要步骤包括：1.nk细胞的采集：从患者体内或捐献者体内采集nk细胞；2.nk细胞的扩增与激活：通过体外培养等技术，使nk细胞得以扩增和激活，增强其抗癌能力；3.注射或输注：将处理后的nk细胞重新输入到患者体内；4.跟踪观察：密切监测疗效和可能的副作用。
3、目前，nk细胞疗法是一种新兴的免疫治疗方法，被广泛应用于治疗癌症。nk细胞具有杀伤肿瘤细胞的能力，可通过活化和扩增nk细胞，使其具有更强的抗肿瘤活性。在治疗过程中，可以采集患者自身的nk细胞，也可以使用供体的nk细胞进行移植。此外，研究人员还在不断改进nk细胞疗法，以提高治疗效果并降低患者的不良反应。总的来说，nk细胞疗法对于治疗癌症具有巨大的潜力，为临床治疗带来了新的希望。
4、目前细胞免疫治疗多以t细胞为主，nk细胞含量低，临床疗效有待提高。其主要原因是nk细胞的培养工艺和培养基生产技术有待突破，因
技术实现思路
1、为此，本专利技术提供一种提高nk细胞杀伤力的培养液及方法和应用，以解决上述的问题。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、根据本专利技术第一方面提供的一种提高nk细胞杀伤力的培养液，所述培养液包括nk基础培养液和诱导药物，其中，诱导药物包括维生素c、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、谷胱甘肽、异荭草苷、白介素-9、白介素-13和白介素-18。
4、进一步的，所述诱导药物包括维生素c 0.01-0.1μl/ml、碱性成纤维细胞生长因子0.3-1.0μl/ml、肝细胞生长因子0.2-0.8μl/ml、谷胱甘肽0.01-0.1μl/ml、异荭草苷0.4-1.0μl/ml、白介素-9 0.2-0.8μl/ml、白介素-18 0.01-0.8μl/ml和白介素-13 0.2-0.8μl/ml。
5、进一步的，所述诱导药物包括维生素c 0.01μl/ml、碱性成纤维细胞生长因子0.3μl/ml、肝细胞生长因子0.2μl/ml、谷胱甘肽0.01μl/ml、异荭草苷0.4μl/ml、白介素-9 0.2μl/ml、白介素-18 0.01μl/ml和白介素-13 0.2μl/ml。
6、各诱导药物的作用：
7、维生素c：是一种强效的抗氧化剂，可以中和自由基并促进胶原蛋白的合成。同时维生素c可通过抑制nfkβ的信号激活参与炎症发生、肿瘤形成、细胞凋亡等生物学过程。
8、bfgf(碱性成纤维细胞生长因子)：碱性成纤维细胞生长因子能够促进细胞的生长、修复并补充营养。
9、hgf(肝细胞生长因子)：可促进组织细胞的发生、生存和再生，抑制细胞凋亡。hgf能够抑制高糖环境下内皮细胞的程序性死亡（凋亡），促进血管内皮细胞再修复。也可以调节胶原纤维的合成和炎性反应，在促进创伤愈合与防治组织纤维化中起重要的作用。
10、谷胱甘肽：是一种天然的抗氧化剂，存在于细胞内，可以中和自由基并帮助排毒。
11、异荭草苷：黄芩苷（baicalin）是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有显著的生物活性，具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用，并且具有较强的抗癌反应等生理效能。在临床医学已占有重要地位。抗病原体作用：黄芩苷抗菌范围较广，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌作用较强。
12、白介素-9(il-9)：il-9的主要功能包括调节b细胞的生长和分化、增强ctl、nk细胞的杀伤效应、刺激造血干细胞增生分化、促进肝细胞合成急性相蛋白等。
13、白介素-13(il-13)：il-13可诱导单核细胞分化，增强其mhcⅱ类分子的表达；抑制lps诱导的单核因子分泌，控制炎症反应；诱导b细胞增殖及合成ige类抗体，增强b细胞表面mhcⅱ类分子、cd23及cd72的表达；协同il-2刺激nk细胞产生ifn，从而促进单核－巨噬细胞活化和th1型细胞免疫反应。最近还发现，il-13还具有抑制hiv-1在巨噬细胞内复制，诱导中性粒细胞中il-1ra基因表达和蛋白质合成等多种功能。
14、白介素-18(il-18)：ifn-γ具有抗病毒，抗肿瘤和免疫调控的作用。它可以调控30个基因的表达水平，产生多种的细胞反应。可促进nk细胞活性。同时ifn-γ是一种由t淋巴细胞和自然杀伤细胞产生的细胞因子，它在抗病毒、抗细胞内寄生虫和抗肿瘤免疫中发挥着重要作用。ifn-γ可以增强巨噬细胞和自然杀伤细胞的杀伤作用，促进抗原提呈细胞的抗原提呈功能，调节t细胞的免疫应答等。因此，ifn-γ的正常水平对于机体的免疫功能维持至关重要。
15、重组人白介素2（il-2）：il-2是一个多功能的细胞因子。淋巴因子激活的拉克(lak)细胞接收信号诱导，b淋巴细胞增殖速度加快，从而促进抗体分泌，自噬细胞的活跃性增加，在临床上具有抗病毒、提高免疫力、抗肿瘤等药理作用。
16、进一步的，所述nk基础培养液为nk培养液rpmi-1640。
17、根据本专利技术第二方面提供的一种提高nk细胞杀伤力的培养方法，采用如上所述的培养液对nk细胞进行诱导培养。
18、进一步的，所述方法包括：用nk基础培养液重悬外周血单个核细胞后加入已灭活的自体血浆和重组人il-2以及诱导药物于培养瓶中，置于培养箱中培养，后续定期补充nk基础培养液和重组人il-2，培养结束后得到nk细胞能够提高其杀伤力。
19、进一步的，所述nk基础培养液为nk培养液rpmi-1640。
20、根据本专利技术第三方面提供的如上所述的培养液在制备抗肿瘤药物中的应用。
21、根据本专利技术第四方面提供的如上所述的制备方法在制备抗肿瘤药物中的应用。
22、本专利技术具有如下优点：
23、1、本专利技术的培养液中添加有多种生物因子，可以高效扩增和活化nk细胞，从而获得大量以nk细胞为主的高活性免疫细胞，在抗肿瘤及其相关疾病的治疗中有显著疗效。
24、2、本专利技术所述的nk细胞的培养方法安全稳定，所需时间较短，大大提高了nk细胞培养周期，有利于大规模生产。
25、3、使用本专利技术的方法获得的nk细胞，具有较强的体外杀伤能力，且其体内抗癌效果明显高于单独注射il-2或重组人cd73蛋白后的动物模型中的存本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种提高NK细胞杀伤力的培养液，其特征在于，所述培养液包括NK基础培养液和诱导药物，其中，诱导药物包括维生素C、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、谷胱甘肽、异荭草苷、白介素-9、白介素-13和白介素-18。
2.根据权利要求1所述的一种提高NK细胞杀伤力的培养液，其特征在于，所述诱导药物包括维生素C 0.01-0.1μL/ml、碱性成纤维细胞生长因子0.3-1.0μL/ml、肝细胞生长因子0.2-0.8μL/ml、谷胱甘肽0.01-0.1μL/ml、异荭草苷0.4-1.0μL/ml、白介素-9 0.2-0.8μL/ml、白介素-18 0.01-0.8μL/ml和白介素-13 0.2-0.8μL/ml。
3.根据权利要求2所述的一种提高NK细胞杀伤力的培养液，其特征在于，所述诱导药物包括维生素C 0.01μL/ml、碱性成纤维细胞生长因子0.3μL/ml、肝细胞生长因子0.2μL/ml、谷胱甘肽0.01μL/ml、异荭草苷0.4μL/ml、白介素-9 0.2μL/ml、白介素-18 0.01μL/ml和白介素-13 0.2μL/ml。
5.一种提高NK细胞杀伤力的培养方法，其特征在于，采用权利要求1-4任一所述的培养液对NK细胞进行诱导培养。
6.根据权利要求5所述的一种提高NK细胞杀伤力的培养方法，其特征在于，所述方法包括：用NK基础培养液重悬外周血单个核细胞后加入已灭活的自体血浆和重组人IL-2以及诱导药物于培养瓶中，置于培养箱中培养，后续定期补充NK基础培养液和重组人IL-2，培养结束后得到NK细胞能够提高其杀伤力。
7.根据权利要求5所述的一种提高NK细胞杀伤力的培养方法，其特征在于，所述NK基础培养液为NK培养液RPMI-1640。
8.权利要求5所述的提高NK细胞杀伤力的培养方法在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.权利要求1所述的培养液在制备抗肿瘤药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种提高nk细胞杀伤力的培养液，其特征在于，所述培养液包括nk基础培养液和诱导药物，其中，诱导药物包括维生素c、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、谷胱甘肽、异荭草苷、白介素-9、白介素-13和白介素-18。
2.根据权利要求1所述的一种提高nk细胞杀伤力的培养液，其特征在于，所述诱导药物包括维生素c 0.01-0.1μl/ml、碱性成纤维细胞生长因子0.3-1.0μl/ml、肝细胞生长因子0.2-0.8μl/ml、谷胱甘肽0.01-0.1μl/ml、异荭草苷0.4-1.0μl/ml、白介素-9 0.2-0.8μl/ml、白介素-18 0.01-0.8μl/ml和白介素-13 0.2-0.8μl/ml。
3.根据权利要求2所述的一种提高nk细胞杀伤力的培养液，其特征在于，所述诱导药物包括维生素c 0.01μl/ml、碱性成纤维细胞生长因子0.3μl/ml、肝细胞生长因子0.2μl/ml、谷胱甘肽0.01μl/ml、异荭草苷0.4μl/ml、白介素-9 0.2μl/m...
【专利技术属性】
技术研发人员：何子，李娜，安文豪，周慧，王培申，石金平，刘杰，
申请(专利权)人：北京益华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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