【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于检查受试体有无罹患食道癌的、包含能够与特定的mirna特异性结合的核酸的食道癌的检测用试剂盒或装置、以及包含使用该核酸来测定该mirna的表达量的食道癌的检测方法。
技术介绍
1、食道是从口向胃输送食物的管状的脏器，位于气管与脊骨之间。食道的壁从内侧向外侧分为粘膜、粘膜下层、固有肌层、外膜这4层，分别承担用于将食物从口向胃输送的功能(非专利文献1)。根据国立研究开发法人国立癌症研究中心癌症对策信息中心所公开的2012年的日本国内各部位癌症的统计，由食道癌引起的死亡人数上升至11,592人，是各部位癌症死亡原因的第10位。此外，在日本由食道癌引起的死亡风险，男性比女性高5.6倍，此外，吸烟、饮酒被认为是食道癌的风险因素(非专利文献1)。此外，在美国，据说对于男性而言，125人中1人患有食道癌，对于女性而言，435人中1人患有食道癌，2014年推定的食道癌罹患者数也上升至18,170人，其中认为约15,450人死亡(非专利文献1)。
2、食道癌的进行度在非专利文献2中规定，根据肿瘤的大小(tis、t1～3和t4a～b)、淋巴节转移(n1～3)、远处转移(m0～1)等被分为0期(tis/n0/m0)、ia期(t1/n0/m0)、ib期(t2/n0/m0)、iia期(t3/n0/m0)、iib期(t1～2/n1/m0)、iiia期(t4a/n0/m0、t3/n1/m0和t1～2/n2/m0)、iiib期(t3/n2/m0)、iiic期(t4a/n1～2/m0、t4b/m0和n3/m0)和iv期(m1)。p>
3、食道癌的5年相对生存率大幅取决于癌症的进行度，报告了限于食道组织的癌症为39％，止于相邻组织的癌症为21％，远处转移了的癌症为4％(非专利文献1)。因此，早期发现食道癌与生存率的大幅提高有关系，因而强烈期望提供能够早期发现的手段。
4、食道癌的治疗法由癌症的进行度和全身状态来确定，主要有内窥镜治疗、手术、放射线治疗和抗癌剂。对于以一定程度进行了的癌症而言，进行将这些治疗进行组合用于一边发挥各自的特征一边显示出协同效果的综合治疗(非专利文献1)。此外，对于0期、1期等早期的食道癌而言，有时可以应用对患者负担少的内窥镜治疗、光动力学治疗(非专利文献1)。
5、根据非专利文献1，食道癌的一般的检查是利用x射线进行的食道造影检查和内窥镜检查。此外为了观察癌症的扩张状态，进行ct检查、mri检查、内窥镜超声波检查、超声波检查等。在以这些1次检查得出怀疑是食道癌的意见的情况下，作为2次检查，实施向病变处刺入针而采集细胞、组织，用显微镜进行研究的病理检查。此外，用于检测食道癌的血中肿瘤标志物中，例如，cea、scc等是已知的(非专利文献3)。
6、虽然是研究阶段，但如专利文献1所示那样，有下述报告：通过以血液为代表的生物体样品中的微小rna(mirna)的表达量、或通过将mirna的表达量与其它蛋白质标志物的表达量进行组合，从而检测食道癌。
7、专利文献1中示出了测定血清中的mir-663a、mir-92a-3p、mir-575等mirna来检测食道癌的方法。
8、现有技术文献
9、专利文献
10、专利文献1：美国专利申请公开第2014/031246号说明书
11、非专利文献
12、非专利文献1：american cancer society“esophagus cancer”，2014年监修，p.2～8，19～20，29～41
13、非专利文献2：sobin，l.等，“tnm classification ofmalignant tumours第7版日本语版”2009年，p.63～68
14、非专利文献3：terada，t.等，2013年，international journal of clinical andexperimental medicine，第6(3)卷，p.219-26
技术实现思路
1、专利技术所要解决的课题
2、本专利技术的课题在于，发现新的食道癌肿瘤标志物，提供可以使用能够与该标志物特异性结合的核酸而有效地检测食道癌的方法。
3、如非专利文献1所记载的那样，食道癌的一般的检查是利用x射线进行的食道造影检查和内窥镜检查。然而，在通常的检诊中，胃癌的检查被视为重点，往往未充分地观察食道。此外，即使在这些检查普及了的今天，日本国的由食道癌引起的死亡数也日趋增加，可以说图像诊断未必可以抑制食道癌。此外，ct检查、mri检查虽然能够高性能地检测食道癌，但需要特殊的装置，检查费用也高昂，因此不适于作为一次检查进行广泛普及。
4、用于食道癌检测的血中肿瘤标志物中，例如，cea、scc等是已知的(非专利文献3)，但这些标志物即使是食道癌以外的癌症也上升等，有准确度上的问题，因此其有用性未被确立。如果通过使用这些标志物，将其它癌症误诊为食道癌的情况下，则错过了适当的治疗时机，或由于采用错误的医疗，而对患者强加不需要的经济上、体力上的负担。因此，美国癌症协会的食道癌的指南中也没有关于这些标志物的记载(非专利文献1)。
5、此外，虽然是研究阶段，使用以血液为代表的生物体样品中的微小rna(mirna)的表达量来判别食道癌这样的报告如下述，但都未实用化。
6、专利文献1中示出了测定血清中的mir-663a、mir-92a-3p、mir-575等mirna，检测食道癌的方法。具体而言，列出与健康者12名相比，在食道癌患者16名的血清中变化的mirna表，测定该mirna的表达量，判别是否是食道癌。然而，本检测法完全没有关于判别食道癌的具体的准确度、敏感度、特异度等检测性能的实施例和记载，缺乏产业的实用性。唯一被验证了的hsa-mir-345的auc为0.814，也有单独时难以判别食道癌的记载。
7、这样，在食道癌的检测中，现有的肿瘤标志物其性能低，或对于研究阶段的标志物，性能、检测的方法未具体地示出，因此在利用了它们的情况下，有下述可能性：由于将健康体误检测为食道癌患者而实施无益的追加检查、由于看漏食道癌患者而丧失治疗机会。此外，测定数十个～数百个mirna使检查费用增大，因此难以用于健康诊断那样的大规模的筛选。进一步，为了测定肿瘤标志物而采集食道组织，这给患者带来的侵袭性高，不优选，因此需要下述食道癌标志物：能够从可以低侵袭地采集的血液中检测，并且可以正确地将食道癌患者判别为食道癌患者、将健康体判别为健康体的准确度高的食道癌标志物。特别是，食道癌通过早期发现并治疗，从而可以大幅度提高生存率，此外即使在治疗选择上也能够应用对患者负担少的内窥镜治疗、光动力学治疗，因此迫切期望即使对于进行度低的食道癌也能够检测出的敏感度高的食道癌标志物。
8、用于解决课题的方法
9、本专利技术人等为了解决上述课题而进行了深入研究，结果从血液中找到了能够用于食道癌的检测标志物的多个基因，并且发现通过使本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.能够与作为食道癌标志物的选自miR-615-5p、miR-1247-3p、miR-6875-5p、miR-6726-5p、miR-3188、miR-8069、miR-4257、miR-1343-3p、miR-7108-5p、miR-6825-5p、miR-7641、miR-3185、miR-4746-3p、miR-6791-5p、miR-6893-5p、miR-4433b-3p、miR-3135b、miR-6781-5p、miR-1908-5p、miR-4792、miR-7845-5p、miR-4417、miR-3184-5p、miR-1225-5p、miR-1231、miR-1225-3p、miR-150-3p、miR-4433-3p、miR-6125、miR-4513、miR-6787-5p、miR-6784-5p、miR--6765-3p、miR-5572、miR-6842-5p、miR-8063、miR-6780b-5p、miR-187-5p、miR-128-1-5p、miR-6729-5p、miR-6741-5p、miR-6757-5p、miR-7110-5p、mi...
【技术特征摘要】
1.能够与作为食道癌标志物的选自mir-615-5p、mir-1247-3p、mir-6875-5p、mir-6726-5p、mir-3188、mir-8069、mir-4257、mir-1343-3p、mir-7108-5p、mir-6825-5p、mir-7641、mir-3185、mir-4746-3p、mir-6791-5p、mir-6893-5p、mir-4433b-3p、mir-3135b、mir-6781-5p、mir-1908-5p、mir-4792、mir-7845-5p、mir-4417、mir-3184-5p、mir-1225-5p、mir-1231、mir-1225-3p、mir-150-3p、mir-4433-3p、mir-6125、mir-4513、mir-6787-5p、mir-6784-5p、mir--6765-3p、mir-5572、mir-6842-5p、mir-8063、mir-6780b-5p、mir-187-5p、mir-128-1-5p、mir-6729-5p、mir-6741-5p、mir-6757-5p、mir-7110-5p、mir-7975、mir-1233-5p、mir-6845-5p、mir-3937、mir-4467、mir-7109-5p、mir-6088、mir-6782-5p、mir-5195-3p、mir-4454、mir-6724-5p、mir-8072、mir-4516、mir-6756-5p、mir-4665-3p、mir-6826-5p、mir-6820-5p、mir-6887-5p、mir-3679-5p、mir-7847-3p、mir-6721-5p、mir-3622a-5p、mir-939-5p、mir-602、mir-7977、mir-6749-5p、mir-1914-3p、mir-4651、mir-4695-5p、mir-6848-5p、mir-1228-3p、mir-642b-3p、mir-6746-5p、mir-3620-5p、mir-3131、mir-6732-5p、mir-7113-3p、mir-23a-3p、mir-3154、mir-4723-5p、mir-3663-3p、mir-4734、mir-6816-5p、mir-4442、mir-4476、mir-423-5p、mir-1249、mir-6515-3p、mir-887-3p、mir-4741、mir-6766-3p、mir-4673、mir-6779-5p、mir-4706、mir-1268b、mir-4632-5p、mir-3197、mir-6798-5p、mir-711、mir-6840-3p、mir-6763-5p、mir-6727-5p、mir-371a-5p、mir-6824-5p、mir-4648、mir-1227-5p、mir-564、mir-3679-3p、mir-2861、mir-6737-5p、mir-4725-3p、mir-6716-5p、mir-4675、mir-1915-3p、mir-671-5p、mir-3656、mir-6722-3p、mir-4707-5p、mir-4449、mir-1202、mir-4649-5p、mir-744-5p、mir-642a-3p、mir-451a、mir-6870-5p、mir-4443、mir-6808-5p、mir-4728-5p、mir-937-5p、mir-135a-3p、mir-663b、mir-1343-5p、mir-6822-5p、mir-6803-5p、mir-6805-3p、mir-128-2-5p、mir-4640-5p、mir-1469、mir-92a-2-5p、mir-3940-5p、mir-4281、mir-1260b、mir-4758-5p、mir-1915-5p、mir-5001-5p、mir-4286、mir-6126、mir-6789-5p、mir-4459、mir-1268a、mir-6752-5p、mir-6131、mir-6800-5p、mir-4532、mir-6872-3p、mir-718、mir-6769a-5p、mir-4707-3p、mir-6765-5p、mir-4739、mir-4525、mir-4270、mir-4534、mir-6785-5p、mir-6850-5p、mir-4697-5p、mir-1260a、mir-4486、mir-6880-5p、mir-6802-5p、mir-6861-5p、mir-92b-5p、mir-1238-5p、mir-6851-5p、mir-7704、mir-149-3p、mir-4689、mir-4688、mir-125a-3p、mir-23b-3p、mir-614、mir-1913、mir-16-5p、mir-6717-5p、mir-3648、mir-3162-5p、mir-1909-3p、mir-8073、mir-6769b-5p、mir-6836-3p、mir-4484、mir-6819-5p和mir-6794-5p中的至少1个多核苷酸特异性结合的核酸的用途，用于制备食道癌的检测用试剂盒。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，mir-615-5p为hsa-mir-615-5p，mir-1247-3p为hsa-mir-1247-3p，mir-6875-5p为hsa-mir-6875-5p，mir-6726-5p为hsa-mir-6726-5p，mir-3188为hsa-mir-3188，mir-8069为hsa-mir-8069，mir-4257为hsa-mir-4257，mir-1343-3p为hsa-mir-1343-3p，mir-7108-5p为hsa-mir-7108-5p，mir-6825-5p为hsa-mir-6825-5p，mir-7641为hsa-mir-7641，mir-3185为hsa-mir-3185，mir-4746-3p为hsa-mir-4746-3p，mir-6791-5p为hsa-mir-6791-5p，mir-6893-5p为hsa-mir-6893-5p，mir-4433b-3p为hsa-mir-4433b-3p，mir-3135b为hsa-mir-3135b，mir-6781-5p为hsa-mir-6781-5p，mir-1908-5p为hsa-mir-1908-5p，mir-4792为hsa-mir-4792，mir-7845-5p为hsa-mir-7845-5p，mir-4417为hsa-mir-4417，mir-3184-5p为hsa-mir-3184-5p，mir-1225-5p为hsa-mir-1225-5p，mir-1231为hsa-mir-1231，mir-1225-3p为hsa-mir-1225-3p，mir-150-3p为hsa-mir-150-3p，mir-4433-3p为hsa-mir-4433-3p，mir-6125为hsa-mir-6125，mir-4513为hsa-mir-4513，mir-6787-5p为hsa-mir-6787-5p，mir-6784-5p为hsa-mir-6784-5p，mir-6765-3p为hsa-mir-6765-3p，mir-5572为hsa-mir-5572，mir-6842-5p为hsa-mir-6842-5p，mir-8063为hsa-mir-8063，mir-6780b-5p为hsa-mir-6780b-5p，mir-187-5p为hsa-mir-187-5p，mir-128-1-5p为hsa-mir-128-1-5p，mir-6729-5p为hsa-mir-6729-5p，mir-6741-5p为hsa-mir-6741-5p，mir-6757-5p为hsa-mir-6757-5p，mir-7110-5p为hsa-mir-7110-5p，mir-7975为hsa-mir-7975，mir-1233-5p为hsa-mir-1233-5p，mir-6845-5p为hsa-mir-6845-5p，mir-3937为hsa-mir-3937，mir-4467为hsa-mir-4467，mir-7109-5p为hsa-mir-7109-5p，mir-6088为hsa-mir-6088，mir-6782-5p为hsa-mir-6782-5p，mir-5195-3p为hsa-mir-5195-3p，mir-4454为hsa-mir-4454，mir-6724-5p为hsa-mir-6724-5p，mir-8072为hsa-mir-8072，mir-4516为hsa-mir-4516，mir-6756-5p为hsa-mir-6756-5p，mir-4665-3p为hsa-mir-4665-3p，mir-6826-5p为hsa-mir-6826-5p，mir-6820-5p为hsa-mir-6820-5p，mir-6887-5p为hsa-mir-6887-5p，mir-3679-5p为hsa-mir-3679-5p，mir-7847-3p为hsa-mir-7847-3p，mir-6721-5p为hsa-mir-6721-5p，mir-3622a-5p为hsa-mir-3622a-5p，mir-939-5p为hsa-mir-939-5p，mir-602为hsa-mir-602，mir-7977为hsa-mir-7977，mir-6749-5p为hsa-mir-6749-5p，mir-1914-3p为hsa-mir-1914-3p，mir-4651为hsa-mir-4651，mir-4695-5p为hsa-mir-4695-5p，mir-6848-5p为hsa-mir-6848-5p，mir-1228-3p为hsa-mir-1228-3p，mir-642b-3p为hsa-mir-642b-3p，mir-6746-5p为hsa-mir-6746-5p，mir-3620-5p为hsa-mir-3620-5p，mir-3131为hsa-mir-3131，mir-6732-5p为hsa-mir-6732-5p，mir-7113-3p为hsa-mir-7113-3p，mir-23a-3p为hsa-mir-23a-3p，mir-3154为hsa-mir-3154，mir-4723-5p为hsa-mir-4723-5p，mir-3663-3p为hsa-mir-3663-3p，mir-4734为hsa-mir-4734，mir-6816-5p为hsa-mir-6816-5p，mir-4442为hsa-mir-4442，mir-4476为hsa-mir-4476，mir-423-5p为hsa-mir-423-5p，mir-1249为hsa-mir-1249，mir-6515-3p为hsa-mir-6515-3p，mir-887-3p为hsa-mir-887-3p，mir-4741为hsa-mir-4741，mir-6766-3p为hsa-mir-6766-3p，mir-4673为hsa-mir-4673，mir-6779-5p为hsa-mir-6779-5p，mir-4706为hsa-mir-4706，mir-1268b为hsa-mir-1268b，mir-4632-5p为hsa-mir-4632-5p，mir-3197为hsa-mir-3197，mir-6798-5p为hsa-mir-6798-5p，mir-711为hsa-mir-711，mir-6840-3p为hsa-mir-6840-3p，mir-6763-5p为hsa-mir-6763-5p，mir-6727-5p为hsa-mir-6727-5p，mir-371a-5p为hsa-mir-371a-5p，mir-6824-5p为hsa-mir-6824-5p，mir-4648为hsa-mir-4648，mir-1227-5p为hsa-mir-1227-5p，mir-564为hsa-mir-564，mir-3679-3p为hsa-mir-3679-3p，mir-2861为hsa-mir-2861，mir-6737-5p为hsa-mir-6737-5p，mir-4725-3p为hsa-mir-4725-3p，mir-6716-5p为hsa-mir-6716-5p，mir-4675为hsa-mir-4675，mir-1915-3p为hsa-mir-1915-3p，mir-671-5p为hsa-mir-671-5p，mir-3656为hsa-mir-3656，mir-6722-3p为hsa-mir-6722-3p，mir-4707-5p为hsa-mir-4707-5p，mir-4449为hsa-mir-4449，mir-1202为hsa-mir-1202，mir-4649-5p为hsa-mir-4649-5p，mir-744-5p为hsa-mir-744-5p，mir-642a-3p为hsa-mir-642a-3p，mir-451a为hsa-mir-451a，mir-6870-5p为hsa-mir-6870-5p，mir-4443为hsa-mir-4443，mir-6808-5p为hsa-mir-6808-5p，mir-4728-5p为hsa-mir-4728-5p，mir-937-5p为hsa-mir-937-5p，mir-135a-3p为hsa-mir-135a-3p，mir-663b为hsa-mir-663b，mir-1343-5p为hsa-mir-1343-5p，mir-6822-5p为hsa-mir-6822-5p，mir-6803-5p为hsa-mir-6803-5p，mir-6805-3p为hsa-mir-6805-3p，mir-128-2-5p为hsa-mir-128-2-5p，mir-4640-5p为hsa-mir-4640-5p，mir-1469为hsa-mir-1469，mir-92a-2-5p为hsa-mir-92a-2-5p，mir-3940-5p为hsa-mir-3940-5p，mir-4281为hsa-mir-4281，mir-1260b为hsa-mir-1260b，mir-4758-5p为hsa-mir-4758-5p，mir-1915-5p为hsa-mir-1915-5p，mir-5001-5p为hsa-mir-5001-5p，mir-4286为hsa-mir-4286，mir-6126为hsa-mir-6126，mir-6789-5p为hsa-mir-6789-5p，mir-4459为hsa-mir-4459，mir-1268a为hsa-mir-1268a，mir-6752-5p为hsa-mir-6752-5p，mir-6131为hsa-mir-6131，mir-6800-5p为hsa-mir-6800-5p，mir-4532为hsa-mir-4532，mir-6872-3p为hsa-mir-6872-3p，mir-718为hsa-mir-718，mir-6769a-5p为hsa-mir-6769a-5p，mir-4707-3p为hsa-mir-4707-3p，mir-6765-5p为hsa-mir-6765-5p，mir-4739为hsa-mir-4739，mir-4525为hsa-mir-4525，mir-4270为hsa-mir-4270，mir-4534为hsa-mir-4534，mir-6785-5p为hsa-mir-6785-5p，mir-6850-5p为hsa-mir-6850-5p，mir-4697-5p为hsa-mir-4697-5p，mir-1260a为hsa-mir-1260a，mir-4486为hsa-mir-4486，mir-6880-5p为hsa-mir-6880-5p，mir-6802-5p为hsa-mir-6802-5p，mir-6861-5p为hsa-mir-6861-5p，mir-92b-5p为hsa-mir-92b-5p，mir-1238-5p为hsa-mir-1238-5p，mir-6851-5p为hsa-mir-6851-5p，mir-7704为hsa-mir-7704，mir-149-3p为hsa-mir-149-3p，mir-4689为hsa-mir-4689，mir-4688为hsa-mir-4688，mir-125a-3p为hsa-mir-125a-3p，mir-23b-3p为hsa-mir-23b-3p，mir-614为hsa-mir-614，mir-1913为hsa-mir-1913，mir-16-5p为hsa-mir-16-5p，mir-6717-5p为hsa-mir-6717-5p，mir-3648为hsa-mir-3648，mir-3162-5p为hsa-mir-3162-5p，mir-1909-3p为hsa-mir-1909-3p，mir-8073为hsa-mir-8073，mir-6769b-5p为hsa-mir-6769b-5p，mir-6836-3p为hsa-mir-6836-3p，mir-4484为hsa-mir-4484，mir-6819-5p为hsa-mir-6819-5p，和mir-6794-5p为hsa-mir-6794-5p。
3.根据权利要求1或2所述的用途，所述核酸为选自下述(a)～(e)所示的多核苷酸中的多核苷酸，
4.根据权利要求1～3的任一项所述的用途，所述试剂盒进一步包含能够与作为其它食道癌标志物的由mir-575、mir-675-5p、mir-486-3p、mir-6777-5p、mir-4497、mir-296-3p、mir-6738-5p、mir-4731-5p、mir-6889-5p、mir-6786-5p、mir-92a-3p、mir-4294、mir-4763-3p、mir-6076、mir-663a、mir-760、mir-4667-5p、mir-6090、mir-4730、mir-7106-5p、mir-3196、mir-5698、mir-6087、mir-4665-5p、mir-8059、mir-6879-5p和mir-24-3p组成的多核苷酸特异性结合的核酸。
5.根据权利要求4所述的用途，其中，mir-575为hsa-mir-575，mir-675-5p为hsa-mir-675-5p，mir-486-3p为hsa-mir-486-3p，mir-6777-5p为hsa-mir-6777-5p，mir-4497为hsa-mir-4497，mir-296-3p为hsa-mir-296-3p，mir-6738-5p为hsa-mir-6738-5p，mir-4731-5p为hsa-mir-4731-5p，mir-6889-5p为hsa-mir-6889-5p，mir-6786-5p为hsa-mir-6786-5p，mir-92a-3p为hsa-mir-92a-3p，mir-4294为hsa-mir-4294，mir-4763-3p为hsa-mir-4763-3p，mir-6076为hsa-mir-6076，mir-663a为hsa-mir-663a，mir-760为hsa-mir-760，mir-4667-5p为hsa-mir-4667-5p，mir-6090为hsa-mir-6090，mir-4730为hsa-mir-4730，mir-7106-5p为hsa-mir-7106-5p，mir-3196为hsa-mir-3196，mir-5698为hsa-mir-5698，mir-6087为hsa-mir-6087，mir-4665-5p为hsa-mir-4665-5p，mir-8059为hsa-mir-8059，mir-6879-5p为hsa-mir-6879-5p，和mir-24-3p为hsa-mir-24-3p。
6.根据权利要求4或5所述的用途，所述核酸为选自下述(f)～(j)所示的多核苷酸中的多核苷酸，
7.能够与作为食道癌标志物的选自mir-615-5p、mir-1247-3p、mir-...
【专利技术属性】
技术研发人员：须藤裕子，信正均，小园聪子，近藤哲司，河内淳平，落合淳志，小岛基宽，
申请(专利权)人：东丽株式会社，
类型：发明
国别省市：
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