【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物发酵合成，具体涉及一种辅酶a的制备方法。
技术介绍
1、辅酶a是由泛酸、腺苷、磷酸及β-巯基乙胺组成，它的主要生物学功能是通过乙酰化反应参与生物体内的糖类、脂质和氨基酸代谢，是生物代谢不可或缺的辅酶。辅酶a的临床作用广泛，包括由代谢混乱造成的脂肪肝、高血脂、心律失常以及白细胞减少症、原发性性紫癜、功能性低热、肝炎等。
2、辅酶a的制备目前大多数厂家均采用微生物发酵合成法,菌种为产氨短杆菌,硕士论文《产氨短杆菌发酵及固定化产氨短杆菌合成辅酶工艺研究》中公开了产氨短杆菌合成辅酶a的原理，首先产氨短杆菌发酵产生5种酶e1、e2、e3、e4、e5,然后在这五种酶的作用下，将泛酸、腺苷一磷酸、半胱氨酸等前体物质,在腺苷三磷酸的参与下进行酶促反应,经过一系列的酶反应,最终合成为辅酶a。由于，酶促反应中的5种酶主要集中在菌体内，较难与前体物质接触，因此需要将菌体进行破碎或者增强菌体胞壁的通透性使得菌体内的酶溶出到反应液中，从而催化前体物质生成辅酶a。由于该5种酶在发酵液中的浓度直接影响辅酶a合成效率，因此在产氨短杆菌合成5种酶的含量一定的情况下，如何将其尽可能溶出到发酵液中，是提升辅酶a合成效率的关键。
3、在现有技术中，虽然通过分离菌体后进行破碎可以最大化的得到其中的5种酶，然而该步骤需要从发酵液中将菌体进行分离，并通过仪器进行破碎，步骤不仅繁琐而且需要分阶段、不连续，因此不适合工业化生产。而cn102321708b公开了通过在发酵结束后直接在发酵液中加入破壁剂苯扎溴铵以及前体物质，实现在发酵液中
技术实现思路
1、为了使产氨短杆菌中的酶尽可能溶出到发酵液中，从而提升酶促反应的效率，本专利技术提供了一种发酵制备辅酶a的方法，包括以下步骤：
2、1)使用好氧的微生物进行发酵；
3、2)在发酵液中通过酶促反应制备辅酶a；
4、所述酶促反应包括：在发酵液中加入酶促反应所需的底物以及破壁剂，随后在无氧或低氧环境下反应。优选地，所述微生物为产氨短杆菌。
5、本领域技术人员可以理解的是，在产氨短杆菌的发酵液中进行酶促反应需要将细菌合成的酶与底物接触进行酶促反应。因此，将合成的酶尽可能的溶出到发酵液中不仅可以提高反应速度也可以提高辅酶a产量。为了溶出酶，采用破壁剂可以对细菌进行杀伤，使其破碎后溶出菌体内的酶，但是这种用化学试剂的方式并不能使菌体全部破碎并溶出里面的酶。然而申请人发现，通过将破壁剂与低氧或无氧的环境相结合的方式，在相同的微生物发酵量下，能够从菌体内溶出更多的酶用于底物的酶促反应，最终得到更多的辅酶a。相比于单独使用破壁剂，本专利技术仅增加了控制低氧或无氧的环境，操作步骤简单。
6、优选地，所述产氨短杆菌，购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号：cicc20102。
7、优选地，所述底物包括：泛酸和/或其盐、半胱氨酸和/或其盐、磷酸腺苷和/或其盐。
8、优选地，所述磷酸腺苷选自单磷酸腺苷、二磷酸腺苷、三磷酸腺苷中的一种或一种以上的组合。
9、优选地，所述底物包括：泛酸钙、半胱氨酸盐酸盐、三磷酸腺苷二钠。
10、优选地，在发酵液中加入酶促反应所需的底物以及破壁剂，混合反应20～24h后在无氧或低氧环境下继续反应。
11、优选地，所述酶促反应中，在无氧或低氧环境下继续反应20～24h。
12、优选地，所述破壁剂为杀菌剂或表面活性剂。
13、优选地，破壁剂选自苯扎溴铵、十二烷基苯磺酸钠之一或其组合。
14、优选地，破壁剂为苯扎溴铵。
15、优选地，按照比例，以每1ml发酵体积加入0.05-0.15g苯扎溴铵，优选为0.1g。
16、优选地，发酵液的od620达80-100后进行酶促反应。
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1.一种发酵制备辅酶A的方法，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
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9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
【技术特征摘要】
1.一种发酵制备辅酶a的方法，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
...【专利技术属性】
技术研发人员：叶世豪，陈辅辰，张恒，陈誉民，邹乐，
申请(专利权)人：湖北美琪健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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