【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，尤其涉及可用于合成galnac修饰寡核苷酸的化合物和galnac修饰寡核苷酸缀合物及其制备方法，主要用于治疗分子向器官、组织、人类或其它哺乳动物细胞的靶向递送。
技术介绍
1、核酸药物是各种具有不同功能的寡聚核糖核苷酸(rna)或寡聚脱氧核糖核苷酸(dna)，可以通过一系列过程(如rna干扰、剪接调节、非编码rna抑制、基因激活和程序化基因编辑等)来调节致病靶基因或者靶mrna表达。理论上，核酸药物具有治疗所有疾病的潜力，因此，其被称为继小分子药物、抗体药物之后现代制药的第三次革命性浪潮之势。
2、随着新型生物药物(包括反义寡核酸药物、小干扰寡核酸药物、mrna疫苗等)的快速开发，小寡核苷酸具有使所有基因转录表达沉默的潜力引起众多药物开发者的关注。功能性小寡核苷酸的发现成为改变遗传学强有力的工具，此小寡核苷酸具有对特定基因选择性沉默或降低致病相关蛋白表达量。由于寡核苷酸序列特异性结合转录基因使其沉默的能力，寡核苷酸成为治疗疾病药物的新型候选物，此疾病包括肿瘤、感染、视网膜黄斑变性疾病、心血管疾病、神经系统紊乱、其它与基因相关疾病。核酸药物具有敲除基因表达的能力，使其成为治疗特定疾病的理想药物候选物，尤其此疾病不具有单克隆药物结合位点或小分子药物结合蛋白阻断位点。
3、核酸药物靶向递送到人体特定部位(如器官、组织、细胞)具有诸多益处，不仅可以增强治疗效率，而且改善活性复合物人体安全性(主要体现在给药剂量和药物清除率)。另外，核酸药物高效递送到人体靶标部位将降低或避免不可预测的副作用，
4、药物与具有特异受体的配体连接作为治疗药物靶向递送到特定部位的方法之一。此配体可选择性识别和结合到靶向细胞膜膜表面受体，通过细胞内吞作用将药物配体化合物递送到细胞内发挥治疗目的。由于寡核苷酸自身无组织靶向性，导致在体内随机分布，不能很好地发挥治疗作用。体内靶向递送核酸药物依然存在诸多挑战，如未修饰核酸药物易被血清核酸酶降解、快速清除、内体逃逸效率和递送材料固有的免疫刺激。因此，本领域急需具有靶向修饰寡核苷酸缀合物，其在提高核酸药物治疗效果及显著降低体内副作用中发挥着重要作用。
5、研究发现去唾液酸糖蛋白受体(asgpr)在肝细胞上高度特异性表达，而在其他细胞中几乎不表达，因此通过肝脏中的asgpr可以将寡核苷酸药物靶向递送至肝细胞。galnac是对asgpr具有高亲和力的一种配体，与寡核苷酸缀合后可以通过asgpr将寡核苷酸药物靶向递送至肝细胞。根据thazha p.prakash等人报道galnac的数量、galnac之间间隔的长度和疏水性等对asgpr的亲和性有很大影响(j.med.chem.2016,59,6,2718-2733)，因此需要合成不同种类的galnac亚磷酰胺单体并且与寡核苷酸缀合后对构效关系进行评价。
6、galnac与寡核苷酸缀合的常规方法是(1)把galnac化合物连接到固相合成载体上，合成寡核苷酸时进行缀合；(2)先合成galnac-核苷亚磷酰胺单体，再与寡核苷酸缀合。
7、常规的方法存在如下缺陷：(1)galnac化合物缀合时只能缀合在寡核苷酸的3’末端，不能在任意位置、以任意数量缀合，并且galnac化合物与寡核苷酸一次性缀合，不能任意调节与galnac之间间隔的长度；(2)galnac-核苷亚磷酰胺单体合成路线长，合成困难。
8、因此，本领域需要一种不同于常规的方法实现galnac与寡核苷酸缀合，避免常规方法的一些缺陷。
技术实现思路
1、对此，本申请提供了新型galnac亚磷酰胺系列化合物，以寡核苷酸亚磷酰胺固相化学合成方法，通过一次或多次与寡核苷酸偶联，可实现寡核苷酸的单galnac或多galnac修饰。在本申请的galnac亚磷酰胺系列化合物中，引入1,2,3-三氮唑结构作为连接链模块，能够提高galnac与asgpr结合的能力。并且通过调节模块中亲水性基团(醚键)的数量，能够快速得到一系列寡核苷酸与galnac之间不同长度和亲水/疏水性组合的galnac修饰化合物。由本申请galnac化合物制备的galnac寡核苷酸缀合物，同现有技术相比，与asgpr的亲和力显著提升，最多可达20％以上。
2、具体如下：
3、本公开的第一方面涉及式(i)化合物或其药学上可接受的盐：
4、
5、其中，r1为氢或羟基保护基；
6、r2为氢、羟基保护基或含磷活性反应基团；
7、l1、l2和l3各自独立地为-(ch2)a-、-(ch2ch2o)b-、-(ch2ch2o)c(ch2)d-、-(ch2)econh(ch2)f-或-(ch2)enhco(ch2)f-，其中a为2-7的整数，优选为3、4或5，b为1-5的整数，c为1-5的整数，d为1-5的整数，优选为2、3或4，e为0-5的整数，优选为0、1、2或3，f为0-5的整数，优选为1、2或3；
8、m为-conh-或-nhco-，优选为-conh-；
9、g为羟基用酰基全保护的n-乙酰-半乳糖胺、羟基用酰基全保护的半乳糖、羟基用酰基全保护的半乳糖胺、羟基用酰基全保护的n-缩甲醛甲酰-半乳糖胺、羟基用酰基全保护的n-丙酰-半乳糖胺、羟基用酰基全保护的n-正丁酰-半乳糖胺和或羟基用酰基全保护的n-异丁酰-半乳糖胺，优选为羟基用酰基全保护的n-乙酰-半乳糖胺，其中酰基为乙酰基、或苯甲酰基，优选为乙酰基。
10、进一步的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中所述羟基保护基为三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4,4’-二甲氧基三苯甲基(dmtr)和4,4’,4’-三甲氧基三苯甲基中的任意一种，优选为4,4’-二甲氧基三苯甲基。
11、进一步的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中r1为4,4’-二甲氧基三苯甲基。
12、进一步的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中r2为
13、进一步的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l1为-conhch2-。
14、进一步的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l1为-(ch2)3conhch2-进一步的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l2为-(ch2ch2o)2(ch2)2-。
15、进一步的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l2为-ch2ch2och2ch2-。
16、进一步的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l2为-(ch2ch2o)4(ch2)2-。
17、进一步的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l3为-(ch2)4-。
18、进一步的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中m为-conh-。
19、进一步的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，为具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐，所述式(i本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
2.根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中所述羟基保护基为三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4,4’-二甲氧基三苯甲基(DMTr)和4,4’,4’-三甲氧基三苯甲基中的任意一种，优选为4,4’-二甲氧基三苯甲基。
3.根据权利要求1或2所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为4,4’-二甲氧基三苯甲基。
4.根据前述权利要求中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为
5.根据前述权利要求中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中L1为-CONHCH2-。
6.根据前述权利要求中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中L1为-(CH2)3CONHCH2-。
7.根据前述权利要求中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中L2为-(CH2CH2O)2(CH2)2-。
8.根据前述权利要求中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中L2为-CH2CH2OCH2CH2-。<...
【技术特征摘要】
1.式(i)化合物或其药学上可接受的盐：
2.根据权利要求1所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中所述羟基保护基为三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4,4’-二甲氧基三苯甲基(dmtr)和4,4’,4’-三甲氧基三苯甲基中的任意一种，优选为4,4’-二甲氧基三苯甲基。
3.根据权利要求1或2所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中r1为4,4’-二甲氧基三苯甲基。
4.根据前述权利要求中任一项所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中r2为
5.根据前述权利要求中任一项所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l1为-conhch2-。
6.根据前述权利要求中任一项所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l1为-(ch2)3conhch2-。
7.根据前述权利要求中任一项所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l2为-(ch2ch2o)2(ch2)2-。
8.根据前述权利要求中任一项所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l2为-ch2ch2och2ch2-。
9.根据前述权利要求中任一项所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l2为-(ch2ch2o)4(ch2)2-。
10.根据前述权利要求中任一项所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中l3为-(ch2)4-。
11.根据前述权利要求中任一项所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其中m为-conh-。
12.根据前述权利要求中任一项所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，为具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐，所述式(i)化合物为具有以下结构的化合物yk-gal-201、yk-gal-202、yk-gal-203、yk-gal-204或yk-gal-205：
13.一种缀合物，其包含寡核苷酸(oligo)和galnac部分，...
【专利技术属性】
技术研发人员：田志康，于飞，黄泽傲，宋更申，余晓文，
申请(专利权)人：北京悦康科创医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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