【技术实现步骤摘要】
本文描述了制造和使用用于转基因表达的诱导型启动子的方法。所述诱导型启动子衍生自nfat-re诱导型系统，并且用于改善或增强t细胞存活和增殖。
技术介绍
1、在t细胞疗法中已使用了许多不同的诱导型启动子。仍持续需要显示出强信号的启动子，并且特别地，显现出对显示出高信噪比并且可反复开启的启动子的需求。
技术实现思路
1、在第一方面，提供了制造诱导型合成启动子文库的方法，其中，所述方法包括：筛选启动子，其中，筛选在car t细胞活化后被活化的启动子，从而产生一组经筛选的启动子；筛选转录因子应答元件，从而产生一组经筛选的转录因子应答元件；制造诱导型合成启动子文库，所述诱导型合成启动子文库包含在转录因子应答元件的car t细胞活化后被活化的启动子；以及合成寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸包含编码经筛选的转录因子应答元件的第一序列以及编码经筛选的启动子的第二序列。
2、在第二方面，提供了诱导型合成启动子。所述诱导型合成启动子包含编码转录因子应答元件的第一序列以及编码启动子序列的第二序列，任选地，其中，所述诱导型合成启动子包含seq id no:1-seq id no:33中的一个或多个。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过嵌合抗原受体活化来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过所述嵌合抗原受体结合至配体来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过与抗cd3/抗cd28抗体相互作用来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过化学物质来诱导。在一些替代方
3、在第三方面，提供了用于分子表达的细胞，其中，所述细胞包含：载体，其中，所述载体包含上述任何替代方式所述的诱导型合成启动子；编码分子的基因；以及编码嵌合抗原受体的序列。所述诱导型合成启动子可包含编码转录因子应答元件的第一序列以及编码启动子序列的第二序列，任选地，其中，所述诱导型合成启动子包含seq id no:1-seq idno:33中的一个或多个。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过嵌合抗原受体活化来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过所述嵌合抗原受体结合至配体来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过与抗cd3/抗cd28抗体相互作用来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过化学物质来诱导。在一些替代方式中，所述化学物质为pma或罗奴霉素。在一些替代方式中，所述启动子包含内源性il2最小启动子序列。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子包含seq id no:1-seq id no:33中任一项所示的序列。在一些替代方式中，所述转录因子应答元件为e2f1、egr1、hif1a、nfat、lef1、sp1、pu.1、nfkb、jun、fos和/或stat4。在一些替代方式中，所述分子为蛋白质、抗体或其结合片段、促增殖分子或可根除肿瘤的分子。在一些替代方式中，所述细胞为造血干细胞。在一些替代方式中，所述嵌合抗原受体对cd19而言是特异性的。在一些替代方式中，所述细胞为cd8+或cd4+。在一些替代方式中，所述分子的表达是可诱导的。在一些替代方式中，所述car包含信号转导结构域(signaling domain)。在一些替代方式中，所述信号转导结构域为1g、2g或3g。在一些替代方式中，所述载体为慢病毒载体、基于转座酶的微环或纳米质粒(nanoplasmid)。在一些替代方式中，所述细胞进一步包含用于car特异性活化的tcr敲除系统。在一些替代方式中，所述分子为嵌合细胞因子受体。在一些替代方式中，所述嵌合细胞因子受体包括ccr、castat5、pd1嵌合体和/或mirna。在一些替代方式中，所述mirna包括mirna155。在一些替代方式中，所述ccr包括cd122、cd127或cd360。在一些替代方式中，所述pd1嵌合体包括pd1:cd28、dnshp1/2和/或il-12。
4、在第四方面，提供了在car t细胞疗法中调节基因表达的方法，所述方法包括：提供本文任一替代方式所述的细胞；以及将所述细胞导入需要car t细胞疗法的受试者中。所述细胞包含：载体，其中，所述载体包含本文任何替代方式所述的诱导型合成启动子；编码分子的基因；以及编码嵌合抗原受体的序列。所述诱导型合成启动子可包含编码转录因子应答元件的第一序列以及编码启动子序列的第二序列，任选地，其中，所述诱导型合成启动子包含seq id no:1-seq id no:33中的一个或多个。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过嵌合抗原受体活化来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过所述嵌合抗原受体结合至配体来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过与抗cd3/抗cd28抗体相互作用来诱导。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子可通过化学物质来诱导。在一些替代方式中，所述化学物质为pma或罗奴霉素。在一些替代方式中，所述启动子包含内源性il2最小启动子序列。在一些替代方式中，所述诱导型合成启动子包含seq id no:1-seq id no:33中任一项所示的序列。在一些替代方式中，所述转录因子应答元件为e2f1、egr1、hif1a、nfat、lef1、sp1、pu.1、nfkb、jun、fos和/或stat4。在一些替代方式中，所述分子为蛋白质、抗体或其结合片段、促增殖分子或可根除肿瘤的分子。在一些替代方式中，所述细胞为造血干细胞。在一些替代方式中，所述嵌合抗原受体对cd19而言是特异性的。在一些替代方式中，所述细胞为cd8+或cd4+。在一些替代方式中，所述分子的表达是可诱导的。在一些替代方式中，所述car包含信号转导结构域。在一些替代方式中，所述信号转导结构域为1g、2g或3g。在一些替代方式中，所述载体为慢病毒载体、基于转座酶的微环或纳米质粒。在一些替代方式中，所述细胞进一步包含用于car特异性活化的tcr敲除系统。在一些替代方式中，所述分子为嵌合细胞因子受体，例如ccr(cd122、cd127和cd360)、castat5和pd1嵌合体(例如pd1:cd28、dnshp1/2、il-12)和/或mirna(例如mirna155)。在一些替代方式中，所述在car t细胞疗法中调节基因表达的方法进一步包括监测所述受试者对在所述诱导型合成启动子的控制下表达的分子的应答。在所述在car t细胞疗法中调节基因表达的方法的一些替代方式中，进一步监测所述受试者在所述诱导型合成启动子的控制下表达的分子的表达。在所述在car t细胞疗法中调节基因表达的方法的一些替代方式中，所述分子为蛋白质、抗体或其本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种转录应答元件(TRE)，所述转录应答元件与SEQ IDNO:1-SEQ ID NO:39中任一项具有至少95％序列同一性。
2.如权利要求1所述的TRE，其中，所述转录应答元件包含与SEQID NO:1-SEQ ID NO:39中任一项所示的序列具有至少98％序列同一性的序列。
3.如权利要求1所述的TRE，其中，所述转录应答元件包含与SEQID NO:1-SEQ ID NO:39中任一项所示的序列具有至少99％序列同一性的序列。
4.如权利要求1所述的TRE，其中，所述TRE包含SEQ ID NO:1-SEQID NO:39中任一项所示的序列。
5.如权利要求1所述的TRE，其中，所述TRE包含与SEQ ID NO:7所示的序列具有至少95％序列同一性的序列。
6.如权利要求1所述的TRE，其中，所述TRE包含与SEQ ID NO:7所示的序列具有至少98％序列同一性的序列。
7.如权利要求1所述的TRE，其中，所述TRE包含SEQ ID NO:7所示的序列。
8.如权利要求1所述的TR
9.如权利要求8所述的TRE，其中，所述最小启动子包括IL-2最小启动子序列。
10.如权利要求1所述的TRE，其中，所述TRE结合选自于E2F1、EGR1、HIF1A、NFAT、LEF1、SP1、PU.1、NFKB、JUN、FOS或STAT4的转录元件。
11.如权利要求8所述的TRE，其中，所述TRE和最小启动子可操作地连接至编码有效载荷的序列。
12.如权利要求11所述的TRE，其中，所述有效载荷包括CD122、CD127、CD360、caSTAT5、dnSHP1、或dnSHP2、PD1:MyD88、PD1:CD28、CD200:CD28、或miRNA155。
13.一种载体，所述载体包含权利要求1所述的TRE，其中，所述TRE可操作地连接至编码有效载荷的序列。
14.如权利要求13所述的载体，其中，所述载体包括病毒载体、基于转座酶的微环或纳米质粒。
15.一种细胞，所述细胞包含权利要求1所述的TRE或权利要求13所述的载体。
16.如权利要求15所述的细胞，其中，所述细胞为T细胞或造血干细胞。
17.如权利要求15所述的细胞，其中，所述细胞表达嵌合抗原受体(CAR)。
18.一种改善、抑制或治疗受试者中的癌症的方法，其中，所述癌症包含配体，其中所述CAR能够特异性结合所述配体，所述方法包括：
19.如权利要求18所述的方法，所述方法进一步包括将所述细胞与(i)所述配体，(ii)抗CD3抗体、抗CD28抗体或其抗原结合片段，(iii)PMA，或(iv)罗奴霉素进行接触。
20.如权利要求19所述的方法，其中，所述接触在所述给予前发生。
...【技术特征摘要】
1.一种转录应答元件(tre)，所述转录应答元件与seq idno:1-seq id no:39中任一项具有至少95％序列同一性。
2.如权利要求1所述的tre，其中，所述转录应答元件包含与seqid no:1-seq id no:39中任一项所示的序列具有至少98％序列同一性的序列。
3.如权利要求1所述的tre，其中，所述转录应答元件包含与seqid no:1-seq id no:39中任一项所示的序列具有至少99％序列同一性的序列。
4.如权利要求1所述的tre，其中，所述tre包含seq id no:1-seqid no:39中任一项所示的序列。
5.如权利要求1所述的tre，其中，所述tre包含与seq id no:7所示的序列具有至少95％序列同一性的序列。
6.如权利要求1所述的tre，其中，所述tre包含与seq id no:7所示的序列具有至少98％序列同一性的序列。
7.如权利要求1所述的tre，其中，所述tre包含seq id no:7所示的序列。
8.如权利要求1所述的tre，其中，所述tre连接至最小启动子。
9.如权利要求8所述的tre，其中，所述最小启动子包括il-2最小启动子序列。
10.如权利要求1所述的tre，其中，所述tre结合选自于e2f1、egr1、hif1a、nfat、lef1、sp1、pu.1、nf...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏佳，迈克尔·C·延森，
申请(专利权)人：西雅图儿童医院DBA西雅图儿童研究所，
类型：发明
国别省市：
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