产生储存稳定病毒及其免疫原性组合物的方法技术

本发明专利技术涉及用于产生储存稳定病毒组合物的方法。在某些实施例中，本发明专利技术涉及一种或一种以上产生储存稳定病毒组合物的配方和方法步骤，其中所述组合物作为冻干固体组合物或冷冻液体组合物的形式储存稳定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】产生储存稳定病毒及其免疫原性组合物的方法
本专利技术一般涉及病毒学、病毒调配物和方法发展领域。更特定而言，本专利技术涉及产生储存稳定病毒组合物的方法，其中所述组合物作为冻干固体组合物或冷冻液体组合物的形式储存稳定。
技术介绍
副粘病毒科的成员人类呼吸道合胞病毒(RSV)和副流感病毒(PIV)为在婴儿和幼儿中引起严重呼吸道疾病的主要病原体(Glezen等人，1981；Chanock等人，1992；Martin等人，1978)。两个RSV群组A组(RSV-A)和B组(RSV-B)在每年的冬天流行病期间同时传播，虽然通常注意到A组感染占主导地位(McConnochie等人，1990；Stark等人，1991)。3型PIV(PIV-3)为毛细支气管炎、肺炎和哮喘的常见起因。在婴儿和幼儿的呼吸道疾病的所有住院治疗中，RSV和PIV-3一起占到高达30％(Crowe，1995)。1型和2型PIV(PIV-1和PIV-2)也是哮喘的常见起因。也已报导RSV引起免疫受损个体和老年人的显著发病率。全球每年发生65,000,000例RSV感染，导致160,000例死亡(Robbins和Freeman，1988)。仅在美国，每年就有100,000名儿童因为由RSV感染所导致的肺炎和毛细支气管炎的严重病例而住院治疗(Glezen等人，1986；Katz，1985)。在1992年估计美国对于RSV感染儿童的住院和非卧床看护每年花费超过340,000,000美元(Wertz和Sullender，1992)。世界卫生组织(WHO)(Crowe，1995)和过敏及感染疾病国际研究所(NIAID)疫苗顾问委员会在疫苗开发上已将RSV评定为仅次于HIV，同时将有效PIV(例如3型PIV)疫苗的制剂评定为属于在疫苗开发上被视作优先的前10种疫苗内。因此，对设计能够在婴儿、幼儿、老年人和免疫受损者中预防严重呼吸道疾病的安全有效RSV和/或PIV疫苗的能力仍有强烈需求。使用活态减毒RSV和/或PIV控制呼吸道疾病为更有前途的方法之一。在过去20年里已开发出多种活态RSV菌株并在RSV-血清反应阴性儿童中加以测试。用于活态减毒RSV的最受推崇的方法为冷继代(cp)RSV、温度敏感性(ts)RSV突变体和冷继代温度敏感性(cpts)RSV突变体(Kneyber和Kimpen，2002)。诸如cpts-248、cpts-248/404、cpts-530的RSV突变体和PIV-3突变体cp-45当前正在实验室和临床试验中进行评估。-->除了需要确定和开发有效的活态减毒RSV、PIV或RSV/PIV组合免疫原性组合物之外，当前还需要产生储存稳定RSV和/或PIV组合物及其免疫原性组合物的方法。例如，RSV为热不稳定性病毒，其在-65℃到-86℃下储存期间于少于3个月内失活(Hambling，1964；Wulff等人，1964；Gupta等人，1996)。因此高度需要确定产生储存稳定的RSV、PIV或RSV/PIV免疫原性组合物的方法。此外，增强其他病毒免疫原性组合物的储存稳定性长期以来已被视作改良疫苗对世界卫生的影响的重要目标(Melnick和Wallis，1963；Rasmussen等人，1973；Ayra，2001；Hilleman，1989；Lemon和Milstein，1994)。因此在病毒调配物和方法发展的技术中需要产生诸如以下各病毒的储存稳定病毒组合物的方法：单纯疱疹病毒、细胞肥大病毒、Epstein-Barr病毒、水痘-带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、流感病毒、脊髓灰质炎病毒、鼻病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、诺沃克病毒(Norwalk virus)、披膜病毒、α病毒、风疹病毒、狂犬病病毒、马堡病毒(Marburgvirus)、伊波拉病毒(Ebola virus)、乳头状瘤病毒、多瘤病毒、间质肺炎病毒(metapneumovirus)、冠状病毒、水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus)、委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus)等等。
技术实现思路
本专利技术广泛涉及产生储存稳定病毒组合物及其免疫原性组合物的方法。在某些实施例中，本专利技术涉及产生包含呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)或其组合的储存稳定病毒组合物的方法。更特定而言，在某些实施例中，本专利技术涉及一种或一种以上导致储存稳定病毒组合物的配方和方法步骤，其中所述病毒组合物作为冻干固体组合物或冷冻液体组合物的形式储存稳定。在一特定实施例中，本专利技术涉及一种或一种以上导致储存稳定RSV、PIV或RSV/PIV组合物的配方和方法步骤，其中所述RSV、PIV或RSV/PIV组合物作为冻干固体组合物或冷冻液体组合物的形式储存稳定。因此，在某些实施例中，本专利技术涉及产生小体积储存稳定病毒组合物的方法。在一特定实施例中，本专利技术涉及产生包含RSV、PIV或其组合的小体积储存稳定病毒组合物的方法，所述方法包含(a)于约60分钟或更少的时间内将病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度，和(b)冻干病毒组合物，其中冻干病毒组合物在约1℃到约10℃的储存温度下可稳定至少1年。在一实施例中，玻璃态转化温度为约-45℃的温度且在约60分钟或更少的时间内达到。在另一实施例中，玻璃态转化温度为约-35℃的温度且在约40分钟或更少的时间内达到。在另一实施例中，约-35℃的玻璃态转化温度在约20分钟或更-->少的时间内达到。在一实施例中，病毒组合物的体积为约0.2mL到约1.0mL。在某些实施例中，病毒组合物包含在合适的容器构件中，其中所述容器构件被进一步定义为小瓶、管或鼻喷雾装置。在一实施例中，RSV被进一步定义为A组RSV(RSV-A)、B组RSV(RSV-B)或包含一种或一种以上各群组A和B的抗原的嵌合重组RSV(RSV-AB)，且PIV被进一步定义为1型PIV(PIV-1)、2型PIV(PIV-2)或3型PIV(PIV-3)。在某些实施例中，在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配小体积储存稳定病毒组合物。在其他实施例中，所述5.0到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.25mM到约25mM N-羟乙基哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(HEPES)。在某些其他实施例中，所述5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。在某些实施例中，在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配小体积储存稳定病毒组合物。在其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.25mM到约25mM HEPES。在某些其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。在一实施例中，包含约0.25mM到约25mM HEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为约6.5到约7.8)进一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于产生包含呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）、副流感病毒（ＰＩＶ）或其组合的储存稳定病毒组合物的方法，所述方法包含：（ａ）于６０分钟或更少的时间内将所述病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度；和（ｂ）冻干所述病毒组合物，其中所述冻干病毒组合物在约１℃到约１０℃的储存温度下可稳定至少１年。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2003-12-17 60/530,3251.一种用于产生包含呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)或其组合的储存稳定病毒组合物的方法，所述方法包含：(a)于60分钟或更少的时间内将所述病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度；和(b)冻干所述病毒组合物，其中所述冻干病毒组合物在约1℃到约10℃的储存温度下可稳定至少1年。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-40℃到约-50℃。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-30℃到约-40℃。4.根据权利要求3所述的方法，其中在40分钟或更少的时间内达到约-35℃的所述玻璃态转化温度。5.根据权利要求3所述的方法，其中在20分钟或更少的时间内达到约-35℃的所述玻璃态转化温度。6.根据权利要求1所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。7.根据权利要求6所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。8.根据权利要求7所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mM N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(HEPES)。9.根据权利要求7所述的方法，其进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。10.根据权利要求7所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mM HEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。11.根据权利要求10所述的方法，其进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸或L(+)-谷氨酸单钠盐或L(+)-谷氨酸/L(+)-谷氨酸单钠盐的混合物和人类白蛋白(HA)。12.根据权利要求11所述的方法，其中HA为天然的或重组的。13.根据权利要求11所述的方法，其进一步包含大豆蛋白胨。14.根据权利要求11所述的方法，其进一步包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mM L(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mM L(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和约1.0g/L到约10.0g/L HA。-->15.根据权利要求14所述的方法，其中约1.0g/L到约10.0g/L HA由约50g/L大豆蛋白胨替换。16.根据权利要求13所述的方法，其包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mM L(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mM L(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/L到约10.0g/L HA和约50g/L大豆蛋白胨。17.根据权利要求1所述的方法，其中所述储存温度为5℃。18.根据权利要求1所述的方法，其中所述病毒组合物在约1℃到约10℃下储存1年后具有小于约1.0log的PFU损失。19.根据权利要求1所述的方法，其中所述病毒组合物在约1℃到约10℃下储存1年后为每0.2mL至少4.0log PFU。20.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(b)中冻干所述病毒组合物包含在合适容器构件中约0.2mL到约1.0mL的所述病毒组合物。21.根据权利要求20所述的方法，其中容器构件被进一步定义为小瓶、管或鼻喷雾装置。22.根据权利要求1所述的方法，其中冻干所述病毒组合物被进一步定义为：(a)将约0.5mL到0.6mL的所述病毒组合物放置于小瓶中并冷却到约5℃的温度；(b)将所述小瓶放置在冻干架上并以每分钟约-1.0℃到每分钟约-2.0℃的速率将所述架子温度从5℃降低到-50℃；(c)保持所述架子温度为约-50℃持续60分钟；(d)降低冻干室压力到0.10托并保持所述架子温度为约-50℃持续30-60分钟；(e)在约0.10托下以每分钟约1.0℃到约2.0℃的速率将所述架子温度从-50℃升高到0℃，并保持所述架子温度为约0℃持续约540分钟到约720分钟；(f)在约0.10托下以每分钟约0.5℃的速率将所述架子温度从0℃升高到15℃，并保持所述架子温度为约15℃持续约600分钟到约720分钟；和(g)用氮气充满所述小瓶并密封所述小瓶。23.根据权利要求1所述的方法，其中冻干所述病毒组合物被进一步定义为：(a)将约0.5mL到0.6mL的所述病毒组合物放置于小瓶中并冷却到约5℃的温度；(b)冷冻冻干架到约-70℃的温度；(c)将所述小瓶放置在所述冻干架上并保持温度为约-70℃持续约60分钟；-->(d)降低冻干室压力到0.10托并以每分钟约1.0℃的速率将所述架子温度从-70℃升高到-50℃；(e)在约0.10托下以每分钟约1.0℃到每分钟约2.0℃的速率将所述架子温度从-50℃升高到0℃，并保持所述架子温度为约0℃持续约540分钟到约720分钟；(f)在约0.10托下以每分钟约0.5℃的速率将所述架子温度从0℃升高到15℃，并保持所述架子温度为约15℃持续约600分钟到约720分钟；和(g)用氮气充满所述小瓶并密封所述小瓶。24.一种用于产生包含呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)或其组合的冻干稳定大体积病毒组合物的方法，所述方法包含：(a)将体积为至少50mL的液体病毒组合物放置于冻干盘中；(b)在液氮浴中将所述病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度达至少约20分钟；和(c)冻干所述病毒组合物，其中所述冻干病毒组合物相对于冻干前的所述病毒组合物具有小于约0.5log的PFU损失。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-45℃。26.根据权利要求24所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-35℃的温度。27.根据权利要求24所述的方法，其中所述冻干盘为Lyoguard冻干盘。28.根据权利要求24所述的方法，其中所述病毒组合物的体积为至少500mL。29.根据权利要求24所述的方法，其中所述病毒组合物的体积为至少1000mL。30.根据权利要求24所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。31.根据权利要求30所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。32.根据权利要求31所述的方法，其进一步包含约2.5mM到约25mM HEPES。33.根据权利要求31所述的方法，其进一步包含约0.1mM到约1mM氯化镁和约0.1mM到约1mM氯化钙。34.根据权利要求31所述的方法，其进一步包含约2.5mM到约25mM HEPES、约0.1mM到约1mM氯化镁和约0.1mM到约1mM氯化钙。35.根据权利要求34所述的方法，其进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸或L(+)-谷氨酸单钠盐和人类白蛋白(HA)。-->36.根据权利要求35所述的方法，其中HA为天然的或重组的。37.根据权利要求35所述的方法，其进一步包含大豆蛋白胨。38.根据权利要求35所述的方法，其进一步包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mM L(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mM L(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和约1.0g/L到约10.0g/L HA。39.根据权利要求38所述的方法，其中约1.0g/L到约10.0g/L HA由约50g/L大豆蛋白胨替换。40.根据权利要求37所述的方法，其包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mM L(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mM L(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/L HA和约50g/L大豆蛋白胨。41.根据权利要求24所述的方法，其中冻干所述大体积病毒组合物被进一步定义为：(a)在约-50℃的温度下将包含所述冷冻病毒组合物的冻干盘放置于预冷却到约-50℃的温度的冻干架上并保持所述温度约60分钟；(b)降低冻干室压力到0.10托并在约0.10托下以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-50℃升高到-23℃；(c)保持所述架子温度为约-23℃持续约80小时到约100小时；(d)降低冻干室压力到0.02托并以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-23℃升高到15℃；(e)将所述架子温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约30小时到约40小时；(f)在0.02托下以每分钟约0.17℃的速率将所述架子温度从15℃升高到25℃；(g)将所述架子温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约10小时；和(h)用氮气充满所述冻干室并在氮气下将所述冻干盘密封于铝袋中。42.根据权利要求24所述的方法，其中冻干所述大体积病毒组合物被进一步定义为：(a)在约-70℃的温度下将包含所述冷冻病毒组合物的冻干盘放置于预冷却到约-70℃的温度的冻干架上并保持所述温度约60分钟；(b)降低冻干室压力到0.10托并以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-70℃升高到-23℃；(c)在约0.10托下保持所述架子温度为约-23℃持续约80到100小时；(d)降低冻干室压力到0.02托并以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-23℃升高到15℃；-->(e)将温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约30到40小时；(f)在0.02托下以每分钟约0.17℃的速率将所述架子温度从15℃升高到25℃；(g)保持所述温度为约25℃持续约10小时；和(h)用氮气充满所述冻干室并在氮气下将所述冻干盘密封于铝袋中。43.一种用于产生包含呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)或其组合的储存稳定液体病毒组合物的方法，所述方法包含：(a)在液氮浴中平衡金属板；(b)将液体病毒组合物放置于鼻喷雾装置中；(c)将步骤(b)的所述鼻喷雾装置插入金属固定器中；(d)将所述金属固定器放置于步骤(a)的所述经平衡的金属板上持续约10分钟；(e)从所述金属固定器中移除所述鼻喷雾装置；和(f)将所述鼻喷雾装置储存在约-20℃到约-70℃的温度下，其中步骤(a)到(f)后的所述病毒组合物在储存6个月后具有小于约0.5log的PFU损失。44.根据权利要求43所述的方法，其中所述金属固定器为铝。45.根据权利要求43所述的方法，其中所述金属固定器为不锈钢。46.根据权利要求43所述的方法，其中所述病毒组合物在步骤(a)到(f)之后为至少4.0log PFU/0.2mL。47.根据权利要求43所述的方法，其中所述病毒组合物在-20℃的温度下储存6个月后为至少4.0log PFU/0.2mL。48.根据权利要求43所述的方法，其中所述病毒组合物在-70℃的温度下储存6个月后为至少4.0log PFU/0.2mL。49.根据权利要求43所述的方法，其中在不存在蛋白稳定剂的情况下调配所述液体病毒组合物。50.根据权利要求43所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。51.根据权利要求43所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。52.根据权利要求51所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mM HEPES。53.根据权利要求51所述的方法，其进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01-->mM到约1mM氯化钙。54.根据权利要求51所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mM HEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。55.根据权利要求54所述的方法，其进一步包含蔗糖和L(+)-谷氨酸、L(+)-谷氨酸单钠盐或L(+)-谷氨酸与L(+)-谷氨酸单钠盐的混合物。56.根据权利要求55所述的方法，其进一步包含约75g/L蔗糖和约4.9mM L(+)-谷氨酸或约4.9mM L(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物。57.一种根据权利要求1所述的方法产生的储存稳定病毒组合物。58.一种根据权利要求24所述的方法产生的冻干稳定大体积病毒组合物。59.一种根据权利要求43所述的方法产生的储存稳定冷冻液体病毒组合物。60.一种免疫原性组合物，其包含溶解于医药学上可接受的载剂中的通过权利要求1所述的方法产生的所述病毒组合物。61.一种免疫原性组合物，其包含溶解于医药学上可接受的载剂中的通过权利要求24所述的方法产生的所述病毒组合物。62.一种免疫原性组合物，其包含通过权利要求43所述的方法产生的所述鼻喷雾病毒组合物。63.一种用于产生储存稳定病毒组合物的方法，所述病毒组合物包含选自由单纯疱疹病毒(HSV)、细胞肥大病毒(CMV)、Epstein-Barr病毒、水痘-带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、流感病毒、脊髓灰质炎病毒、鼻病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、诺沃克病毒(Norwalk virus)、披膜病毒、α病毒、风疹病毒、狂犬病病毒、马堡病毒(Marburg virus)、伊波拉病毒(Ebola virus)、乳头状瘤病毒、人乳头状瘤病毒(HPV)、多瘤病毒、间质肺炎病毒(metapneumovirus)、冠状病毒、水疱性口炎病毒(VSV)和委内瑞...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉隆卢克，弗拉迪米尔G弗洛罗夫，南迪尼克纳，
申请(专利权)人：惠氏公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]