【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫层析，尤其涉及一种核酸检测试纸盒及其制备方法和应用。
技术介绍
1、1971年faulk和taytor将胶体金引入免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。胶体金检测技术是利用抗原抗体特异性结合的免疫反应原理，在检测线处形成抗体-待测抗原-金标抗体复合物，在对照线处形成抗金标抗体-金标抗体复合物，该技术中多种抗原和抗体的结合是通过抗原决定簇之间的相互识别来实现的，不同抗原抗体的空间构型不可避免地影响其相互的识别和结合，从而影响到检测的信号强度，而且非特异性的结合也使该技术的假阳性高。而目前常用的核酸检测技术是实时荧光pcr以及恒温扩增技术，常见的核酸恒温扩增技术包括：nasba，rca，lamp等。但这些技术对实验人员和仪器设备提出了很高的要求。检测也需要仪器，不利于普及。目前已有检测核酸的胶体金试纸条技术，其是通过在核酸扩增的上下游引物的5’端分别修饰异硫氰酸荧光素和生物素，核酸试纸条上的胶体金以及检测线处分别标记有链霉亲和素及抗荧光素抗体，当有扩增产物时，加样后，产物上修饰的生物素与修饰有链霉亲和素的胶体金结合，到达检测线时，线上的抗荧光素抗体将标有荧光素的产物捕获，从而显色；多余的胶体金则到质控线时与生物素结合而显色。
2、猫杯状病毒（fcv）是一种高变异、单股rna病毒。fcv很容易发生变异，新的毒株引起的疾病的严重程度和症状各不相同，在预防和医治中造成了巨大的难题。在极少数情况下，fcv的突变株会自发产生，导致非常严重的疾病，造成多器官损害甚
3、综上，由于传统胶体金技术在灵敏度上的缺陷，nasba，rca，lamp等核酸检测技术在设备和人员上的局限，以及猫杯状病毒毒株的变异和抗体分化的困难，现有的技术假阳性问题难以解决，对猫杯状病毒的快速正确诊疗产生了极大的阻碍。
4、因此，非常有必要提供一种核酸检测试纸盒及其制备方法和应用。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的一个或者多个技术问题，本专利技术提供了一种核酸检测试纸盒及其制备方法和应用。
2、本专利技术在第一方面提供了一种核酸检测试纸盒，所述核酸检测试纸盒包括核酸检测试纸条和扩增产物缓冲液；所述扩增产物缓冲液含有0.05~0.25w/v%乙二胺四乙酸、0.04~0.1w/v%乙醇胺、0.04~0.1w/v%乙氧基化蓖麻油和0.05~0.2w/v%表面活性剂s9；所述核酸检测试纸条的结合垫标记有链霉亲和素修饰的乳胶微球；在制备所述结合垫的标记过程中添加有稳定剂，所述稳定剂包含牛血清白蛋白和聚乙二醇，所述牛血清白蛋白的添加浓度为0.5~1wt%，所述聚乙二醇的添加浓度为0.5~1wt%。
3、优选地，所述扩增产物缓冲液含有0.15~0.25w/v%乙二胺四乙酸、0.04~0.06w/v%乙醇胺、0.04~0.06w/v%乙氧基化蓖麻油和0.05~0.15w/v%表面活性剂s9；和/或所述扩增产物缓冲液采用浓度为8~12mm、ph为8.0的tris-hcl缓冲液作为溶剂配制而成。
4、优选地，所述扩增产物缓冲液含有乙二胺四乙酸、乙醇胺、乙氧基化蓖麻油和表面活性剂s9的质量比为（2~4）：（1~1.5）：（1~1.5）：（2~4）。
5、优选地，所述扩增产物缓冲液含有乙二胺四乙酸、乙醇胺、乙氧基化蓖麻油和表面活性剂s9的质量比为（2~4）：1：1：（1.5~2.5）；和/或所述牛血清白蛋白的添加浓度为1wt%，所述聚乙二醇的添加浓度为1wt%。
6、优选地，所述核酸检测试纸条包括样品垫、结合垫、包被有抗体的nc膜、吸水垫和底板；所述nc膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有抗荧光素抗体，所述质控线包被有生物素抗体。
7、优选地，所述nc膜在包被抗体之前，先在湿度为60~70%的条件下预处理50~70min。
8、优选地，所述抗荧光素抗体为抗fam抗体；所述生物素抗体为biotin-bsa。
9、本专利技术在第二方面提供了一种本专利技术在第一方面所述的核酸检测试纸盒的制备方法，所述方法包括如下步骤：
10、（1）配制所述扩增产物缓冲液；
11、（2）将样品垫、结合垫、nc膜、吸水垫以及底板组装形成核酸检测试纸条，由此得到包括核酸检测试纸条和扩增产物缓冲液的核酸检测试纸盒。
12、本专利技术在第三方面提供了本专利技术在第一方面所述的核酸检测试纸盒在非疾病诊断和治疗目的的检测猫杯状病毒中的应用。
13、优选地，所述应用为：将样本和猫杯状病毒引物对通过pcr扩增，得到扩增产物，然后将扩增产物混合于扩增产物缓冲液中得到待测样本，最后通过核酸检测试纸条对待测样本进行检测。
14、本专利技术与现有技术相比至少具有如下有益效果：
15、（1）本专利技术中的核酸检测试纸盒能够对猫杯状病毒进行准确的体外诊断，以解决人们的需求；本专利技术中的核酸检测试纸盒将乳胶微球标记与核酸检测相结合，本专利技术的结合垫标记有链霉亲和素修饰的乳胶微球，并且对标记过程中的稳定剂配方以及扩增产物缓冲液配方进行同时优化，使得不同抗原抗体的空间构型不可避免地影响其相互的识别和结合问题得到有效改善，本专利技术发现，稳定剂配方中聚乙二醇peg和牛血清白蛋白bsa的添加能有效封闭抗体上的非特异性结合位点，而扩增产物缓冲液配方中同时添加有乙二胺四乙酸edta、乙醇胺、乙氧基化蓖麻油和表面活性剂s9，本专利技术发现，表面活性剂s9、乙醇胺有良好的抗静电作用，通过消除静电能够有效提高检测灵敏度，edta、乙氧基化蓖麻油可以保护核酸分子碱基结构，有效消除基于低或中等抗体亲和力结合的交叉反应和基质效应，抗体和抗原之间的高亲和力结合不会受到负面影响，而抗体的不必要结合会受到抑制，从而使得本专利技术能够显著提高猫杯状病毒的检测灵敏度，操作简单，成本低廉，适用性强，能够达到快速、高效、便捷检测的目的。
16、（2）本专利技术核酸检测试纸盒包括的扩增产物缓冲液中的乙二胺四乙酸edta、乙醇胺、乙氧基化蓖麻油和表面活性剂s9成分缺一不可且这些成分具有合适的浓度与配比，同时本专利技术标记有链霉亲和素修饰的乳胶微球的结合垫在标记过程中采用的稳定剂需要同时包含具有合适浓度和配比的聚乙二醇peg和牛血清白蛋白bsa，如此才可以有效地提高猫杯状病毒的检测灵敏度和准确度，达到快速、高效、便捷检测的目的，可以使得样本与核酸检测结果符合率高达85~100%。
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1.一种核酸检测试纸盒，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的核酸检测试纸盒，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的核酸检测试纸盒，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的核酸检测试纸盒，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的核酸检测试纸盒，其特征在于：
6.根据权利要求5所述的核酸检测试纸盒，其特征在于：
7.根据权利要求5所述的核酸检测试纸盒，其特征在于：
8.一种权利要求1至7中任一项所述的核酸检测试纸盒的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
9.权利要求1至7中任一项所述的核酸检测试纸盒在非疾病诊断和治疗目的的检测猫杯状病毒中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：
【技术特征摘要】
1.一种核酸检测试纸盒，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的核酸检测试纸盒，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的核酸检测试纸盒，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的核酸检测试纸盒，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的核酸检测试纸盒，其特征在于：
6.根据权利要求5所述的核酸检测试纸盒，...
【专利技术属性】
技术研发人员：王伟，胡成博，陈勇，马佳奇，宋克清，
申请(专利权)人：北京凡知医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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