【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学检测鉴定领域，具体涉及一种pcr检测鉴定纹沼螺的方法。
技术介绍
1、纹沼螺(parafossarulus striatulus，又名parafossarulus manchouricus)是浅水草型湖泊中的优势种类，纹沼螺(parafossarulus striatulus),在分类上属于软体动物门(mollusca)腹足纲(gastropoda)中腹足目(mesogastropoda)豆螺科(bithyniidae)沼螺属(parafossarulus)。纹沼螺(parafossarulus striatulus)是我国华支睾吸虫(clonorchis sinensis)重要的第一中间宿主，其生活范围比较广泛，常见的有溪流、湖泊、池塘以及稻田等，华支睾吸虫的虫卵可经过第一中间宿主纹沼螺，第二中间宿主鱼虾以及终宿主人、猫等逐渐发育成成虫，进而对终宿主的肝脏造成损害，从而引起胆管上皮增生、梗阻性黄疸、胆结石、胆囊炎和胆管炎，甚至肝硬化和胆管癌。
2、研究中间宿主螺类的分类，对防治华支睾吸虫病及螺类的生物学研究等具有实际意义。目前，豆螺科螺类有一些相近种类形态不易区分,结合外部形态及内部解剖等形态学方法鉴定物种有难度，因此，需要一种分子生物学的鉴定手段辅助形态学鉴定方法完成纹沼螺的鉴定。
技术实现思路
1、本专利技术第一方面的目的，在于提供一种分子标记。
2、本专利技术第二方面的目的，在于提供一种应用。
3、本专利技术第三方
4、本专利技术第四方面的目的，在于提供一种试剂或试剂盒。
5、本专利技术第五方面的目的，在于提供本专利技术第三方面的产品、和/或本专利技术第四方面的试剂或试剂盒的应用。
6、本专利技术第六方面的目的，在于提供一种方法。
7、为了实现本专利技术上述的目的，本专利技术采取的技术方案是：
8、本专利技术的第一个方面，提供一组纹沼螺的分子标记，其特征在于：
9、所述分子标记包含与seq id no:1具有至少95％、96％、97％、98％、99％、100％同源性的序列；所述seq id no:1的碱基序列为：cgggtgtcaggcctttagttggcgactgg cgggtcggctgcgagcgtcctaagagtcgggttgtttgggaatgcagcccaaagcaggtggtaaactccatctaaggctaaatactggcacgagtccgatagcggacaagtaccgtgagggaaagttgaaaagaactttgaagagagagttcaacagtacgtgaaaccgcctagaggtaaacgggtggatccgcaaa(5’-3’)。
10、本专利技术的第二个方面，提供检测本专利技术第一个方面的分子标记的物质在(a1)～(a6)中至少一种中的应用：
11、(a1)鉴定纹沼螺；
12、(a2)制备鉴定纹沼螺的产品；
13、(a3)筛选纹沼螺；
14、(a4)筛选纹沼螺的产品；
15、(a5)检测纹沼螺；
16、(a6)制备检测纹沼螺的产品。
17、优选地，所述物质包含与选自下组的一种或多种检测技术或方法中的物质：northern印迹法、pcr、生物芯片法、核酸测序法。
18、优选地，所述产品包含试剂、试剂盒、试纸、芯片、系统中的至少一种。
19、本专利技术的第三个方面，提供一种产品，包含检测本专利技术第一个方面的分子标记的物质。
20、优选地，所述物质包含用于选自下组的一种或多种检测技术或方法中的物质：northern印迹法、pcr、生物芯片、核酸测序法。
21、优选地，所述产品包含试剂、试剂盒、试纸、芯片、系统中的至少一种。
22、优选地，所述产品包含用于扩增权利要求1所述的分子标记的引物对。
23、优选地，所述产品还可以包括用于检测权利要求1所述的分子标记的探针。
24、优选地，所述用于扩增权利要求1所述的分子标记的引物对的序列如seq id 2、3所示；所述seq id no:2的碱基序列为：cgggtgtcaggcctttagtt(5’-3’)；所述seq id no:3的碱基序列为：tttgcggatccacccgttta(5’-3’)。
25、本专利技术的第四个方面，提供一种试剂或试剂盒，包含本专利技术第三个方面的引物对和/或探针。
26、优选地，所述试剂盒还包含taq dna聚合酶、dntp、pcr缓冲液、mg2+中的至少一种。
27、本专利技术的第五个方面，提供(1)～(2)中任一项在(b1)～(b3)中任一种中的应用；
28、(1)权利要求3～4任一项所述的产品；
29、(2)权利要求5～6任一项所述的试剂或试剂盒；
30、(b1)鉴定纹沼螺；
31、(b2)筛选纹沼螺；
32、(b3)检测纹沼螺。
33、本专利技术的第六个方面，提供(c1)～(c3)中任一项所述的方法：
34、(c1)一种鉴定纹沼螺的方法，检测待测螺样品基因组中是否包含权利要求1所述的分子标记，若所述待测螺样品基因组中包含权利要求1所述的分子标记，则该螺样品为纹沼螺；反之，则不是；
35、(c2)一种筛选纹沼螺的方法，检测待测螺样品基因组中是否包含权利要求1所述的分子标记，选择基因组中包含权利要求1所述的分子标记的螺样品；
36、(c3)一种检测纹沼螺的方法，检测待测样品基因组中是否包含权利要求1所述的分子标记，若所述待测样品的基因组中包含权利要求1所述的分子标记，则该待测样品包含纹沼螺；反之，则不包含。
37、优选地，所述检测待测螺样品基因组中是否包含权利要求1所述的分子标记的方法为：将待测样品的dna与权利要求5或6所述的试剂或试剂盒中的引物对和/或探针混合，进行pcr检测。
38、优选地，所述引物对的终浓度为100-300nm。
39、优选地，所述pcr的反应程序中的退火温度为50～60℃。
40、本专利技术的有益效果是：
41、本专利技术提供了一种纹沼螺的分子标记，所述分子标记包含与seq id no.1具有至少95％、96％、97％、98％、99％、100％同源性的序列。针对该分子标记进行检测，特异性高，结果可靠性具有充分的保证。当传统分类学方法难以鉴定纹沼螺与其他豆螺时，本专利技术用分子生物学技术进行弥补，从而得到快速、准确的检测鉴定纹沼螺的pcr方法。实用性强，可满足对纹沼螺进行快速可靠的检测和鉴定的需要。本专利技术为纹沼螺的检测鉴定提供了新的技术手段，对于防止以纹沼螺中间宿主的寄生虫疾病的传播和扩散具有重要意义。
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1.纹沼螺的分子标记，其特征在于：
2.检测权利要求1所述的分子标记的物质在(a1)～(a6)中至少一种中的应用：
3.一种产品，包含检测权利要求1所述的分子标记的物质。
4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于：
5.一种试剂或试剂盒，包含权利要求4中所述的引物对。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含Taq DNA聚合酶、dNTP、PCR缓冲液、Mg2+中的至少一种。
7.(1)～(2)中任一项在(b1)～(b3)中任一种中的应用；
8.(c1)～(c3)中任一项所述的方法：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：
【技术特征摘要】
1.纹沼螺的分子标记，其特征在于：
2.检测权利要求1所述的分子标记的物质在(a1)～(a6)中至少一种中的应用：
3.一种产品，包含检测权利要求1所述的分子标记的物质。
4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于：
5.一种试剂或试剂盒，包含权利要求4中所述的引物对。
6.根据权利要求5所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄艳，张转玲，黄利思，王念，张森，余新炳，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：
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