【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种杂质检测分析方法，具体地说是一种苯磺酸氨氯地平遗传毒性警示结构化合物杂质测定的高效液相色谱分析方法。
技术介绍
1、苯磺酸氨氯地平(amlodipine besilate)，化学名为(±)-2-[(2-氨基乙氧基)甲基]-4-(2氯苯基)-1,4-二氢-6-甲基-3,5-吡啶二羧酸-5-甲酯，3-乙酯苯磺酸盐。
2、其结构如下：
3、
4、苯磺酸氨氯地平是高血压药物，其生产工艺中要用到起始物料“邻苯二甲酰氨氯地平”的工艺路线，如下图所示：
5、
6、该起始物料的合成工艺中涉及化合物“4-氯乙酰乙酸乙酯”、“2-氯苯甲醛”、“3-氨基巴豆酸甲酯”、及“4-(2-(1,3-二氢-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基)-3-氧代丁酸乙酯”。这四个化合物具有疑似遗传毒性警示结构，其结构式分别如下：
7、
8、由于上述四个遗传毒性警示结构化合物的名称较长，为了便于阅读，本文中简化名称如下：
9、
10、因为苯磺酸氨氯地平含有苯磺酸盐，原料药中常见的基因毒性杂质为苯磺酸乙酯、苯磺酸甲酯及苯磺酸异丙酯，所以原料药中对苯磺酸酯类基因杂质研究较多，但未曾有文献报道其检测杂质a、杂质b、杂质c和杂质d的方法。
技术实现思路
1、专利技术人通过分析上述主成份苯磺酸氨氯地平和杂质a、杂质b、杂质c和杂质d的结构，建立高效液相色谱法测定方法。
2、专利技术人采用十八烷基键合硅胶
3、本专利技术苯磺酸氨氯地平原料药中四个遗传毒性警示结构化合物杂质检测分析方法，采用反相色谱柱及紫外检测器，是以磷酸盐缓冲液-甲醇-乙腈的流动相体系，进行梯度洗脱，包括如下步骤：
4、(1)供试品溶液配制：取苯磺酸氨氯地平原料药，用乙腈溶解并定量稀释制成每1ml约含苯磺酸氨氯地平30mg的溶液。
5、(2)色谱条件设置：采用反相十八烷基键合硅胶色谱柱，柱温设置在20-50℃，洗脱液由流动相a和流动相b构成，以体积比70:30的磷酸氢二钾溶液-甲醇为流动相a，以乙腈为流动相b，进行梯度洗脱，流速为0.5 -1.5ml/min，检测波长为205-300nm。
6、(3)检测：取步骤(1)中配制的苯磺酸氨氯地平溶液，进样5-20μl，记录色谱图。
7、其中，步骤(2)洗脱程序为：0-35分钟流动相a占洗脱液的体积百分比为100％，35-40分钟流动相a占洗脱液的体积百分比由100％逐步递减至40％，40-50分钟流动相a占洗脱液的体积百分比为40％，50-50.1分钟流动相a占洗脱液的体积百分比由40％逐步递增至100％。
8、其中，步骤(2)中色谱柱为4.6mm×150mm，5μm。
9、其中，步骤(2)中流动相的磷酸氢二钾溶液的浓度为：10-50mmol/l。
10、优选的，步骤(2)中柱温为35℃，流速为1.0ml/min。
11、优选的，步骤(2)中波长的选择：选取各杂质紫外吸收较强的波长。由于276nm波长处杂质b和杂质d响应较小，215nm处杂质c和杂质a响应较小，采取同一波长测定同时测定四个杂质，四个杂质紫外吸收响应无法同时兼顾，故在276nm波长处检测杂质c和杂质a，在215nm波长处检测杂质b和杂质d。
12、优选的，步骤(2)中流动相的磷酸氢二钾溶液的浓度为：20mmol/l。
13、优选的，步骤(3)中进样量为10μl。
14、采用本专利技术方法可有效地控制苯磺酸氨氯地平原料药四个遗传毒性警示结构化合物杂质，包括主成分在内的五个组份均能在同一液相色谱系统中分析出来，只是在不同波长下检测相应的杂质，不同波长下，相同波长下两相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5。分析过程见实施例1，典型色谱图见图1，计算结果见表1。
15、表1苯磺酸氨氯地平与各杂质色谱分离参数结果
16、
17、采用本专利技术方法能对上述四个杂质进行定量分析。按照中国药典2020年版四部通则0512(高效液相色谱法)及通则9101(药品质量标准分析方法验证指导原则)的定义和验证方法，采用杂质对照法对四个杂质的检测限、定量限进行检测，结果表明该方法对各杂质的响应值高，能有效控制各已知杂质，结果见表2。线性试验结果见表3。准确度试验结果见表4。
18、表2四个已知杂质定量限和检测限分析参数结果
19、
20、表3四个杂质线性数据
21、
22、表4准确度试验结果
23、
24、本专利技术具有以下有益效果：
25、本专利技术首次对苯磺酸氨氯地平原料药中四个遗传毒性警示结构化合物杂质测定，对制剂成品质量控制具有实际应用价值。
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1.一种苯磺酸氨氯地平遗传毒性警示结构化合物杂质测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的苯磺酸氨氯地平遗传毒性警示结构化合物杂质测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于：步骤(2)中色谱柱为：Waters XBridge，4.6mm×150cm，5μm。
3.根据权利要求1所述的苯磺酸氨氯地平遗传毒性警示结构化合物杂质测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于：步骤(2)中梯度洗脱程序为：0-35分钟流动相A占洗脱液的体积百分比为100％，35-40分钟流动相A占洗脱液的体积百分比由100％逐步递减至40％，40-50分钟流动相A占洗脱液的体积百分比为40％，50-50.1分钟流动相A占洗脱液的体积百分比由40％逐步递增至100％。
4.根据权利要求1所述的苯磺酸氨氯地平遗传毒性警示结构化合物杂质测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于：步骤(2)中流速为1.0ml/min，，柱温35℃。
5.根据权利要求1所述的苯磺酸氨氯地平遗传毒性警示结构化合物杂质测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于：步骤(2)
6.根据权利要求1所述的苯磺酸氨氯地平遗传毒性警示结构化合物杂质测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于：步骤(3)中进样量优选为10μl。
7.根据权利要求1所述的苯磺酸氨氯地平遗传毒性警示结构化合物杂质测定的高效液相色谱分析方法，检测波长在于双波长测定，215nm与276nm；在276nm波长处检测杂质C和杂质A，在215nm波长处检测杂质B和杂质D。
...【技术特征摘要】
1.一种苯磺酸氨氯地平遗传毒性警示结构化合物杂质测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的苯磺酸氨氯地平遗传毒性警示结构化合物杂质测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于：步骤(2)中色谱柱为：waters xbridge，4.6mm×150cm，5μm。
3.根据权利要求1所述的苯磺酸氨氯地平遗传毒性警示结构化合物杂质测定的高效液相色谱分析方法，其特征在于：步骤(2)中梯度洗脱程序为：0-35分钟流动相a占洗脱液的体积百分比为100％，35-40分钟流动相a占洗脱液的体积百分比由100％逐步递减至40％，40-50分钟流动相a占洗脱液的体积百分比为40％，50-50.1分钟流动相a占洗脱液的体积百分比由40％逐步递增至100％。
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【专利技术属性】
技术研发人员：乔玉清，戴琴，吴沉，周付潮，唐井元，
申请(专利权)人：常州制药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：
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