【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗体医药，具体涉及一种用于流式细胞检测急性t淋巴细胞白血病/淋巴瘤免疫表型的抗体组合及其应用。
技术介绍
1、急性t淋巴细胞白血病/淋巴瘤（t-cell acute lymphoblastic leukemia/lymphoma，t-all/lbl）是不成熟t淋巴细胞在骨髓、外周血、淋巴、胸腺和其他结外组织聚集增生的异质性疾病，在儿童急性淋巴细胞白血病（all）中占15%，成人all中占25%。目前，t-all/lbl的治疗仍然具有挑战性，其治愈率较低，复发率较高，即便进行异基因造血干细胞移植，整体生存率也有待提高；而新兴的免疫治疗，由于正常细胞和肿瘤细胞的免疫标志相似，在杀伤肿瘤的同时也容易杀伤自身细胞，因此限制了免疫治疗的应用。
2、为了明确诊断以及筛选合适的抗原标志进行t-all/lbl治疗后免疫残留的监测，以便提前预警并采取应对措施，需要进行免疫表型分析。而用于免疫表型分析的抗体组合需要满足以下要求：（1）能够识别幼稚t细胞，t细胞发源于胸腺，因此骨髓、外周血或除胸腺外的组织，只要发现携带幼稚抗原标志的幼稚t细胞，都属于异常；纵膈穿刺组织，也应该能够通过组合区分出正常和肿瘤性胸腺细胞。（2）能够根据免疫标志区分不同的成熟阶段进而分期，根据who分类，t-all分为4期：t-i （cd7+ pro-t）， t-ii（pre-t ）， t-iii（cd1a+皮质t），t-iv（cd4或cd8髓质t）。（3）能够识别急性早期前体t淋巴细胞白血病（earlyt-cellprecursor acute l
3、治疗后幼稚t细胞的设门也是一个挑战，通常应用cd45弱表达（cd45dim）、cd7和/或胞浆cd3（ccd3）联合低ssc（ssclow）对t细胞设门，ccd3需要破膜打孔，标记复杂，有些患者cd45表达较强，治疗后表达更强，导致幼稚与成熟t细胞不容易区分。而某些患者只是部分表达cd7，或经过car-t治疗后cd7缺失，这些情况都会导致幼稚t细胞难以精确识别。因此，抗体组合中需要包括其他设门抗原，并研究适用范围广、简单可行的t细胞设门方法。
4、目前，临床上要完成上述几项检测的目的，需要检测几十种抗体。目前常规10色（10c）t-all/lbl组合，经过初筛管1管10色组合检测后，进一步分析t-all/lbl时包括3管10色组合，共30个抗体。每管均包括重复性骨架抗体3个：cd45、cd7和cd5，最终有效检测抗体仅21个，致使总体抗体较多，成本高。而且，较多管检测难以精确分析不同管中所检测抗体之间的关系，影响了对细胞系别、分化发育模式及良恶性的判断。
5、因此，迫切需要设计一种有效的用于检测急性t淋巴细胞白血病/淋巴瘤免疫表型的多色抗体组合，以减少检测管数的同时增加抗体数量，提高检测效率，避免常规流式需要重复使用设门抗体的问题，减轻患者经济负担；同时，克服常规流式方法抗原发育模式受不同管限制的问题，提高分析的精细度、增加对肿瘤细胞的识别并提高临床检测水平。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于流式细胞检测急性t淋巴细胞白血病/淋巴瘤免疫表型的抗体组合及其应用，本专利技术的抗体组合的抗体数量多，且检测管数少，能够提高检测效率。
2、本专利技术提供了一种用于流式细胞检测急性t淋巴细胞白血病/淋巴瘤免疫表型的抗体组合，包括第一抗体组合；所述第一抗体组合包括以下抗体：抗cd99抗体、抗cd16抗体、抗cd45抗体、抗cd45ra抗体、抗cd5抗体、抗cd44抗体、抗cd57抗体、抗cd28抗体、抗cd7抗体、抗cd8抗体、抗cd65抗体、抗cd4抗体、抗hla-dr抗体、抗cd2抗体、抗cd1a抗体、抗cd13抗体、抗cd3抗体、抗cd123抗体、抗cd45ro抗体和抗cd25抗体；所述第一抗体组合在检测时用于1个流式管中。
3、优选的，所述抗体为荧光素标记的抗体；所述第一抗体组合中，抗cd99抗体、抗cd16抗体、抗cd45抗体、抗cd45ra抗体、抗cd5抗体、抗cd44抗体、抗cd57抗体、抗cd28抗体、抗cd7抗体、抗cd8抗体、抗cd65抗体、抗cd4抗体、抗hla-dr抗体、抗cd2抗体、抗cd1a抗体、抗cd13抗体、抗cd3抗体、抗cd123抗体、抗cd45ro抗体和抗cd25抗体的荧光素标记按顺序分别为：bv421、efluor v450、efluor v547、bv570、bv605、bv650、bv711、bv785、fitc、efluorb548、pe、pe/dazzle594、pe/cy5、percp/efluor710、pe/cy7、apc、efluor r668、efluorr720、apc/cy7和apc/fire810。
4、优选的，所述抗体组合还包括第二抗体组合；所述第二抗体组合包括抗细胞膜抗原抗体和抗细胞胞内抗原抗体；所述抗细胞膜抗原抗体由以下抗体组成：抗cd38、抗cd3、抗cd10、抗cd33、抗cd5、抗cd19、抗cd45、抗cd7、抗cd117、抗cd34、抗cd56和抗trbc1抗体；所述抗细胞胞内抗原抗体由以下抗体组成：抗ccd79a、抗clambda、抗ckappa、抗ccd22、抗ccd3、抗cmpo抗体和抗ntdt抗体；所述第二抗体组合在检测时用于1个流式管中。
5、优选的，所述抗体组合为第一抗体组合；所述第一抗体组合由以下抗体组成：抗cd99抗体、抗cd16抗体、抗cd45抗体、抗cd45ra抗体、抗cd5抗体、抗cd44抗体、抗cd57抗体、抗cd28抗体、抗cd7抗体、抗cd8抗体、抗cd65抗体、抗cd4抗体、抗hla-dr抗体、抗cd2抗体、抗cd1a抗体、抗cd13抗体、抗cd3抗体、抗cd123抗体、抗cd45ro抗体和抗cd25抗体。
6、优选的，所述抗体组合中的抗体为单克隆抗体本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于流式细胞检测急性T淋巴细胞白血病/淋巴瘤免疫表型的抗体组合，其特征在于，包括第一抗体组合；所述第一抗体组合包括以下抗体：抗CD99抗体、抗CD16抗体、抗CD45抗体、抗CD45RA抗体、抗CD5抗体、抗CD44抗体、抗CD57抗体、抗CD28抗体、抗CD7抗体、抗CD8抗体、抗CD65抗体、抗CD4抗体、抗HLA-DR抗体、抗CD2抗体、抗CD1a抗体、抗CD13抗体、抗CD3抗体、抗CD123抗体、抗CD45RO抗体和抗CD25抗体；所述第一抗体组合在检测时用于1个流式管中。
2.根据权利要求1所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体为荧光素标记的抗体；所述第一抗体组合中，抗CD99抗体、抗CD16抗体、抗CD45抗体、抗CD45RA抗体、抗CD5抗体、抗CD44抗体、抗CD57抗体、抗CD28抗体、抗CD7抗体、抗CD8抗体、抗CD65抗体、抗CD4抗体、抗HLA-DR抗体、抗CD2抗体、抗CD1a抗体、抗CD13抗体、抗CD3抗体、抗CD123抗体、抗CD45RO抗体和抗CD25抗体的荧光素标记按顺序分别为：BV421、eFluor V450、eFlu
3.根据权利要求1或2所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体组合还包括第二抗体组合；所述第二抗体组合包括抗细胞膜抗原抗体和抗细胞胞内抗原抗体；所述抗细胞膜抗原抗体由以下抗体组成：抗CD38、抗CD3、抗CD10、抗CD33、抗CD5、抗CD19、抗CD45、抗CD7、抗CD117、抗CD34、抗CD56和抗TRBC1抗体；所述抗细胞胞内抗原抗体由以下抗体组成：抗cCD79a、抗cLambda、抗cKappa、抗cCD22、抗cCD3、抗cMPO抗体和抗nTdT抗体；所述第二抗体组合在检测时用于1个流式管中。
4.根据权利要求1或2所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体组合为第一抗体组合；所述第一抗体组合由以下抗体组成：抗CD99抗体、抗CD16抗体、抗CD45抗体、抗CD45RA抗体、抗CD5抗体、抗CD44抗体、抗CD57抗体、抗CD28抗体、抗CD7抗体、抗CD8抗体、抗CD65抗体、抗CD4抗体、抗HLA-DR抗体、抗CD2抗体、抗CD1a抗体、抗CD13抗体、抗CD3抗体、抗CD123抗体、抗CD45RO抗体和抗CD25抗体。
5.根据权利要求1或2所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体组合中的抗体为单克隆抗体。
6.一种用于流式细胞检测急性T淋巴细胞白血病/淋巴瘤免疫表型的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1~5任意一项所述的抗体组合；当所述抗体组合包括第一抗体组合和第二抗体组合时，所述第一抗体组合和第二抗体组合独立包装。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：红细胞裂解液和缓冲液PBS。
8.一种用于流式细胞检测急性T淋巴细胞白血病/淋巴瘤免疫表型的系统，其特征在于，包括检测部分和分析部分；所述检测部分包括权利要求1~5任意一项所述的抗体组合或者权利要求6或7所述试剂盒，用于通过流式细胞术检测待测个体的抗原表达水平；分析部分，用于分析检测部分的检测结果。
9.根据权利要求8所述的系统，其特征在于，利用权利要求1~5任意一项所述的抗体组合或者权利要求6或7所述试剂盒对待测样本进行处理后制备流式细胞上机样品；进行流式细胞上机检测；其中流式细胞上机检测时按照以下方式设门：使用FSC的面积和高度设置去双连体细胞门A，使用SSC-A/SSC-B继续去黏连设门B，使用FSC-A/ SSC-A设置活细胞门R1，去除碎片和死细胞；R1门内常规使用CD45/SSC散点图设置血细胞门；所述血细胞门包括淋巴细胞门、粒细胞门、单核细胞门和有核红细胞门。
10.权利要求1~5任意一项所述抗体组合或者权利要求6或7所述的试剂盒或者权利要求8或9所述的系统在制备急性T淋巴细胞白血病/淋巴瘤检测相关产品中的应用；所述急性T淋巴细胞白血病/淋巴瘤检测包括（1）~（7）中的一个或几个方面：（1）急性T淋巴细胞白血病/淋巴瘤治疗靶点和/或异常表型筛查；（2）急性T淋巴细胞白血病/淋巴瘤诊断；（3）幼稚T细胞检测；（4）急性T淋巴细胞白血病分期；（5）急性早期前体T淋巴细胞白血病筛查；（6）急性T淋巴细胞白血病/淋巴瘤治疗后标志筛选和/或残留白血病细胞监测；（7）淋巴细...
【技术特征摘要】
1.一种用于流式细胞检测急性t淋巴细胞白血病/淋巴瘤免疫表型的抗体组合，其特征在于，包括第一抗体组合；所述第一抗体组合包括以下抗体：抗cd99抗体、抗cd16抗体、抗cd45抗体、抗cd45ra抗体、抗cd5抗体、抗cd44抗体、抗cd57抗体、抗cd28抗体、抗cd7抗体、抗cd8抗体、抗cd65抗体、抗cd4抗体、抗hla-dr抗体、抗cd2抗体、抗cd1a抗体、抗cd13抗体、抗cd3抗体、抗cd123抗体、抗cd45ro抗体和抗cd25抗体；所述第一抗体组合在检测时用于1个流式管中。
2.根据权利要求1所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体为荧光素标记的抗体；所述第一抗体组合中，抗cd99抗体、抗cd16抗体、抗cd45抗体、抗cd45ra抗体、抗cd5抗体、抗cd44抗体、抗cd57抗体、抗cd28抗体、抗cd7抗体、抗cd8抗体、抗cd65抗体、抗cd4抗体、抗hla-dr抗体、抗cd2抗体、抗cd1a抗体、抗cd13抗体、抗cd3抗体、抗cd123抗体、抗cd45ro抗体和抗cd25抗体的荧光素标记按顺序分别为：bv421、efluor v450、efluor v547、bv570、bv605、bv650、bv711、bv785、fitc、efluor b548、pe、pe/dazzle594、pe/cy5、percp/efluor710、pe/cy7、apc、efluor r668、efluor r720、apc/cy7和apc/fire810。
3.根据权利要求1或2所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体组合还包括第二抗体组合；所述第二抗体组合包括抗细胞膜抗原抗体和抗细胞胞内抗原抗体；所述抗细胞膜抗原抗体由以下抗体组成：抗cd38、抗cd3、抗cd10、抗cd33、抗cd5、抗cd19、抗cd45、抗cd7、抗cd117、抗cd34、抗cd56和抗trbc1抗体；所述抗细胞胞内抗原抗体由以下抗体组成：抗ccd79a、抗clambda、抗ckappa、抗ccd22、抗ccd3、抗cmpo抗体和抗ntdt抗体；所述第二抗体组合在检测时用于1个流式管中。
4.根据权利要求1或2所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体组合为第一抗体组合；所述第一抗体组合由以下抗体组成：抗cd99抗体、抗cd16抗体、抗cd45抗体、抗cd45ra抗体、抗cd5抗体、抗cd44...
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