【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及三重荧光rt-lamp鉴别h3、n2和n8亚型禽流感病毒的引物组合物及其方法。
技术介绍
1、禽流感病毒(avian influenza virus，aiv)由8个分节段rna组成，分别编码pb2、pb1、pa、ha、np、na、m和ns蛋白。根据aiv表面的糖蛋白血凝素(hemagglutinin，ha)和神经氨酸酶(neuraminidase，na)，aiv可以分为18个ha亚型和11个na亚型。其中h3亚型aiv中的h3n2和h3n8亚型aiv占主导地位。禽源h3n2亚型aiv的ha和pb1片段与人源h2n2流感病毒其余六个片段重组导致了1968年h3n2流感病毒的大流行。坚持对h3n2亚型aiv的监测对人流感的演化有着重大意义。还有研究表明h3n8亚型aiv已经具有与人类受体结合的能力，近年来也发生了几例h3n8亚型aiv直接感染人的病例，考虑到大流行的可能性，必须在家禽群和环境中对h3n8亚型aiv进行全面监测，并密切监测家禽到人的传播。目前aiv主要的检测方法有病原分离鉴定、rt-pcr和荧光定量rt-pcr，这些方法在日常诊断中分别存在一些缺陷，如耗费时间长、敏感性低、需要精密仪器，这些方法均不适用于条件差的养殖场和实验室。
2、2000年，notomi t等专利技术的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermalamplification，lamp)方便、灵敏、快捷。lamp方法不需要精密的热循环仪器，只需要采用链置换dna聚合酶(bst dna聚合酶
3、目前已有巢式pcr、rt-pcr、lamp、荧光pcr等检测h3亚型aiv的方法，还未见有同时检测h3、n2和n8亚型aiv三种病原的检测方法报道，本研究建立的trt-lamp旨在为实现快速、准确、特异的鉴别检测h3、n2和n8亚型aiv提供一种新技术支撑，对有效监测和防控h3、n2和n8亚型aiv有重大意义。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的问题为如何鉴别h3亚型aiv、n2亚型aiv和n8亚型aiv。
2、为了解决以上问题，本专利技术提供了一种鉴别禽流感病毒h3、n2和n8亚型的引物探针组合物。
3、本专利技术提供的鉴别禽流感病毒h3、n2和n8亚型的引物探针组合物由引物探针组a、引物探针组b和引物探针组c组成；
4、其中所述引物探针组a由引物h3-f3、引物h3-b3、引物h3-fip、引物h3-bip、引物h3-loop f、引物h3-loop b和探针h3-fd、h3-fip*组成；
5、所述引物h3-f3为如下(b1)或(b2)：
6、(b1)序列表的序列1所示的单链dna分子；
7、(b2)将序列1经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的dna分子；
8、所述引物h3-b3为如下(b3)或(b4)：
9、(b3)序列表的序列2所示的单链dna分子；
10、(b4)将序列2经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的dna分子；
11、所述引物h3-fip为如下(b5)或(b6)：
12、(b5)序列表的序列3所示的单链dna分子；
13、(b6)将序列3经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的dna分子；
14、所述引物h3-bip为如下(b7)或(b8)：
15、(b7)序列表的序列4所示的单链dna分子；
16、(b8)将序列4经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的dna分子；
17、所述引物h3-loop f为如下(b5)或(b6)：
18、(b9)序列表的序列5所示的单链dna分子；
19、(b10)将序列5经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的dna分子；
20、所述引物h3-loop b为如下(b7)或(b8)：
21、(b11)序列表的序列6所示的单链dna分子；
22、(b12)将序列6经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的dna分子；
23、所述探针h3-fd为核苷酸序列是序列表的序列7所示的单链dna分子的第1至19位的反向互补的dna分子；
24、所述探针h3-fip*为核苷酸序列是序列表的序列8所示的单链dna分子；
25、所述引物探针组b由引物n2-f3、引物n2-b3、引物n2-fip、引物n2-bip、引物n2-loop f、引物n2-loop b和探针n2-fd、n2-fip*组成；
26、所述引物n2-f3为如下(c1)或(c2)：
27、(c1)序列表的序列9所示的单链dna分子；
28、(c2)将序列9经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列9具有相同功能的dna分子；
29、所述引物n2-b3为如下(c3)或(c4)：
30、(c3)序列表的序列10所示的单链dna分子；
31、(c4)将序列10经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列10具有相同功能的dna分子；
32、所述引物n2-fip为如下(c5)或(c6)：
33、(c5)序列表的序列11所示的单链dna分子；
34、(c6)将序列11经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的dna分子；
35、所述引物n2-bip为如下(c7)或(c8)：
36、(c7)序列表的序列12所示的单链dna分子；
37、(c8)将序列12经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的dna分子；
38、所述引物h3-loop f为如下(b5)或(b6)：
39、(c9)序列表的序列13所示的单链dna分子；
40、(c10)将序列13经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的dna分子；
41、所述引物h3-loop b为如下(b7)或(b8)：
42、(c11)序列表的序列14所示的单链dna分子；
43、(c12)将序列14经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.鉴别禽流感病毒H3、N2和N8亚型的引物探针组合物，其特征在于，
2.如权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，
3.如权利要求1或2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物的组成如下：所述引物探针组A中含有0.1μM所述H3-F3、0.1μM所述H3-B3、0.8μM所述H3-BIP，0.1μM所述H3-FD-FIP*，0.1μM所述H3-FIP*，0.6μM所述H3-FIP，0.2μM所述H3-Loop F和H3-LoopB；所述引物探针组B中含有0.1μM N2-F3、0.1μM所述N2-B3、0.8μM所述N2-BIP，0.1μM所述N2-FD-FIP*-FD，0.1μM所述N2-FIP*，0.6μM所述N2-FIP，0.2μM所述N2-Loop F和N2-Loop B；所述引物探针组C中含有0.1μM所述N8-F3、0.1μM所述N8-B3、0.8μM所述N8-BIP，0.1μM所述N8-FD-FIP*-FD，0.1μM所述N8-FIP*，0.6μM所述N8-FIP，0.2μM所述N8-Loop F和N8-Loop B。>
4.权利要求1所述引物组合物在制备试剂盒中的应用，所述试剂盒的用途为如下任一种：
5.含有权利要求1所述引物组合物的试剂盒，所述试剂盒的用途为如下任一种：
6.权利要求5所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。
7.一种鉴定或辅助鉴定待测样本是否感染禽流感病毒H3、N2和/或N8亚型的方法，包括如下步骤：
8.一种鉴定或辅助鉴定待测病原为禽流感病毒H3、N2和/或N8亚型的方法，包括如下步骤：
9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述逆转录环介导等温扩增和环介导等温扩增均在一个PCR体系中进行，所述PCR体系中所述反应体系及引物探针组合物的含量满足如下条件：
10.权利要求1所述引物组合物在如下任一种中的应用：
...【技术特征摘要】
1.鉴别禽流感病毒h3、n2和n8亚型的引物探针组合物，其特征在于，
2.如权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，
3.如权利要求1或2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物的组成如下：所述引物探针组a中含有0.1μm所述h3-f3、0.1μm所述h3-b3、0.8μm所述h3-bip，0.1μm所述h3-fd-fip*，0.1μm所述h3-fip*，0.6μm所述h3-fip，0.2μm所述h3-loop f和h3-loopb；所述引物探针组b中含有0.1μm n2-f3、0.1μm所述n2-b3、0.8μm所述n2-bip，0.1μm所述n2-fd-fip*-fd，0.1μm所述n2-fip*，0.6μm所述n2-fip，0.2μm所述n2-loop f和n2-loop b；所述引物探针组c中含有0.1μm所述n8-f3、0.1μm所述n8-b3、0.8μm所述n8-bip，0.1μm所述n8-fd...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄青红，谢芝勋，李孟，李丹，罗思思，张民秀，谢丽基，余丹，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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