【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抑制aurka基因表达的sirna及其缀合物和用途，属于生物医药领域。
技术介绍
1、肺癌大致可以分为非小细胞肺癌（nsclc）和小细胞肺癌（sclc）两大类，其中小细胞肺癌约占所有肺癌的15～20%。小细胞肺癌的恶性程度高，病情发展快，发病不久就可能出现远端转移，部分患者从确诊疾病到生命结束仅3-6个月，5年生存率仅5%左右。sclc约占肺癌总数的15%，它可以分为局限期（ls-sclc）和广泛期（es-sclc）两类。局限期意味着癌症仅局限于一侧肺，并且可能会存在于胸腔同侧的淋巴结里。如果癌症扩散到另一侧肺、胸腔另一侧的淋巴结或远处器官，则被称为广泛期。大多数患者在确诊时已经处于广泛期或者无法切除的局限期，很少有患者能够通过手术被治愈。不论患者处于什么阶段，全身性铂基化疗是治疗sclc的主要手段。虽然sclc对铂基化疗很敏感，患者缓解率能够达到50%-90%，然而疾病复发和迅速进展非常常见，因此对于sclc的治疗当前尚无特效药物。
2、在绝大多数sclc病例中发现p53和rb（分别由tp53和rb1编码）这两种肿瘤抑制因子同时失活。rb是一种抑癌基因，在小细胞肺癌 （sclc） 细胞中突变率超过90%。在五年生存率不足10%的小细胞肺癌患者中，近60%都有rb基因缺失。微管蛋白stathmin在rb1缺陷的细胞中被高度上调，其诱导了不平衡的微管动力学。aurka是一种微管不稳定剂，也是aurka抑制磷酸化的底物。因此抑制aurka活性，可以激活抑丝蛋白，进而强烈促进rb1缺陷肿瘤细胞中的微管解聚，以
3、rna干扰（rna interference，缩写为rnai）是指一种分子生物学上由双链rna诱发的基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的转录或翻译来抑制基因表达。当细胞中导入与内源性信使rna（messenger rna，缩写为mrna）编码区同源的双链rna时，该mrna发生降解而导致基因表达沉默。长度为20-25nt的小干扰rna（small interfering rna，sirna）能够引发rnai，可以特异性下调或关闭特定基因的表达，并具备高效性、易合成和易操作等特点，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。
4、然而，能否将rna干扰用于sclc治疗是未知的，以及其在sclc中的作用机理亦是不明晰的。因此，亟待通过rna干扰技术，以期对sclc实现有效的缓解和治疗。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供了抑制aurka基因表达的sirna及其缀合物和用途，目的在于对aurka设计相应sirna，通过对肿瘤细胞的aurka mrna进行干扰，可有效减少aurka蛋白的表达，通过合成致死效应导致rb1基因缺失或失活的肿瘤细胞死亡，进而起到治疗肿瘤的作用。
2、本专利技术提供的第一个技术方案为一种抑制aurka基因表达的sirna，所述sirna含有正义链和反义链，所述sirna中的每个核苷酸各自独立地为修饰或未修饰的核苷酸，其中，所述正义链含有核苷酸序列i，反义链含有核苷酸序列ii，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii至少部分地反向互补形成双链区，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii选自如下（a）~（n）所示序列中的任一组：
3、（a）所述核苷酸序列i与seq id no.1所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异，且所述核苷酸序列ii与seq id no.16所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异：
4、seq id no.1：5’- cagcaauuuccuugucagaau-3’；
5、seq id no.16：5’- ucugacaaggaaauugcugag-3’；
6、（b）所述核苷酸序列i与seq id no.2所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异，且所述核苷酸序列ii与seq id no.17所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异：
7、seq id no.2：5’- ggcuuuggaagacuuugaa-3’；
8、seq id no.17：5’- uucaaagucuuccaaagcc -3’；
9、（c）所述核苷酸序列i与seq id no.3所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异，且所述核苷酸序列ii与seq id no.18所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异：
10、seq id no.3：5’- aggaaaguuugguaauguuua-3’；
11、seq id no.18：5’- aacauuaccaaacuuuccuuu-3’；
12、（d）所述核苷酸序列i与seq id no.4所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异，且所述核苷酸序列ii与seq id no.19所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异：
13、seq id no.4：5’- gaaaguuugguaauguuuauu-3’；
14、seq id no.19：5’- uaaacauuaccaaacuuuccu-3’；
15、（e）所述核苷酸序列i与seq id no.5所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异，且所述核苷酸序列ii与seq id no.20所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异：
16、seq id no.5：5’- ggaguggagcaucagcucaga-3’；
17、seq id no.20：5’- ugagcugaugcuccacuccgg-3’；
18、（f）所述核苷酸序列i与seq id no.6所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异，且所述核苷酸序列ii与seq id no.21所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异：
19、seq id no.6：5’- gcaucagcucagaagagaagu-3’；
20、seq id no.21：5’- uucucuucugagcugaugcuc-3’；
21、（g）所述核苷酸序列i与seq id no.7所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异，且所述核苷酸序列ii与seq id no.22所示的核苷酸序列长度相等，且任选具有不多于3个核苷酸差异：
22、seq id no.7：5’- gagucuaccuaauucuggaau-3’；
23、seq id no.22：5’- uccagaauuagguagacucug-3’；
24、（h）所述核苷酸序列i与seq id no.8所示的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抑制AURKA基因表达的siRNA，其特征在于，所述siRNA含有正义链和反义链，所述siRNA中的每个核苷酸各自独立地为修饰或未修饰的核苷酸，其中，所述正义链含有核苷酸序列I，反义链含有核苷酸序列II，所述核苷酸序列I和所述核苷酸序列II至少部分地反向互补形成双链区，所述核苷酸序列I和所述核苷酸序列II选自如下（a）~（n）所示序列中的任一组：
2.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述正义链或所述反义链中的至少一个核苷酸为修饰的核苷酸。
3.根据权利要求2所述的siRNA，其特征在于，所述正义链或所述反义链中的至少一个核苷酸为核糖基2’位的羟基被修饰的核苷酸或核苷酸类似物中的一种。
4.根据权利要求3所述的siRNA，其特征在于，所述核糖基2’位的羟基被修饰的核苷酸选自2’-O-甲基、2’-O-甲氧基乙基(2’-O-MOE)、2’-O-氨基丙基、2’-脱氧、T-脱氧-2’-氟代、2’-O-氨基丙基(2’-O-AP)、2’-O-二甲基氨基乙基(2’-O-DMAOE)、2 '-O-二甲基氨基丙基(2’-ODMAP)、T-O-二
5.根据权利要求3所述的siRNA，其特征在于，所述核苷酸类似物为异核苷酸、LNA、ENA、cET BNA、UNA和GNA中的一种。
6.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述正义链或所述反义链中的至少一个磷酸酯基为具有修饰基团的磷酸酯基。
7.根据权利要求6所述的siRNA，其特征在于，所述具有修饰基团的磷酸酯基为磷酸酯基中的磷酸二酯键中的至少一个氧原子被硫原子取代而形成的硫代磷酸酯基。
8.根据权利要求1~7任一项所述的siRNA，其特征在于，所述siRNA选自下表：
9.一种siRNA缀合物，其特征在于，所述siRNA缀合物含有权利要求1~8所述的siRNA以及缀合连接至该siRNA的缀合基团；所述缀合基团包含药学上可接受的靶向基团和接头，并且，所述siRNA、所述接头和所述靶向基团依次共价或非共价连接。
10.一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1~8任一项所述的siRNA和/或权利要求9所述的siRNA缀合物和药学上可接受的载体。
11.权利要求1~8任一项所述的siRNA，或权利要求9所述的siRNA缀合物，或权利要求10所述的药物组合物在制备用于治疗由AURKA基因表达引起的疾病的药物中的应用。
12.权利要求1~8任一项所述的siRNA，或权利要求9所述的siRNA缀合物，或权利要求10所述的药物组合物在制备缓解和/或治疗小细胞肺癌的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种抑制aurka基因表达的sirna，其特征在于，所述sirna含有正义链和反义链，所述sirna中的每个核苷酸各自独立地为修饰或未修饰的核苷酸，其中，所述正义链含有核苷酸序列i，反义链含有核苷酸序列ii，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii至少部分地反向互补形成双链区，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii选自如下（a）~（n）所示序列中的任一组：
2.根据权利要求1所述的sirna，其特征在于，所述正义链或所述反义链中的至少一个核苷酸为修饰的核苷酸。
3.根据权利要求2所述的sirna，其特征在于，所述正义链或所述反义链中的至少一个核苷酸为核糖基2’位的羟基被修饰的核苷酸或核苷酸类似物中的一种。
4.根据权利要求3所述的sirna，其特征在于，所述核糖基2’位的羟基被修饰的核苷酸选自2’-o-甲基、2’-o-甲氧基乙基(2’-o-moe)、2’-o-氨基丙基、2’-脱氧、t-脱氧-2’-氟代、2’-o-氨基丙基(2’-o-ap)、2’-o-二甲基氨基乙基(2’-o-dmaoe)、2 '-o-二甲基氨基丙基(2’-odmap)、t-o-二甲基氨基乙氧基乙基(2’-o-dmaeoe)或2’-o-n-甲基乙酰胺基(2’-o-nma)修饰的核苷酸。
5.根据权利要求3所述的sirna，其特征在于，所述核苷酸类似物为异核苷酸、lna、...
【专利技术属性】
技术研发人员：张昱，朱美吉，崔文浩，张晨光，蒋巧兰，
申请(专利权)人：佑嘉杭州生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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