乙型肝炎病毒前S1抗原化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明专利技术提供了一种乙型肝炎病毒前Ｓ１抗原测定试剂盒及其制备方法。根据本发明专利技术的试剂盒包括：１）乙肝病毒前Ｓ１抗原校准品；２）亲和素化的载体；３）生物素化的乙肝病毒前Ｓ１单克隆抗体；４）吖啶酯标记的抗－ＨＢｓ单克隆抗体；５）化学发光启动剂；以及６）浓缩洗涤液。进一步，根据本发明专利技术制备上述试剂盒的方法包括以下步骤：１）以乙肝病毒前Ｓ１纯品配制校准品；２）以亲和素包被载体；３）使乙肝病毒前Ｓ１单抗生物素化；４）以吖啶酯标记抗－ＨＢｓ单抗；５）配制化学发光启动剂；６）配制浓缩洗涤液；７）分装上述校准品、生物素化抗体、吖啶酯标记物、化学发光启动剂和浓缩洗涤液；以及８）组装为成品。本发明专利技术的试剂盒具有简便、快速、灵敏、稳定等优点。

Reagent kit for chemiluminescence immunoassay for detecting hepatitis B Virus Pre S1 antigen and preparation method thereof

The invention relates to the field of immunoassay medical science, in particular, the present invention provides a hepatitis B Virus Pre S1 antigen determination reagent kit and a preparation method thereof. According to the kit of the invention includes: 1) hepatitis B virus S1 antigen calibrator; 2) the biotinylated affinity carrier; 3) hepatitis B virus biotinylated S1 monoclonal antibody; 4) anti HBs monoclonal antibody labeled acridinium ester; 5) chemiluminescence promoter; and 6) concentrated washing liquid. Further, the preparation method of the invention of the kit includes the following steps: 1) with hepatitis B virus S1 pure preparation calibrator; 2) with streptavidin labeled carrier; 3) the hepatitis B virus S1 antibody biotin; 4) with acridine ester labeled anti HBs monoclonal antibody preparation; 5) chemiluminescence promoter; 6) preparation of concentrated washing liquid; 7) packing the calibrator, biotinylated antibody, acridine ester chemiluminescence marker, initiating agent and condensed washing liquid; and 8) assembled into finished products. The kit has the advantages of simplicity, fast, sensitivity, stability and the like.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫分析医学领域，具体地，本专利技术提供了一种乙型肝炎病毒前Sl抗原测定试剂盒及其制备方法，结合了生物素一亲和素间接包被技术和化学发光免疫分析技术。
技术介绍
乙型肝炎病毒属嗜肝病毒家族，可引起急性肝炎、慢性肝炎和肝硬化，而且 和肝癌的发生密切相关。中国是乙型肝炎的高流行区，但目前尚无有效的抗病毒 方法治疗乙型肝炎病毒慢性感染，因此病毒的预防和检测就是避免感染的重要手 段，对病毒感染的动态监测也能为乙肝的发展、预后提供重要的信息。乙肝病毒表面抗原是乙型肝炎病毒的外膜蛋白，由乙型肝炎病毒基因组的s区所编码。乙型肝炎病毒表面抗原依靠三个启动子进行表达后，产物分别为大蛋白(LHBs，包括前S1，前S2和S);中蛋白(MHBs，包括前S2和S);小蛋白 (SHBs，包括S)，我们通常检测的乙肝表面抗原实际指的是小蛋白(SHBs)。 乙型肝炎病毒可以分泌三种病毒颗粒小球形颗粒(直径约22nm)，主要由 MHBs禾n SHBs组成，管状颗粒(直径约22nm,长度约100-1000nm)，由LHBs， MHBs和SHBs组成；Dane颗粒，其外膜结构蛋白组成与管状颗粒一致，Dane颗 粒包含有乙型肝炎病毒DNA。完整病毒颗粒外膜的组成依赖于LHBs， MHBs和 SHBs三种蛋白的共同作用，而在LHBs缺失的情况下，后两者只能形成小球形颗 粒，因此LHBs的表达实际上起着调节病毒外膜组装能力的作用。只有当LHBs 蛋白表达达到一定的量时，病毒颗粒才能以有包膜的形式(包括管状颗粒和Dane 颗粒)被释放。因此，检测LHBs，实际反应的是体内管状颗粒和Dane颗粒的实 际水平，由于Dane颗粒代表着病毒基因在血液中的实际存在，因此LHBs的存在实际上不仅因意味着病毒基因，也代表着无病毒基因管状颗粒形式的存在。而临 床的慢性肝炎病人中，血液中和肝细胞中都有管状颗粒，其浓度甚至是真病毒颗 粒的上万倍。因此可以根据检测血液中LHBS的含量，判断病毒携带者体内的乙 型肝炎病毒是否进行复制。近年来，临床开始出现前Sl抗原诊断试剂盒，其利用单独表达前Sl片段制 备单克隆抗体，进行免疫学检测血清中前S1蛋白的存在，但是临床数据显示这种 试剂盒存在诸多不足，最显著的就是漏检，临床已经发现大量PCR检测乙型肝炎 病毒DNA阳性的标本使用前Sl抗原诊断试剂盒检测是阴性。化学发光免疫分析技术是把高灵敏的化学发光分析方法和特异性强的免疫分 析方法相结合发展起来的一项新的免疫分析技术。利用双抗体夹心法检测乙型肝 炎病毒前Sl抗原，具有极高的特异性，可以迅速的从血清中高度特异的识别相 应的抗原。单纯利用物理吸附把单克隆抗体包被到固相上(塑料管，磁颗粒等) 会存在单抗用量大、活性损失大、批间批内精密性差等缺点，而且工艺优化较为 繁琐，而将亲和素包被于固相载体上，使捕获抗体生物素化，以上问题即可迎刃 而解而且生产过程更易于监控，本专利技术利用亲和素固相，与生物素化单抗和待测 样本中前Sl抗原反应形成固相亲和素-生物化抗体-前Sl抗原复合物，再与吖啶酯 标记的抗-HBs反应形成固相亲和素-生物素化抗体-前Sl抗原-吖啶酯标记抗-HBs 夹心复合物，然后加入化学发光启动剂，利用化学发光仪检测相对发光强度，就 可以定量分析反映血清中乙型肝炎病毒前Sl的含量，进而体现乙型肝炎病毒的 感染水平。本专利技术的目的正是为了解决目前临床上用前Sl单克隆抗体作为乙型肝炎大蛋 白指标检测手段的不足，本专利技术的乙型肝炎病毒前Sl化学发光测定试剂盒，经 临床实验证明，操作简便，灵敏度高，特异性好，与PCR检测乙型肝炎病毒DNA 结果符合度极高，提高了乙型肝炎病毒大蛋白前S区的检出率，辅助临床在蛋白 水平上观察病毒复制的水平，为尽早采取有效综合治疗方案，预防肝硬化和肝癌的发生。另外，现有技术中的化学发光免疫分析试剂盒为封闭式全自动化学发光测量 系统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法广泛地应 用于临床诊断和科研工作。本专利技术的试剂盒采用化学发光免疫分析技术结合生物 素-亲和素系统，既可应用于开放式的半自动化学发光测量仪，也可用于全自动的 测量系统，可实现大批量快检测，使用成本低，更易推广应用。
技术实现思路
本专利技术将生物素-亲和素间接包被技术结合化学发光技术与乙型肝炎病毒前 Sl的免疫分析学有效地结合，提供了一种能够简便、快速、灵敏、稳定地检测乙 型肝炎病毒前Sl的试剂盒及其制备方法，该试剂盒适于在产业上有效地推广应用。本专利技术的目的是提供一种生物素-亲和素间接包被技术结合化学发光免疫分析测定乙型肝炎病毒前Sl的试剂盒。本专利技术的再一目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。本专利技术的试剂盒包括 1)乙型肝炎病毒前S1抗原校准品；2)亲和素化的固相载体；3)生物素化的乙 型肝炎病毒前S1单克隆抗体；4)吖啶酯标记的抗-HBs单克隆抗体；5)上述吖 啶酯发光所需的化学发光启动剂；以及6)浓縮洗涤液。根据本专利技术的试剂盒，其中，所述亲和素化的固相载体为塑料管、塑料珠或 磁性颗粒。根据本专利技术的试剂盒，其中，所述化学发光启动剂为过氧化脲或过氧化氢。根据本专利技术的试剂盒，其中，所述浓縮洗涤液的配方为含16MNaCl、 0.4% KC1的0.2M pH7.4 Tris-HCl缓冲液。本专利技术还提供了上述试剂盒的制备方法，包括以下步骤1) 以乙型肝炎病毒前Sl纯品配制乙型肝炎病毒前Sl校准品；2) 以亲和素包被固相载体；3) 使乙型肝炎病毒前S1单克隆抗体生物素化；4) 用吖啶酯标记抗-HBs单克隆抗体；5) 配制化学发光启动剂；6) 配制浓縮洗涤液；7) 分装上述乙型肝炎病毒前Sl校准品、生物素化的乙型肝炎病毒Sl单克 隆抗体、吖啶酯标记的抗-HBs单克隆抗体、化学发光启动剂和浓缩洗涤液；以及8) 组装为成品。根据本专利技术的方法，其中，所述亲和素包被固相载体的步骤2)采用以 下方法用0.046M pH值为4.6的柠檬酸冲液配制成所需浓度的亲和素包被液， 并将包被液负载于固相载体上；经生理盐水洗涤、BSA封闭，抽湿干燥后用 铝箔袋密封。根据本专利技术的方法，其中，所述亲和素包被的固相载体为塑料管、塑料 珠或磁性颗粒。根据本专利技术的方法，其中，所述化学发光启动剂为过氧化脲或过氧化氢。根据本专利技术的方法，其中，所述浓縮洗涤液的配方为含16。/。Naa、 0.4% KC1的0.2M pH7.4 Tris-HCl缓冲液。本专利技术的乙型肝炎病毒前Sl化学发光免疫分析测定试剂盒可以准确的诊 断出乙型肝炎病毒的复制感染情况。本专利技术的试剂盒显示出极高的灵敏度，没有 交叉反应，特异性良好，便于产业化及质量控制。该试剂盒可以根据乙型肝炎病 毒前Sl含量的多少判断治疗效果及其病情的变化，具有简便、快速、灵敏、稳定 等优点。该乙型肝炎病毒前Sl测定试剂盒(化学发光法)的各项指标均达到酶 联免疫分析试剂盒的分析法水平。本专利技术的试剂盒应用过氧化脲或过氧化氢在碱性条件下启动吖啶酯化 学发光，通过检测吖啶酯产生的光信号代替酶联免疫分析中的显色底物，因 而具有与酶联免疫分析同等的特异性，而临床符合率大大提高。并且，本专利技术以吖啶酯标记抗-HBs单克隆抗体检测样本中的前Sl抗原， 避免了酶免试剂存在的灵敏度低、反应易受温度和酸碱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乙型肝炎病毒前Ｓ１抗原化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：　１）乙型肝炎病毒前Ｓ１抗原校准品；　２）亲和素化的固相载体；　３）生物素化的乙型肝炎病毒前Ｓ１单克隆抗体；　４）吖啶酯标记的抗－ＨＢ ｓ单克隆抗体；　５）上述吖啶酯发光所需的化学发光启动剂；以及　６）浓缩洗涤液。

【技术特征摘要】
1、一种乙型肝炎病毒前S1抗原化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括1)乙型肝炎病毒前S1抗原校准品；2)亲和素化的固相载体；3)生物素化的乙型肝炎病毒前S1单克隆抗体；4)吖啶酯标记的抗-HBs单克隆抗体；5)上述吖啶酯发光所需的化学发光启动剂；以及6)浓缩洗涤液。2、 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述亲和素化的固相载体为塑 料管、塑料珠或磁性颗粒。3、 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光启动剂为过 氧化脲或过氧化氢。4、 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述浓縮洗涤液的配方 为含16% NaCl、 0.4% KC1的0.2M pH7.4 Tris-HCl缓冲液。5、 一种制备权利要求1所述试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤1) 以乙型肝炎病毒前S1纯品配制乙型肝炎病毒前S1校准品；2) 以亲和素包被固相载体；3) 使乙型肝炎病毒前S1单克隆抗体生物素化；4)...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭京胜，应希堂，胡国茂，唐宝军，于尚永，
申请(专利权)人：北京科美东雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]