【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析检测，具体涉及一种基于hplc-elsd特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法。
技术介绍
1、香加皮(periplocae cortex)为萝蘼科植物杠柳periploca sepiumbge.的干燥根皮，具有利水消肿，祛风湿，强筋骨的作用，临床用于下肢浮肿，心悸气短，风寒湿痹，腰膝酸软。作为“治水和剂”，香加皮在心系和肾系疾病的治疗中应用较多。
2、香加皮是常用中药，收载于中国药典2020年版中，其原植物杠柳一般栽培后4～5年采收，10年以上产量和质量较好。由于生长年限较长，香加皮资源较为紧张，目前市场上香加皮除了与地骨皮和五加皮混淆使用外，还发现以茎皮违规混充根皮使用的情况。香加皮茎皮无药用记载，其化学成分研究较少，药理及毒性情况未知，因此，以茎皮混充根皮使用会对临床有效性和安全性带来较大风险。
3、作为杠柳的不同部位，茎皮和根皮的外观相似，使用常规的经验鉴别难以区分。另茎皮和根皮具有同源特性，化学成分存在相似性，目前中国药典等参考文献收载的方法亦无法区分香加皮茎皮和根皮。因此，寻求一种专属的方法用于识别杠柳茎皮混充中药香加皮使用显得尤为重要。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是克服
技术介绍
的技术缺陷，提供一种基于hplc-elsd特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法。本专利技术的目的是为了快速区分和准确识别中药香加皮中掺伪杠柳茎皮的问题；本专利技术开发出一种基于hplc-elsd区分中药香加皮与杠柳茎皮的
2、本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
3、一种基于hplc-elsd特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，包括如下步骤：
4、(1)参照物溶液制备：取绿原酸、杠柳毒苷、periplocoside s-4a、glycoside h2、periplocoside h1参照物，精密称定，加醇试剂溶解，得参照物溶液；
5、(2)供试品溶液制备：取供试品药材，精密称定，用醇试剂提取，得供试品溶液；
6、(3)测定：采用hplc-elsd采集参照物溶液及供试品溶液色谱图；
7、(4)结果判定：若样品检出与参照物溶液相对应的5个特征峰，未检出以绿原酸为s峰，相对保留时间为1.04～1.16，以log值计，相对峰面积大于0.2的特征峰，则样品为香加皮正品；
8、若样品检出与参照物溶液相对应的5个特征峰，同时检出以绿原酸为s峰，相对保留时间为1.04～1.16，以log值计，相对峰面积大于0.2的特征峰，则样品为杠柳茎皮掺伪。
9、上述技术方案中，绿原酸的化学结构式如下：
10、
11、杠柳毒苷的化学结构式如下：
12、
13、periplocoside s-4a的化学结构式如下：
14、
15、glycoside h2的化学结构式如下：
16、
17、periplocoside h1的化学结构式如下：
18、
19、一种基于hplc-elsd特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，包括如下步骤：
20、s1、收集具有代表性的香加皮和杠柳茎皮，分别采用70％甲醇超声提取供试品溶液，采用超高效液相色谱联用四极杆飞行时间质谱(uhplc-ltq-orbitrap ms)采集所得供试品溶液的总离子流图：
21、(1)色谱条件
22、色谱柱：ultimate xb-c18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：0.1％甲酸水溶液(a)-乙腈(b)进行梯度洗脱，洗脱程序见表1；流速：1.0ml·min-1；柱温：40℃；进样量：2μl；
23、表1 uhplc梯度洗脱程序
24、
25、(2)质谱条件
26、采用电喷雾离子源(esi)，检测模式为高分辨(ftms)，分辨率60000fwhm，以数据依赖型扫描(ida)方式采集数据；离子源温度325℃；鞘气流速35arb；辅助气流速10arb；反吹气流速0arb；喷雾电压4.0kv；毛细管温度为300℃；采集数据方式为正离子模式，一级质谱母离子扫描范围m/z 100～1800；二级ms/ms质谱采用自动二级模式，开启动态背景扣除(dbs)，碰撞电压为45v；
27、(3)结果
28、香加皮正离子模式总离子流图见图1；
29、杠柳茎皮正离子模式总离子流图见图2；
30、s2、根据获得的化合物质量数及相应的一级、二级质谱图，通过文献、谱库比对及质谱裂解规律鉴定出57个主要化合物成分；
31、s3、采用统计分析方法从采集的香加皮和杠柳茎皮的总离子流图中筛选差异性成分及专属成分：
32、(1)方法
33、通过sieve 2.0软件将由uhplc-ltq-orbitrap ms扫描后的碎片离子强度信息导出，运用simca 14.0软件，寻找香加皮与杠柳茎皮之间的差异性成分和专属成分；
34、(2)结果
35、正离子模式下的差异性成分为绿原酸、杠柳毒苷、glycoside h1、periplocosides-4a以及质量数为447.1563的成分，其中绿原酸、杠柳毒苷、glycoside h1、periplocosides-4a为香加皮和杠柳茎皮共有成分，但含量存在差异，质量数为447.1563的成分仅存在于杠柳茎皮中，不存在于香加皮药材中，为杠柳茎皮专属成分；
36、s4、根据差异性成分及专属成分，采用hplc-elsd方法建立特征图谱；以绿原酸为s峰，计算专属特征峰的相对保留时间和相对峰面积(log值)，以香加皮中允许混入3％杠柳茎皮确定相对峰面积(log值)限度：
37、(1)色谱条件
38、色谱柱：agilent poroshell 120ec-c18(3.0×100mm，2.7μm)；流动相为乙腈(a)-0.1甲酸水溶液(b)，洗脱程序见表2；流速：0.4ml·min-1；柱温：30℃；进样量：2～10μl；蒸发光检测器：漂移管温度105℃，氮气流量3.0l·min-1；
39、表2 uhplc梯度洗脱程序
40、
41、(2)参照物溶液的制备
42、精密称取绿原酸、杠柳毒苷、periplocoside s-4a、glycoside h2、periplocosideh1参照物，加70％甲醇本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于HPLC-ELSD特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种基于HPLC-ELSD特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.如权利要求2所述的一种基于HPLC-ELSD特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，步骤S1中，色谱条件为：
4.如权利要求2所述的一种基于HPLC-ELSD特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，步骤S1中，质谱条件为：
5.如权利要求2所述的一种基于HPLC-ELSD特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，步骤S3中，方法为：通过SIEVE 2.0软件将由UHPLC-LTQ-Orbitrap MS扫描后的碎片离子强度信息导出，运用SIMCA 14.0软件，寻找香加皮与杠柳茎皮之间的差异性成分和专属成分。
6.如权利要求2所述的一种基于HPLC-ELSD特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，步骤S4中，色谱条件为：
7.
8.如权利要求2所述的一种基于HPLC-ELSD特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，步骤S4中，供试品溶液的制备方法为：取香加皮和杠柳茎皮药材适量，粉碎，过三号筛；取粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声提取，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
9.如权利要求8所述的一种基于HPLC-ELSD特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，所述超声提取的条件为：时间30min，功率250W，频率33kHz。
10.如权利要求2所述的一种基于HPLC-ELSD特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，步骤S4中，结果为：香加皮有5个特征峰，分别为绿原酸、杠柳毒苷、Periplocoside S-4a、Glycoside H2、Periplocoside H1；杠柳茎皮有6个特征峰，其中5个特征峰与香加皮一致，一个特征峰为杠柳茎皮专属成分，质谱验证质量数为447.1563，以绿原酸为S峰，该专属特征峰的相对保留时间为1.04～1.16，以log值计，相对峰面积大于1.59，以香加皮中允许混入3％杠柳茎皮确定相对峰面积限度为不得过0.2。
...【技术特征摘要】
1.一种基于hplc-elsd特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种基于hplc-elsd特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.如权利要求2所述的一种基于hplc-elsd特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，步骤s1中，色谱条件为：
4.如权利要求2所述的一种基于hplc-elsd特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，步骤s1中，质谱条件为：
5.如权利要求2所述的一种基于hplc-elsd特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，步骤s3中，方法为：通过sieve 2.0软件将由uhplc-ltq-orbitrap ms扫描后的碎片离子强度信息导出，运用simca 14.0软件，寻找香加皮与杠柳茎皮之间的差异性成分和专属成分。
6.如权利要求2所述的一种基于hplc-elsd特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，步骤s4中，色谱条件为：
7.如权利要求2所述的一种基于hplc-elsd特征图谱区分中药香加皮和伪品杠柳茎皮的方法，其特征在于，步骤s4中，参照物溶液的制备方法为：精密称取绿原酸、杠柳毒苷、periplocoside s-4a、glycoside ...
【专利技术属性】
技术研发人员：方翠芬，陈碧莲，肖琦，李正，张琳琳，陈浩，罗云云，董婷，郑成，
申请(专利权)人：浙江省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：
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