【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药材药物成分检测领域，具体涉及一种核苷类成分含量的检测方法。
技术介绍
1、冬虫夏草chinese cordyceps，ophiocordycepssinensis(berk.)为中国传统名贵中药材，其主要分布于青藏高原及周边地区海拔3000m以上、雪线以下的地区，在我国的分布包括西藏、青海、四川、云南、甘肃5省区的高寒草甸草原。据报道冬虫夏草中含有多种活性成分，如核苷、多糖、甾醇、脂肪酸、蛋白、多肽等，还包含挥发性成分。其中核苷类成分是冬虫夏草的重要活性成分之一，其具有提高免疫力、促进血液循环、调节心律失常、抑制尿路感染和调节中枢神经系统等多种功效。其中，测定冬虫夏草中核苷类成分中的腺苷含量为衡量冬虫夏草质量标准的重要指标(国家药典委员会2000)。因此，冬虫夏草中核苷类成分的分析检测对于冬虫夏草的质量控制具有重要意义。但现有的分析方法中，核苷的提取方法和含量测定存在诸多缺点，如前处理繁琐、耗时长等。
2、目前，已有报道hplc法用于检测冬虫夏草中的核苷成分，主要包括hplc-uv、hplc-ms和uplc-uv。但这些方法，常用外标法进行测定，需要同时配制多种对照品，操作较为繁琐，容易出错，消耗有机溶剂多等。
3、因此，亟需一种操作简单，操作时间短，试剂消耗少，成本低的核苷类成分的检测方法。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术开发了一种等波长吸收测定法，该方法可采用单一对照品单独或同时测定四种核苷成分(尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷)的含
2、一种核苷类成分含量的检测方法，其包括：取待测供试品溶液和对照品溶液，采用高效液相色谱法进行检测，所述对照品溶液中的对照品为尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷中的至少一种，所述高效液相色谱法的色谱条件为：采用c18色谱柱，以乙腈或甲醇为流动相a，以水、0.1vol％甲酸水溶液或5mmol/l甲酸铵水溶液为流动相b，进行梯度洗脱。在一些实施例中，所述对照品溶液中的对照品选自尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷中的一种。
3、在一些实施例中，所述梯度洗脱程序为：
4、 时间/min 流动相a 流动相b 0 0 100％ 9 0 100％ 9.5 4％ 96％ 15 4％ 96％
5、。
6、在一些实施例中，所述高效液相色谱法的检测波长为：0～5min的检测波长为256nm-260nm或258nm；5min～9.1min的检测波长为250nm-254nm或252nm；9.1min～10.5min的检测波长为256nm-260nm或258nm；10.5min～15min的检测波长为247nm-251nm或249nm。在一些优选的实施例中，所述高效液相色谱法的检测波长为：0～5min的检测波长为258nm；5min～9.1min的检测波长为252nm；9.1min～10.5min的检测波长为258nm；10.5min～15min的检测波长为249nm。
7、在一些实施例中，所述高效液相色谱法的检测波长为采用258nm检测尿苷，采用258nm检测鸟苷，采用252nm检测肌苷和采用249nm或270nm、优选249nm检测腺苷。
8、在一些实施例中，所述高效液相色谱法的流速为0.8ml/min-1.2ml/min。在一些实施例中，所述高效液相色谱法的流速为0.9ml/min-1.1ml/min。在一些实施例中，所述高效液相色谱法的流速为1.0ml/min。
9、在一些实施例中，所述对照品溶液中的对照品为尿苷、肌苷、鸟苷或腺苷中的一种。在一些实施例中，所述对照品溶液中的对照品为腺苷。
10、在一些实施例中，所述c18色谱柱为waters cortecs t3色谱柱。
11、在一些实施例中，所述c18色谱柱的规格为100mm×4.6mm，2.7μm。
12、在一些实施例中，所述对照品溶液中对照品的浓度为0.0020mg/ml-0.0500mg/ml。在一些实施例中，所述对照品溶液中对照品的浓度为0.0100mg/ml-0.0300mg/ml。在一些实施例中，所述对照品溶液中对照品的浓度为0.0150mg/ml-0.0250mg/ml。在一些实施例中，所述对照品溶液中对照品的浓度为0.0190mg/ml-0.0210mg/ml。在一些实施例中，所述对照品溶液中对照品的浓度为0.0020mg/ml、0.0100mg/ml、0.0150mg/ml、0.0180mg/ml、0.0190mg/ml、0.0200mg/ml、0.0210mg/ml、0.0220mg/ml、0.0230mg/ml、0.0250mg/ml、0.0300mg/ml、0.0400mg/ml或0.0500mg/ml。
13、在一些实施例中，所述供试品溶液的制备方法包括：取中药材，粉碎，加入提取溶剂，超声，冷却至室温，补充超声所损失的提取溶剂，摇匀，过滤，取续滤液，得到所述供试品溶液。
14、在一些实施例中，所述中药材为冬虫夏草。在一些实施例中，所述对照品溶液采用提取溶剂或水进行制备。
15、在一些实施例中，所述提取溶剂为0.1vol％-1.0vol％磷酸水溶液。在一些实施例中，所述提取溶剂为0.1vol％、0.2vol％、0.3vol％、0.4vol％、0.5vol％、0.6vol％、0.7vol％、0.8vol％、0.9vol％或1.0vol％磷酸水溶液。在一些实施例中，所述提取溶剂为0.5vol％磷酸水溶液。
16、在一些实施例中，所述高效液相色谱法的色谱条件还包括检测波长带宽为1nm–8nm。在一些优选的实施例中，所述高效液相色谱法的色谱条件还包括检测波长带宽为1nm、2nm、3nm、4nm、5nm、6nm、7nm或8nm。
17、在一些优选的实施例中，所述流动相a为乙腈，所述流动相b为水或0.1vol％甲酸水溶液。在一些实施例中，所述检测方法以乙腈为流动相a，水为流动相b。
18、在一些本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核苷类成分含量的检测方法，其包括：取待测供试品溶液和对照品溶液，采用高效液相色谱法进行检测，所述对照品溶液中的对照品为尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷中的至少一种，所述高效液相色谱法的色谱条件为：采用C18色谱柱，以乙腈或甲醇为流动相A，以水、0.1vol％甲酸水溶液或5mmol/L甲酸铵水溶液为流动相B，进行梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的检测方法，所述梯度洗脱程序为：
3.根据权利要求1-2任一项所述的检测方法，所述高效液相色谱法的检测波长为：0～5min的检测波长为256nm-260nm或258nm；5min～9.1min的检测波长为250nm-254nm或252nm；9.1min～10.5min的检测波长为256nm-260nm或258nm；10.5min～15min的检测波长为247nm-251nm或249nm；优选地，所述高效液相色谱法的检测波长为：0～5min的检测波长为258nm；5min～9.1min的检测波长为252nm；9.1min～10.5min的检测波长为258nm；10.5min～15min的检测波长为249nm；或者
...【技术特征摘要】
1.一种核苷类成分含量的检测方法，其包括：取待测供试品溶液和对照品溶液，采用高效液相色谱法进行检测，所述对照品溶液中的对照品为尿苷、肌苷、鸟苷和腺苷中的至少一种，所述高效液相色谱法的色谱条件为：采用c18色谱柱，以乙腈或甲醇为流动相a，以水、0.1vol％甲酸水溶液或5mmol/l甲酸铵水溶液为流动相b，进行梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的检测方法，所述梯度洗脱程序为：
3.根据权利要求1-2任一项所述的检测方法，所述高效液相色谱法的检测波长为：0～5min的检测波长为256nm-260nm或258nm；5min～9.1min的检测波长为250nm-254nm或252nm；9.1min～10.5min的检测波长为256nm-260nm或258nm；10.5min～15min的检测波长为247nm-251nm或249nm；优选地，所述高效液相色谱法的检测波长为：0～5min的检测波长为258nm；5min～9.1min的检测波长为252nm；9.1min～10.5min的检测波长为258nm；10.5min～15min的检测波长为249nm；或者...
【专利技术属性】
技术研发人员：钱正明，雷清贵，金李玲，黄琦，孙益阔，贺媛，
申请(专利权)人：东莞市东阳光冬虫夏草研发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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