【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物基因工程，具体涉及一种蓝果忍冬基因 lcnac72，以及其构建的植物表达载体和重组菌在耐冷转基因植物新品种培育方面的应用。
技术介绍
1、蓝果忍冬（ lonicera caeruleael.）属于忍冬科忍冬属的落叶小灌木，它具有抗寒、早熟、土壤适应性广等优良农艺性状，果实富含花青素、氨基酸、儿茶酸、槲皮苷等生理活性物质，是具有很高营养保健价值和经济价值的新兴小浆果树种之一。蓝果忍冬在我国主要分布于东北、华北和西北的一些地区，东北的大、小兴安岭和长白山地区的野生资源贮量最大，随着全球气候异常，极端天气发生频繁，对植物的生长带来很大的挑战，而提高蓝果忍冬的耐寒性，可避免因极端环境造成经济损失。
2、然而现有技术中关于蓝果忍冬的相关研究较少，缺乏与蓝果忍冬低温胁迫相关基因的研究报道。因此，本领域技术人员一直渴望在蓝果忍冬中挖掘对低温胁迫具有调控作用的基因。
技术实现思路
1、本专利技术为了挖掘对蓝果忍冬低温胁迫具有调控作用的基因，提高蓝果忍冬的耐冷性，提供了蓝果忍冬基因 lcnac72在提高植物耐冷性中的应用。
2、本专利技术的目的之一在于提供一种蓝果忍冬 lcnac72基因在提高植物耐冷性中的应用，所述 lcnac72基因含有nac结构域，所
3、在本专利技术的一种优选实施例中，所述应用是利用蓝果忍冬 lcnac72基因获得转基因植物。
4、在本专利技术的一种优选实施例中，所述转基因植物的制备方法包括以下步骤：
5、s1、利用引物对 lcnac72基因进行克隆，所述 lcnac72基因的核苷酸序列为seq idno.1所示；
6、s2、将s1中获得的基因克隆序列与载体相连接获得表达载体；
7、s3、将s2中获得的表达载体导入农杆菌中，获得重组菌；
8、s4、将s3中获得的重组菌侵染植物，获得转基因植株。
9、在本专利技术的一种优选实施例中，s1中所述的引物中上游引物核苷酸序列为seq idno.2所示，下游引物核苷酸序列为seq id no.3所示。
10、在本专利技术的一种优选实施例中，s2中所述的载体为prok2。
11、在本专利技术的一种优选实施例中，s3中所述的农杆菌为eha105。
12、在本专利技术的一种优选实施例中，s4中所述的重组菌侵染方法为由农杆菌介导的通过花序浸渍来侵染植物，所述的植物为拟南芥。
13、本专利技术的目的之二在于提供一种提高植物耐冷性的表达载体，所述表达载体含有核苷酸序列为seq id no.1所示的 lcnac72基因。
14、本专利技术的目的之三在于提供一种提高植物耐冷性的重组菌，所述重组菌含有上述表达载体。
15、本专利技术的目的之四在于提供上述表达载体或重组菌在提高植物耐冷性中的应用。
16、本专利技术的有益效果：
17、本专利技术提供了蓝果忍冬基因 lcnac72在提高植物耐冷性中的应用，以及含有上述基因的表达载体和重组菌，通过对低温处理下的蓝果忍冬基因 lcnac72的表达情况进行检测，获得了 lcnac72基因可能参与低温胁迫响应的结论。
18、本专利技术通过将蓝果忍冬基因 lcnac72稳定转入拟南芥植株和瞬时转入蓝果忍冬中，获得具有明显表型的纯系植株，明确 lcnac72在细胞中的定位，并鉴定 lcnac72在转基因植株中的表达，以及通过相关生理指标的检测，验证了蓝果忍冬基因 lcnac72能够缓解低温胁迫造成的氧化损伤，同时能够增强活性氧的清除能力，维持细胞渗透平衡，从而实现提高植株耐冷性的目的。
19、此外，本专利技术得到的稳定转基因材料通过之后的继代繁殖及鉴定，可以成为耐冷性遗传材料，本专利技术对于加速耐冷性植物的育种进程以及提高育种效率有重要的理论意义和实践价值。
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1. 蓝果忍冬LcNAC72基因在提高植物耐冷性中的应用，其特征在于，所述LcNAC72基因含有NAC结构域，所述LcNAC72基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是利用蓝果忍冬LcNAC72基因获得转基因植物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述转基因植物的制备方法包括以下步骤：
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，S1中所述的引物中上游引物核苷酸序列为SEQ ID No.2所示，下游引物核苷酸序列为SEQ ID No.3所示。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，S2中所述的载体为pROK2。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，S3中所述的农杆菌为EHA105。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，S4中所述的重组菌侵染方法为由农杆菌介导的通过花序浸渍来侵染植物，所述的植物为拟南芥。
8. 一种提高植物耐冷性的表达载体，其特征在于，所述表达载体含有核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的LcN
9.一种提高植物耐冷性的重组菌，其特征在于，所述重组菌含有权利要求8所述的表达载体。
10.权利要求8所述的表达载体或权利要求9所述的重组菌在提高植物耐冷性中的应用。
...【技术特征摘要】
1. 蓝果忍冬lcnac72基因在提高植物耐冷性中的应用，其特征在于，所述lcnac72基因含有nac结构域，所述lcnac72基因的核苷酸序列为seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是利用蓝果忍冬lcnac72基因获得转基因植物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述转基因植物的制备方法包括以下步骤：
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，s1中所述的引物中上游引物核苷酸序列为seq id no.2所示，下游引物核苷酸序列为seq id no.3所示。
5.根据权利要求4所述的应用，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：臧丹丹，赵恒田，段亚东，王宁，
申请(专利权)人：中国科学院东北地理与农业生态研究所农业技术中心，
类型：发明
国别省市：
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