【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细菌培养基，具体涉及一种可以分离金黄色葡萄球菌和变形杆菌的铁限制环境的细菌培养基。
技术介绍
1、金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)是人体常见的病原菌，是引起医院内感染和社区获得性感染的主要原因。它可导致许多危及患者生命的感染，包括菌血症、呼吸机相关肺炎、与留置医疗器械和伤口有关的感染以及手术部位感染。变形杆菌是我国常见食物中毒原因之一，还可以引起婴儿肠炎，尿道、烧伤的感染。因此，准确的区分金黄色葡萄球菌和变形杆菌，能够提高其感染的临床诊断和治疗水平。
2、金葡菌属于革兰阳性菌，显微镜下呈葡萄状排列，在血琼脂平板上菌落呈金黄色或黄色，菌口周围有明显的透明溶血环，在最适温度37℃生长速度较快。而变形杆菌属于革兰阴性菌，有球状和丝状，变形杆菌营养要求不高，在普通琼脂上就可以呈扩散生长，一个菌落在平板上培养24小时就可以形成以接种部位为中心的波纹状菌落，有典型的迁徙生长现象。在临床上患者感染混合菌，特别是当金葡菌和变形杆菌混合生长时，前者会被变形杆菌覆盖，由于变形杆菌的干扰，无法分纯金葡菌，从而不能进行金葡菌的鉴定和药敏试验，严重影响金葡菌鉴定和后续的临床治疗。
3、目前，尚没有一款培养基可以在同一个培养基内实现金黄色葡萄球菌和变形杆菌直接有效地分离。
技术实现思路
1、本专利技术目的：为了解决现技术不能有效分离金黄色葡萄球菌和变形杆菌的问题，从而提供了可以有效分离二者的技术，有助于金黄色葡萄球菌临床感染的快速诊断和治疗。
2、本专利技术提出了
3、所述的血清为普通血清即可，例如马血清，小牛血清，胎牛血清等。
4、更进一步的，以培养基总体积为100ml计，其包含组分为：7g交联聚苯乙烯-亚氨基二乙酸离子交换树脂,5μmol/l乙二胺-n-n`-二乙胺，0.108grpmi-1640粉末，1g酪蛋氨基酸，0.2g碳酸氢钠，0.2g碳酸氢钠，25μmol/l氯化锌,25μmol/l氯化锰,100μmol/l氯化钙和1mmol/l氯化镁，1.5％琼脂，10ml的马血清。
5、关于培养基的具体制备方法，包括以下步骤：
6、s1以培养基总体积为100ml为例，向烧杯倒入45ml水。
7、s2称量2.16grpmi-1640粉末溶解于烧杯中，边搅拌边加入。
8、s3加入1g酪蛋氨基酸，得到roswell park memorial institute肉汤。
9、s4加入0.2g碳酸氢钠，调至ph约7.4。
10、s5加入7g交联聚苯乙烯-亚氨基二乙酸离子交换树脂，在4℃环境下，搅拌器上过夜。
11、s6将过夜溶液通过0.2μm滤网取出，4℃保存。
12、s7在玻璃瓶中倒入45ml水，加入1.5g琼脂，单独高压灭菌。
13、s8补充必要的非铁金属介质锌、锰、钙、镁，同时加入10ml血清。
14、s9将s6与s8得到的溶液混合，倒入空白无菌培养皿，冷却控干水分。
15、临床出现金黄色葡萄球菌和变形杆菌共同感染时，采用常规的培养基培养，因为变形杆菌的迁徙作用，会覆盖在金黄色葡萄球菌上，导致二者无法区分开，可能导致病原菌的漏检。金黄色葡萄球菌属于革兰阳性菌，抗菌药物氨曲南对革兰阳性菌是无效的，而对革兰阴性菌有效(如变形杆菌)，故临床上可以加贴氨曲南药敏纸片进行培养和鉴定金黄色葡萄球菌；但当变形杆菌对氨曲南产生耐药时，而目前变形杆菌多数是耐药菌株，则难以分离出金黄色葡萄球菌，而且现有的区分金葡菌和变形杆菌的方法存在步骤繁琐，操作不便，难以快速分离。
16、本专利技术的培养基可以简便地区分出两种细菌，有助于金黄色葡萄球菌临床感染的快速诊断和治疗。
17、有益成果
18、与现有方法相比，本专利技术的培养基的克服了传统方法(如药敏法)的缺点，即需要考虑变形杆菌对氨曲南耐药性问题。而本专利技术的培养基无需要加贴氨曲南药敏纸片，只需在平板过夜培养，即可看出金黄色葡萄球菌和变形杆菌不同表型的单菌落，进行分纯即可；原因在于：本专利技术的铁限制细菌培养基在保证两种细菌良好生长的条件下，对其中的营养成分进行改良，通过不断优化得到培养基中科学合理的营养成分，其营养物质组合不但为细菌创造了适宜的生长环境，即使变形杆菌是对氨曲南耐药，也可以在同一的培养基内培养出金黄色葡萄球菌和变形杆菌单菌落且互不干扰，可以肉眼观察，该方法操作简单、高效便捷，更有利于临床工作中的使用。
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1.一种可以分离金黄色葡萄球菌和变形杆菌的培养基，其特征在于，其包括交联聚苯乙烯-亚氨基二乙酸离子交换树脂和乙二胺-N-N`-二乙胺，RPMI-1640基础培养成分，酪蛋氨基酸，碳酸氢钠，锌离子，锰离子，钙离子，镁离子，琼脂和血清。
2.根据权利要求1所述的一种可以分离金黄色葡萄球菌和变形杆菌的培养基，其特征在于，以培养基总体积为100mL计，其包含组分为：7g交联聚苯乙烯-亚氨基二乙酸离子交换树脂,5μmol/L乙二胺-N-N`-二乙胺，0.108gRPMI-1640粉末，1g酪酪蛋氨基酸，0.2g碳酸氢钠，0.2g碳酸氢钠，25μmol/L氯化锌,25μmol/L氯化锰,100μmol/L氯化钙和1mmol/L氯化镁，1.5g琼脂，10mL的血清。
3.根据权利要求2所述的一种可以分离金黄色葡萄球菌和变形杆菌的培养基制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种可以分离金黄色葡萄球菌和变形杆菌的培养基，其特征在于，其包括交联聚苯乙烯-亚氨基二乙酸离子交换树脂和乙二胺-n-n`-二乙胺，rpmi-1640基础培养成分，酪蛋氨基酸，碳酸氢钠，锌离子，锰离子，钙离子，镁离子，琼脂和血清。
2.根据权利要求1所述的一种可以分离金黄色葡萄球菌和变形杆菌的培养基，其特征在于，以培养基总体积为100ml计，其包含组分为：7g交联聚苯乙烯-亚氨基...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵艳丰，薛芬，朱叶飞，徐辉，杜冰钰，赵蕊，
申请(专利权)人：南京医科大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：
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