一种快速抽提纯化RNA的试剂盒以及方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，尤其涉及一种快速抽提纯化ＲＮＡ的试剂盒及方法。本发明专利技术的试剂盒包括：裂解液、前处理液、ＲＮＡ结合液、ＲＮＡ洗液Ⅰ和Ⅱ、以及ＲＮＡ过滤柱和结合柱。本发明专利技术的方法包括裂解、前处理、过滤、结合ＲＮＡ、清洗提纯和洗脱等步骤。本发明专利技术摒弃了以往经典的酸性酚法及大公司的Ｔｒｉｚｏｌ法，创造了一种全新的ＲＮＡ抽提纯化方法，它使抽提纯化的时间大大缩短，只需１０分钟，即可从各种材料中提纯可用于下游各种实验的高纯度ＲＮＡ，如：ｃＤＮＡ的转录、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔ、ＲＮＡｉ等。

Reagent kit and method for rapid extraction and purification of RNA

The invention relates to the field of molecular biology, in particular to a reagent kit and a method for rapidly extracting and purifying RNA. The kit of the invention comprises a cracking solution, a pretreatment solution, a RNA binding solution, a RNA lotion I and II, and a RNA filter column and a combining column. The method of the invention comprises cracking, pretreatment, filtering, combining RNA, cleaning, purification and elution, etc.. The present invention eliminates the Trizol method the former classical acidic phenol method and big company, created a new purification method of RNA extraction, which greatly shorten the time of extraction and purification, only 10 minutes, can be from a variety of materials can be used in the purification of high purity RNA, downstream of various experiments such as cDNA transcription, Northern, blot, RNAi etc..

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域，尤其涉及一种快速抽提纯化RNA的试剂盒及方法。
技术介绍
RNA是遗传的基本物质之一，也是蛋白合成的模板，分离高纯度的RNA是 现代分子生物学研究(包括临床医学诊断等)和分子治疗(如RNAi治疗)的必要 技术手段，也是不可逾越的试验过程。RNA具有易降解，难纯化的特点。它极易 被无处不在RNase降解，也很容易在抽提过程中被DNA和蛋白污染；传统的方法， 如AGPC法或酸性酚法、氯化铯密度梯度离心法等以及现在常用的Trizol法， 必须用到毒性极强的酚和氯仿等，对环境和试验人员易造成危害。并且操作过程 复杂、操作时间长，这样都容易导致提纯的RNA被污染降解，并且这些方法对操 作环境的要求都十分的苛刻，为了保证RNA不被污染，在提取之前，需要做大量 的配液、处理环境及耗材的工作，费时又费力，增加的提取成本，且不利于大规 模操作，限制了大规模临床检测应用及分子和基因组学的发展。
技术实现思路
因此，为了解决上述问题，本专利技术的专利技术人提出并完成了本专利技术。 本专利技术的目的为提供一种快速抽提纯化RNA的试剂盒。 本专利技术的另 一 目的为提供一种快速抽提纯化RNA的方法。 根据本专利技术的快速抽提纯化RNA的试剂盒包括-1)样品裂解液，所述裂解液针对含多糖的材料的配方为 4.0-6 M GuCl20-80 mM MES-NaOH， pH 5.2-6.510-50 mM拧檬酸钠 0.1-0.6 % TritonX-100 0.5-2% N-月桂酰肌氨酸 5-20ul/ml (3-巯基乙醇 所述裂解液针对其它材料的配方为 3.5-5.5 M GuSCN20-80 mM MES-NaOH， pH5.2-6.3 10-50 mM拧檬酸钠 0.1-0.6 % TritonX-100 0.5-2% N-月桂酰肌氨酸 5-20ul/ml (3-巯基乙醇；2) RNA结合柱前处理溶液，其配方为: 3.5-4.5 M LiCl0.005-0.02M HC1 0.05-0.3% TritonX-100;3) RNA结合溶液，其配方为；a) 200-500 mM MES pH4.5-5.5b) 90-100%乙醇，且a:b=l-5:95-99;4) RNA洗液I，其配方为 50-200mM MES-NaOH， pH5~6， 3.5-4.5 M GuSCN0.1-1% TritonX-100 15-30%乙醇；5) RNA洗液II，对于植物材料所述洗液II的配方为 70-85 %乙醇0.5-1.5%丙酮 0.005-0.05% DEPC，对于其它材料所述洗液II的配方为70-85%乙醇和0.005-0.05% DEPC;6) Rnase-free H2O;7) RNA过滤柱。8) RNA结合柱。根据本专利技术的试剂盒，所述RNA结合柱的材料为二氧化硅纤维膜。根据本专利技术的试剂盒，所述RNA过滤柱的过滤介质为14M孔径的氧化 铝滤片。根据本专利技术的试剂盒，所述RNA结合柱由孔径为0.5WVI的酸化玻璃纤 维材料制成。根据本专利技术的快速抽提纯化RNA的方法包括以下步骤1)裂解样品，将样品研磨，并加入样品裂解液进行裂解，所述裂解液针对含多糖的材料的配方为-4.0-6 M GuCl20-80 mM MES-NaOH， pH 5.2-6.5 10-50 mM柠檬酸钠 0.1-0.6 % TritonX-lOO 0.5-2% N-月桂酰肌氨酸 5-20ul/ml p-巯基乙醇 所述裂解液针对其它材料的配方为-3.5-5.5 M GuSCN20-80 mM MES-NaOH, pH5.2- 6.3 10-50 mM柠檬酸钠 0.1-0.6 % TritonX-lOO0.5-2% N-月桂酰肌氨酸 5-20ul/ml p-巯基乙醇；2) 前处理，将200|iLRNA结合柱前处理液注入RNA结合柱中，然后 离心去除溶液，所述RNA结合柱前处理溶液的配方为35-4.5 M LiCI0.005-0.02M HC10.05-0.3% TritonX-100;3) 过滤，将裂解样品用过滤柱过滤，在滤液中加入0.5倍体积的RNA 结合溶液并混匀，所述RNA结合液的配方为a) 200-500 mM MES pH4.5-5.5b) 卯-1000/。乙醇，且a:b=l-5:95-99;4) 结合RNA，将步骤3)获得的溶液加入到RNA结合柱上，并离心去 除溶液；5) 清洗提纯RNA，力Q 500pLRNA洗液I于RNA结合柱中，并离心去除 溶液，然后再加750nLRNA洗液II于RNA结合柱中，并离心去除溶液，所述RNA洗液I的配方为50-200mM MES-NaOH， pH5~6,3.5-4.5 M GuSCN0.1-1% TritonX-lOO15-30%乙醇，对于植物材料所述洗液II的配方为 70-85 %乙醇0.5-1.5%丙酮0. 005、0.05% DEPC，对于其它材料所述洗液II的配方为70-85%乙醇和0.005-0.05% DEPC;6)洗脱RNA，向经步骤5)处理的RNA结合柱中加入Rnase-free的 H20，静止，并离心收集溶液，得到高纯度的RNA。根据本专利技术的方法，所述RNA过滤柱的过滤介质为1WVI孔径的氧化铝 滤片。根据本专利技术的方法，所述RNA结合柱由孔径为0.5PM的酸化玻璃纤维 材料制成。本专利技术摒弃了以往经典的酸性酚法及大公司的Trizol法，创造了一种全新的 RNA抽提纯化方法，它使抽提纯化的时间大大縮短，只需10分钟，即可从各种材 料中提纯可用于下游各种实验的高纯度RNA，如cDNA的转录、Northernblot、 RNAi等。综上，本专利技术具有以下优点1、 摒弃以往商用Trizol法、氯化铯密度梯度离心法和酸性酚法所用的酚抽 提步骤，采用温和变性剂裂解法，辅助氧化铝剪切，不使用任何对环境造成污染 的药品。2、 不离心沉淀收集收集样品，直接裂解， 一步过滤， 一步结合，两步特异清 洗纯化。3、 采用特殊的全新溶液配方前处理二氧化硅纤维膜，使蛋白、DNA等杂质更 易清除，而且RNA更易结合。4、 大大縮短抽分离提纯时间，10分钟即可完成。5、 此法为RNA抽提的自动化和大规模化奠定了技术基础。具体实施例方式实施例使用本专利技术的试剂盒快速抽提纯化烟草叶的总RNA一、配制溶液 配制以下溶液1) 样品裂解液，针对含多糖的材料的裂解液-5 M GuCl50 mM Mes-NaOH， pH 6.3 20 mM拧檬酸钠 0.5 % TritonX隱100 r/。N-月桂酰肌氨酸 10ul/ml (3-巯基乙醇针对其它材料的裂解液4.25 M GuSCN50 mM MES-NaOH， pH 6.320 mM拧檬酸钠0.5 %TritonX-1000.5n/。N-月桂酰肌氨酸10ul/ml (3-巯基乙醇；2) RNA结合柱前处理溶液 4 M LiCl0.01M HC1 0.1% TritonX-100;3) RNA结合溶液，其配方为;a) 500 mM MES pH5.0b) 100%乙醇，且a:b=l:96;4) RNA洗液I: 100mMMES-NaOH， pH5~6， 4 M GuSCN110.7% TritonX-100本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速抽提纯化ＲＮＡ的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下组分：　１）样品裂解液，　所述裂解液针对含多糖的材料的配方为：　４．０－６Ｍ　ＧｕＣｌ　２０－８０ｍＭ　ＭＥＳ－ＮａＯＨ，ｐＨ５．２－６．５　１０－ ５０ｍＭ柠檬酸钠　０．１－０．６％　ＴｒｉｔｏｎＸ－１００　０．５－２％　Ｎ－月桂酰肌氨酸　５－２０ｕｌ／ｍｌ　β－巯基乙醇　所述裂解液针对其它材料的配方为：　３．５－５．５Ｍ　ＧｕＳＣＮ　２０－８０ｍＭ 　ＭＥＳ－ＮａＯＨ，ｐＨ５．２－６．３　１０－５０ｍＭ柠檬酸钠　０．１－０．６％　ＴｒｉｔｏｎＸ－１００　０．５－２％Ｎ－月桂酰肌氨酸　５－２０ｕｌ／ｍｌ　β－巯基乙醇；　２）ＲＮＡ结合柱前处理溶液，其配方为： 　３．５－４．５Ｍ　ＬｉＣｌ　０．００５－０．０２Ｍ　ＨＣｌ　０．０５－０．３％　ＴｒｉｔｏｎＸ－１００；　３）ＲＮＡ结合溶液，其配方为；　ａ）２００－５００ｍＭ　ＭＥＳ　ｐＨ４．５－５．５　ｂ）９０－１ ００％乙醇，且ａ∶ｂ＝１∶９６；　４）ＲＮＡ洗液Ⅰ，其配方为：　５０－２００ｍＭ　ＭＥＳ－ＮａＯＨ，ｐＨ５～６，　３．５－４．５Ｍ　ＧｕＳＣＮ　０．１－１％　ＴｒｉｔｏｎＸ－１００　１５－３０％　乙醇（如上述， 请最好给出上述浓度的取值范围）；　５）ＲＮＡ洗液Ⅱ，　对于植物材料所述洗液Ⅱ的配方为：　７０－８５％乙醇　０．５－１．５％丙酮　０．００５－０．０５％　ＤＥＰＣ，　对于其它材料所述洗液Ⅱ的配方为：　 ７０－８５％乙醇和０．００５－０．０５％ＤＥＰＣ；（如上述，请最好给出上述浓度的取值范围）　６）Ｒｎａｓｅ－ｆｒｅｅ　Ｈ↓［２］Ｏ；　７）ＲＮＡ过滤柱；以及　８）ＲＮＡ结合柱。...

【技术特征摘要】
1、一种快速抽提纯化RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下组分1)样品裂解液，所述裂解液针对含多糖的材料的配方为4. 0-6M GuCl20-80mM MES-NaOH，pH5.2-6.510-50mM柠檬酸钠0. 1-0.6％ TritonX-1000. 5-2％ N-月桂酰肌氨酸5-20ul/ml β-巯基乙醇所述裂解液针对其它材料的配方为3. 5-5.5M GuSCN20-80mM MES-NaOH，pH5.2-6.310-50mM柠檬酸钠0. 1-0.6％ TritonX-1000. 5-2％N-月桂酰肌氨酸5-20ul/ml β-巯基乙醇；2)RNA结合柱前处理溶液，其配方为3. 5-4.5M LiCl0. 005-0.02M HCl0. 05-0.3％ TritonX-100；3)RNA结合溶液，其配方为；a)200-500mM MES pH4.5-5.5b)90-100％乙醇，且a∶b＝1∶96；4)RNA洗液I，其配方为50-200mM MES-NaOH，pH5～6，3. 5-4.5M GuSCN0. 1-1％ TritonX-10015-30％ 乙醇(如上述，请最好给出上述浓度的取值范围)；5)RNA洗液II，对于植物材料所述洗液II的配方为70-85％乙醇0. 5-1.5％丙酮0. 005-0.05％ DEPC，对于其它材料所述洗液II的配方为70-85％乙醇和0. 005-0.05％DEPC；(如上述，请最好给出上述浓度的取值范围)6)Rnase-free H2O；7)RNA过滤柱；以及8)RNA结合柱。2、 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述RNA结合柱的材 料为二氧化硅纤维膜-3、 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述RNA过滤柱的过 滤介质为0.5-2Wv4孔径的氧化铝滤片。4、 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述RNA结合柱由孔 径为0.3-0.8WVI的酸化玻璃纤维材料制成。5、 一种快速抽提纯化RNA的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤1)裂解样品，将样品研磨，并加入样品裂解液进行裂解，所述裂解液针对含多糖的材料的配方为 4.0-6 M GuCl 20-80 mM MES-NaO...

【专利技术属性】
技术研发人员：李乐攻，
申请(专利权)人：首都师范大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]