【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用作免疫刺激剂的、与人cd40受体特异性结合并且能够不依赖于fcγ介导的cd40受体交联而诱导cd40信号传导的人源化单克隆激动性抗体或其抗原结合片段。
技术介绍
1、最近在癌症免疫疗法方面取得的成功恢复了以下假设：免疫系统可以控制许多(即使不是大多数)癌症，在一些情况下以许多小分子药物所不具备的方式产生持久的反应。激动性cd40单克隆抗体(mab)提供了一种新的治疗选择，它具有通过各种机理产生抗癌免疫力的潜力。
2、cd40是细胞表面分子，并且是肿瘤坏死因子(tnf)受体超家族的成员。它在抗原呈递细胞(apc)例如树突细胞、b细胞和单核细胞以及许多非免疫细胞上广泛表达，并且在一系列肿瘤中广泛表达。
3、cd40的天然配体是cd154，它主要在活化的t淋巴细胞的表面上表达，并且为免疫应答提供t细胞“帮助”的主要组分：通过cd40在apc上的信号传导在很大程度上介导了辅助t细胞授权apc的能力。例如，cd40在dc上的连接诱导共刺激分子和mhc分子的表面表达增加、促炎性细胞因子的产生以及增强的t细胞触发。在静息b细胞上的cd40连接增加了抗原呈递功能和增殖。
4、cd40信号传导的结果是多方面的，并且取决于表达cd40的细胞类型和提供cd40信号的微环境。像tnf受体家族的一些其它成员一样，cd40信号传导由衔接子分子介导，而不是由cd40胞质尾区的固有信号转导活性介导。受体组装时，下游激酶被激活，多组分信号传导复合体从cd40移位至细胞质溶胶中，并且激活数个特征明确的信号转导途径
5、拮抗人cd40抗体是现有技术已知的。尽管数据已表明毒性与fcγr交联之间的相关性，但是大多数临床测试的治疗性抗cd40抗体通过fcγr交联发挥作用。因此，开发了显示减少的fcγ介导的cd40受体交联的沉默的fc变体。人igg1 fc区的各突变记载于例如us2018/0118843中。
6、在最近设计的免疫调节方法中，靶向cd40的激动剂单克隆抗体(mab)用于增强免疫系统识别和破坏癌细胞的能力。相应的临床前研究表明，激动性cd40 mab可以激活apc并促进抗肿瘤t细胞应答，并在缺乏t细胞免疫的情况下培养具有控制癌症的潜力的细胞毒性髓样细胞。因此，激动性cd40mab根本上不同于通过阻断例如ctla-4或pd-1等阴性检查点分子来实现免疫激活的mab。
7、wo 2019/057792记载了人源化单克隆激动性抗体或其抗原结合片段，其与人cd40受体特异性结合并且能够不依赖于fcγ介导的cd40受体交联而诱导cd40信号传导。
8、因此，激动性cd40 mab代表了用于新型免疫疗法、特别是用于癌症疗法的有前途的策略。然而，关于其潜在的细胞毒性副作用已经引起了关注。激动性单克隆cd40抗体有望触发细胞因子释放综合征、自身免疫反应、血栓栓塞综合征(由于血小板和内皮细胞表达cd40)、过度免疫刺激导致激活诱导的细胞死亡或耐受性、以及肿瘤血管生成。这些作用可以导致不良的毒性或促进肿瘤生长。从机理上讲，在动物研究中，激动性cd40和其它靶向tnf受体家族的抗体与fcγ受体相互作用的能力已经与毒性的发生有关(li&ravetch2012，xu等人，2003，byrne等人，2016)。
9、因此，需要提供具有极小毒副作用或没有毒副作用的有效的免疫疗法。在本申请中，评价了激动性cd40抗体的免疫调节潜力。事实证明，某些抗体具有令人惊讶的大治疗窗，它们在所述治疗窗中引发免疫刺激作用，而不会引起过度的毒性作用。
技术实现思路
1、本专利技术提供用作免疫刺激剂的、与人cd40受体特异性结合并且不依赖于fcγ介导的cd40受体交联而诱导cd40信号传导的单克隆抗体或其抗原结合片段。根据本专利技术，提供抗体或抗体片段以约0.1至1mg/kg患者体重的剂量施用于患者。在该范围内，它们能够引发强烈的免疫刺激作用，而毒副作用(如果有的话)可忽略不计。本专利技术还提供包含所述抗体的药物组合物，其适于用于治疗需要刺激免疫系统的病况或疾病，例如，用于预防或治疗感染性疾病和用于治疗患有癌症的患者。
2、定义
3、术语"抗体"涵盖抗体结构的各种形式，包括但不限于整个抗体和抗体片段，只要其显示出根据本专利技术的特性即可。
4、"抗体片段"是指除完整抗体以外的分子，其包含完整抗体的一部分，结合完整抗体所结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于fv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scfv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
5、如本文中所使用的术语"单克隆抗体"或"单克隆抗体组合物"是指单一氨基酸组合物的抗体分子的制剂。
6、术语"人源化抗体"或"抗体的人源化形式"是指由于抗体工程化而使重链和轻链均被人源化的抗体。人源化链通常是这样的链，其中v区氨基酸序列已改变，以使作为整体分析，其与人种系序列的同源性比与来源物种的种系序列的同源性更近。人源化评估基于所得氨基酸序列，而不是基于方法本身。
7、如本文中所使用的术语“针对靶标或抗靶标抗体特异性结合”是指通过elisa测定的、抗体与相应抗原(靶标)或抗原表达细胞的结合，其中所述elisa优选包括以下：包被相应的抗原至固相支持物，在允许与相应的抗原或蛋白质形成免疫复合体的条件下添加所述抗体，使用与根据本专利技术的抗体结合的二抗通过测量光密度值(od)来检测所述免疫复合体，并且使用过氧化物酶介导的显色。
8、根据本专利技术的术语“抗原”是指用于免疫的抗原或包含所述抗原作为其蛋白质序列的一部分的蛋白质。例如，对于免疫，可以使用蛋白质的胞外结构域的片段(例如前20个氨基酸)，并且对于检测/测定等，可以使用蛋白质的胞外结构域或全长蛋白质。
9、本文中的术语“特异性结合”或“特异性识别”意指抗体对抗原表现出明显的亲和力，并且优选地，不表现出显著的交叉反应性。
10、“不表现出显著的交叉反应性”的抗体是不会明显结合至不希望的其它蛋白质的抗体。可以根据任何本领域公知的用于确定此类结合的手段(例如，通过竞争性结合测定例如elisa)来确定特异性结合。
11、作为参考抗体的“与相同表位结合的抗体”是指在竞争测定中将参考抗体与其抗原的结合阻断50％以上的抗体，反过来说，在竞争测定中参考抗体阻断抗体与其抗原的结合达50％以上。
12、如本文中所使用的"根据本专利技术的抗体的可变区(或结构域)"(轻链的可变区(vl)、重链的可变区(vh))表示直接参与抗体与抗原结合的该对轻链和重链区中的每一个。可变轻链区和重链区具有相同的一般结构，并且每个区包含四个框架(fr)区，其序列是广泛保守的，通过三个互补决定区(cdr)连接。
13、当在本文中使用时，术语"抗体的抗原结合部分"是指抗体的负责抗原结合的氨基酸残基。抗体的抗原结合部分优选包含来自"互补决定区"或"cdr"的氨基酸残基。c本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种激动性单克隆抗体或其抗原结合片段，其与人CD40受体特异性结合并且能够不依赖于Fcγ介导的CD40受体交联而诱导CD40信号传导，其中所述抗体包含
2.根据权利要求1所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段以0.2至0.9mg/kg体重、优选0.3至0.7mg/kg、或0.4至0.5mg/kg的剂量施用。
3.根据权利要求1或2所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体为人源化IgG1LALA抗体。
4.根据权利要求3所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体至少包含在人IgG1Fc区的L234A和L235A或人IgG4 Fc区的S228P和L235E处的氨基酸取代。
5.根据前述权利要求中任一项所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:1的VH区具有至少85％同一性的重链可变(VH)区。
6.根据前述权利要求中任一项所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体包含与SEQ ID NO:2的VL区具有至少85％同一性的轻链可变(VL)区。
7.根据前述权利要求中任一项
8.根据权利要求7所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述癌症为实体瘤。
9.根据权利要求7或8所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述癌症选自包括以下的组：胰脏癌、晚期胰腺癌肺癌、非小细胞肺(NSCL)癌、细支气管肺泡细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头部或颈部癌症、皮肤或眼内黑素瘤、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、肠胃癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、肾癌、霍奇金淋巴瘤、肝癌、胆囊癌、膀胱癌、前列腺癌、甲状腺癌、唾液腺癌或子宫癌。
10.根据前述权利要求中任一项所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段与细胞毒性剂或细胞生长抑制剂、放射疗法、靶向疗法、免疫疗法或手术组合使用。
11.根据前述权利要求中任一项所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段与至少一种免疫检查点抑制剂、优选选自由抗TIGIT、抗PD-L1、抗PD-1、抗CTLA-4、抗CD137、抗LAG-3、抗TIM-3、抗OX40和/或抗GITR组成的组中的至少一种免疫检查点抑制剂组合使用。
12.根据前述权利要求中任一项所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段作为单剂量或作为多剂量施用。
13.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体和治疗有效量的如前述权利要求中任一项所限定的抗体或片段，其中所述药物组合物适于以0.1至1mg/kg体重的剂量施用所述抗体或片段。
14.根据权利要求13所述的药物组合物，其适于在较长的时间内控制释放所述抗体或片段，优选用于持续释放所述抗体或片段的储库型制剂。
15.根据权利要求13或14所述的药物组合物，其适于静脉内施用或皮下施用。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种激动性单克隆抗体或其抗原结合片段，其与人cd40受体特异性结合并且能够不依赖于fcγ介导的cd40受体交联而诱导cd40信号传导，其中所述抗体包含
2.根据权利要求1所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段以0.2至0.9mg/kg体重、优选0.3至0.7mg/kg、或0.4至0.5mg/kg的剂量施用。
3.根据权利要求1或2所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体为人源化igg1lala抗体。
4.根据权利要求3所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体至少包含在人igg1fc区的l234a和l235a或人igg4 fc区的s228p和l235e处的氨基酸取代。
5.根据前述权利要求中任一项所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体包含与seq id no:1的vh区具有至少85％同一性的重链可变(vh)区。
6.根据前述权利要求中任一项所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述抗体包含与seq id no:2的vl区具有至少85％同一性的轻链可变(vl)区。
7.根据前述权利要求中任一项所述的用于用途的抗体或其片段，其用于预防或治疗感染性疾病和/或癌症。
8.根据权利要求7所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述癌症为实体瘤。
9.根据权利要求7或8所述的用于用途的抗体或其片段，其中所述癌症选自包括以下的组：胰脏癌、晚期胰腺...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·费舍尔，
申请(专利权)人：MAB发现股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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