【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物标志物检测，具体涉及一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法。
技术介绍
1、生物标志物是可以被客观测量和评价的指标，用来反映机体的不同生理或病理状态，其在生物体内发挥重要作用。n-乙酰天冬氨酸(naa)由天冬氨酸和乙酰辅酶a合成，且主要存在于神经元中。研究表明内源性naa含量的变化与脑损伤及多种神经系统疾病相关联(如：阿尔兹海默病、帕金森病)，是评估神经元状态、数量和活力的重要生物标志物。而另一个生物标志物n-乙酰天冬氨酰谷氨酸(naag)存在于脑内，其在创伤性脑损伤、中风、癫痫、精神分裂症和与年龄相关的神经退行性疾病中扮演着重要作用。此外，n-乙酰谷氨酸(nag)的水平降低会导致高氨血症，进而引起中枢神经系统功能障碍，出现脑水肿、精神状态改变、癫痫发作、昏迷，甚至可能死亡。鉴于naa、naag、nag在人脑中的重要性，同时考虑到它们在脑组织样本中浓度极低，给常规检测技术带来了新的挑战。因此，迫切需要建立一种高灵敏度、高选择性的方法同时对脑组织中内源性naa、naag及nag进行萃取富集和跟踪检测。
2、由于实际样品基质复杂，目标分析物含量较低，从实际样品(如脑组织)中准确定量目标分析物仍然具有较大的挑战。目前naa、naag和nag测定时样品前处理方法包括液液萃取、衍生化和树脂萃取。然而，这些前处理方法均存在一些不足。液液萃取会消耗大量的有机溶剂；衍生化方法相当复杂和耗时，有时还存在衍生化不完全和产生副产物的问题。树脂萃取是利用市售的diaion sk-1(阳离子交换剂)和diaion
技术实现思路
1、为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，用以解决现有的检测方法存在测试成本高、原料消耗大、操作复杂等技术问题。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
3、本专利技术公开了一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，包括以下步骤：
4、s1：采用3-(三甲氧基甲硅基)甲基丙烯酸丙酯改性毛细管柱内壁，得到改性后的毛细管柱；随后将单体、交联剂、致孔剂和引发剂混合后，注入改性后的毛细管柱内，进行聚合反应，反应结束后得到poly(gma-co-edma)有机聚合物毛细管整体柱；
5、s2：在poly(gma-co-edma)有机聚合物毛细管整体柱中通入盐酸后，冲洗至洗涤液呈中性后注入三乙胺溶液进行反应，反应结束后得到tea@poly(gma-co-edma)有机聚合物毛细管整体柱；
6、s3：采用tea@poly(gma-co-edma)有机聚合物毛细管整体柱制备萃取装置，随后采用萃取装置对待测脑组织样品溶液中的目标分析物进行分析，采用洗脱溶剂进行洗脱，收集洗脱液进行含量测定。
7、进一步地，s1中，所述单体为甲基丙烯酸缩水甘油酯；所述交联剂为甲基丙烯酸乙二醇酯；所述致孔剂为正丙醇/1,4-丁二醇/水；所述引发剂为偶氮二异丁腈。
8、进一步地，所述单体、交联剂、致孔剂和引发剂的质量比为(100～140)：(20～60)：(170～260)：(1.2～2)。
9、进一步地，所述正丙醇、1,4-丁二醇和水的重量比为(100～140)：(60～100)：(10～20)。
10、进一步地，s1中，所述聚合反应的反应温度为50～70℃，时间为18～32h。
11、进一步地，s2中，在poly(gma-co-edma)有机聚合物毛细管整体柱中通入盐酸后，在室温下密封12h～20h，用水冲洗至洗涤液呈中性后使用乙腈冲洗。
12、进一步地，s2中，所述盐酸、三乙胺溶液和s1中的单体的用量比为(1～3)ml：(1～3)ml：(100～140)mg；
13、反应的温度为80℃，时间为12h。
14、进一步地，s3中，所述待测脑组织样品溶液的ph值为6.0；所述待测脑组织样品溶液中添加有体积分数为10％的乙腈。
15、进一步地，s3中，所述待测脑组织样品溶液的体积为1.0ml。
16、进一步地，s3中，所述洗脱溶剂为含10％甲酸的丙酮。
17、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
18、本专利技术公开了一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，采用3-(三甲氧基甲硅基)甲基丙烯酸丙酯改性毛细管柱内壁，得到表面带有双键的改性后的毛细管柱，随后采用特定的单体、交联剂、致孔剂、引发剂进行反应，得到poly(gma-co-edma)有机聚合物毛细管整体柱，随后依次通入盐酸、三乙胺溶液进行反应，得到tea@poly(gma-co-edma)有机聚合物毛细管整体柱；将合成的含有季铵盐的有机聚合物毛细管整体柱连接到微量注射泵上实现it-spme，通过强阴离子交换作用选择性富集目标分析物；该方法建立了一种有效富集和高灵敏分析脑组织中重要生物标志物naa、naag和nag的新方法，tea@poly(gma-co-edma)有机聚合物毛细管整体柱上的季铵盐基团能够与naa、naag和nag产生强阴离子交换作用，达到选择性富集naa、naag和nag的目的；该方法也是迄今为止检测naa、naag和nag最灵敏的方法；根据相关实验结果表明，该方法首次实现了5mg脑组织样本中内源性naa、nag和naag的检出，与以往报道的需要40mg～1g脑组织样本的方法相比，本方法极大地减少了样本消耗，有利于脑疾病的病理生理学和治疗研究；在优化条件下，该方法的线性范围宽、精密度好、检测限低，具有广阔的应用前景。
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1.一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，S1中，所述单体为甲基丙烯酸缩水甘油酯；所述交联剂为甲基丙烯酸乙二醇酯；所述致孔剂为正丙醇/1,4-丁二醇/水；所述引发剂为偶氮二异丁腈。
3.根据权利要求2所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，所述单体、交联剂、致孔剂和引发剂的质量比为(100～140)：(20～60)：(170～260)：(1.2～2)。
4.根据权利要求3所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，所述正丙醇、1,4-丁二醇和水的重量比为(100～140)：(60～100)：(10～20)。
5.根据权利要求1所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，S1中，所述聚合反应的反应温度为50～70℃，时间为18～32h。
6.根据权利要求1所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其
7.根据权利要求1所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，S2中，所述盐酸、三乙胺溶液和S1中的单体的用量比为(1～3)mL：(1～3)mL：(100～140)mg；
8.根据权利要求1所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，S3中，所述待测脑组织样品溶液的pH值为6.0；所述待测脑组织样品溶液中添加有体积分数为10％的乙腈。
9.根据权利要求1所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，S3中，所述待测脑组织样品溶液的体积为1.0mL。
10.根据权利要求1所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，S3中，所述洗脱溶剂为含10％甲酸的丙酮。
...【技术特征摘要】
1.一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，s1中，所述单体为甲基丙烯酸缩水甘油酯；所述交联剂为甲基丙烯酸乙二醇酯；所述致孔剂为正丙醇/1,4-丁二醇/水；所述引发剂为偶氮二异丁腈。
3.根据权利要求2所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，所述单体、交联剂、致孔剂和引发剂的质量比为(100～140)：(20～60)：(170～260)：(1.2～2)。
4.根据权利要求3所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，所述正丙醇、1,4-丁二醇和水的重量比为(100～140)：(60～100)：(10～20)。
5.根据权利要求1所述的一种选择性富集脑组织重要生物标志物的高灵敏分析方法，其特征在于，s1中，所述聚合反应的反应温度为50～70℃，时间为18～32h。
6.根据权利要求...
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