System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind()
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种外膜囊泡提取方法。
技术介绍
1、细胞外膜囊泡(omv)是一种由细胞释放的天然纳米级囊泡,它可通过膜融合、受体-配体相互作用、细胞内吞或吞噬等多种机制,将携带的生物活性分子从供体细胞转移到受体细胞。evs具有生物相容性、生物可降解性、低毒性和非免疫原性等优点,是纳米医学中最有前景的候选者之一。
2、细胞外膜囊泡(omv)是细胞主动释放的纳米级膜囊泡。基于其生物发生、大小和生物物理性质,可以进一步分类(例如外泌体、微泡)。尽管最初被认为是细胞碎片,并且因此被低估,但evs现在越来越被认为是细胞间通讯、疾病诊断和预后循环生物标志物的重要载体。尽管极具临床应用潜力,但由于目前缺乏对evs的灵敏制备和分析技术,所以在临床转化上仍有障碍。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种细菌外膜囊泡提取方法,本专利技术可以高效、大量制备的高纯度外膜囊泡。
2、本专利技术细菌外膜囊泡提取方法按以下步骤进行:
3、一、将菌液离心弃去上清,然后加入ty液体培养基中,30℃孵育6h;
4、二、外膜囊泡的收集:将经过6h孵育的悬浊液,3000g转速离心10min,弃去菌体,收集上清液;
5、三、差速离心:
6、3.1、300g,4℃,离心10min,弃沉淀;
7、3.2、2000g,4℃,离心10min,弃沉淀;
8、3.3、10,000g,4℃,离心30min,弃沉淀,收集上清液,用孔径0.45μ
9、3.4、滤液110000g,4℃,离心70min,弃上清液;
10、3.5、沉淀用pbs重悬沉淀,用孔径0.22μm膜过滤器过滤,滤液110000g,4℃,离心70min,弃上清液,得到初步细菌外膜囊泡;
11、四、将步骤三得到的初步细菌外膜囊泡加入pbs,然后加入碘克沙醇制成体积为3ml的含外膜囊泡的40%碘克沙醇悬液;
12、五、用灭菌水和碘克沙醇溶液,配置浓度为5%、10%、20%的碘克沙醇溶液;然后将将步骤四制备的3ml的含外膜囊泡的40%碘克沙醇悬液加入到超速离心管中,然后依次加入3ml浓度为20%的碘克沙醇溶液、3ml浓度为10%的碘克沙醇溶液和3ml浓度为5%的碘克沙醇溶液,之后100000g离心18h;
13、六、步骤五超速离心后将超速离心管中的悬液分12层,每层1ml,从上至下依次吸取1ml并保证移液器枪头每次不插入下一层;收集第4~6管,即得到细菌外膜囊泡。
14、本专利技术方法简单,能够获取73.5nm~115nm的细菌外膜囊泡,具有细菌外膜囊泡纯度高,外膜囊泡粒径分布集、外膜囊泡数量大等优点。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.细菌外膜囊泡提取方法,其特征在于该方法按以下步骤进行:
2.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡提取方法,其特征在于步骤四:将步骤三得到的初步细菌外膜囊泡加入到800μL的PBS中至体积为1mL,然后加入2mL浓度为60%的碘克沙醇制成体积为3mL含外膜囊泡、碘克沙醇浓度为40%的悬液。
3.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡提取方法,其特征在于步骤三获得的初步细菌外膜囊泡用200μl的8M尿素重悬沉淀后-80℃保存。
【技术特征摘要】
1.细菌外膜囊泡提取方法,其特征在于该方法按以下步骤进行:
2.根据权利要求1所述的细菌外膜囊泡提取方法,其特征在于步骤四:将步骤三得到的初步细菌外膜囊泡加入到800μl的pbs中至体积为1ml,然后加入2ml...
【专利技术属性】
技术研发人员:赵晓宇,周舒扬,甄涛,王佳龙,殷博,王玉江,夏海华,于冲,张云志,
申请(专利权)人:黑龙江省科学院微生物研究所,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。